研究目的:探討口腔鱗癌組織中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（Tumor associated macrophages,TAMs）的來源,檢測其對口腔舌鱗癌細(xì)胞系Cal-27細(xì)胞干性轉(zhuǎn)化的影響,為未來以TAMs為靶點(diǎn)的腫瘤免疫治療提供理論基礎(chǔ)。研究方法:1.首先利用免疫組織化學(xué)染色檢測TAMs在組織內(nèi)的分布浸潤情況。收集不同細(xì)胞的上清液作為條件培養(yǎng)基（conditional media,CM）,利用transwell共培養(yǎng)體系檢測不同CM對單核細(xì)胞的趨化作用。Real-Time PCR方法檢測相關(guān)細(xì)胞趨化因子（CCL2、CCL3、CXCL12、CXCL16、CSF-1）和M2型相關(guān)基因（CD163、CD206、Arg1）的表達(dá);2.其次體外利用佛波酯（PMA）和白介素-4（interleukin 4,IL-4）誘導(dǎo)形成M2型巨噬細(xì)胞。建立M2型巨噬細(xì)胞和Cal-27細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng),分別用Real-Time PCR和免疫熒光檢測M2型巨噬細(xì)胞對Cal-27細(xì)胞相關(guān)干性標(biāo)志物的影響,MTT檢測M2型巨噬細(xì)胞對Cal-27細(xì)胞耐藥性和增殖的作用,流式細(xì)胞術(shù)檢測M2型巨噬細(xì)胞對Cal-27細(xì)胞凋亡的作用,克隆... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

免疫組織化學(xué)染色檢測巨噬細(xì)胞分布(10x10)

利用Transwell共培養(yǎng)體系檢測單核細(xì)胞THP-1的募集。熒光顯微鏡下觀察可見，與空白對照組、正常上皮細(xì)胞組、口腔鱗癌細(xì)胞組相比，CAFs可趨化更多的單核細(xì)胞。如圖2.2A、B、C、D分別為con、Hacat、Cal-27、CAFs組。

圖2.2熒光顯微鏡觀察THP-1細(xì)胞的趨化(20x10)al-Time PCR檢測相關(guān)趨化因子的表達(dá)用Real-Time PCR檢測不同趨化因子在細(xì)胞中的表達(dá)。如圖2.3所示L2、CCL3、CXCL12、CXCL16、CSF-1在細(xì)胞中均存在不同程度的表Fs具有更強(qiáng)的趨化作用，且CAFs內(nèi)CCL2、CCL3、CXCL12表達(dá)量P<0.001），猜測可能是這幾種趨化因子引起單核細(xì)胞的趨化。


本文編號：3012031