目的篩選分析癌癥基因組圖譜（The cancer genome atlas,TCGA）數(shù)據(jù)庫中,與正常肝組織相比在肝癌組織中差異表達的MicroRNAs（miRNAs）,細胞表型實驗檢測差異表達的miRNAs（Different expression miRNAs,DEM）對肝癌細胞增殖、遷移和侵襲能力的影響。結合生物信息學方法預測并篩選差異表達miRNAs的候選靶基因,并驗證miR-33b-5p對靶基因基質金屬蛋白酶16（Matrix metalloproteinase-16,MMP16）的作用,進一步驗證miR-33b-5p調控肝癌細胞增殖和遷移的分子機制,為肝癌的分子機制及其早期診斷提供有力的理論依據(jù)。方法1通過TCGA數(shù)據(jù)庫對肝癌患者進行分析,篩選出具有差異表達的miRNAs,對其中差異表達最明顯的miRNAs進行物種保守性的分析,將物種保守性較高的miRNAs進行生存曲線的分析,篩選出與總生存率相關的miRNAs在肝癌患者不同臨床分期中的表達。2選擇正常肝細胞LO2、肝癌細胞HepG2和SMMC-7721,應用qRT-PCR檢測miR-767-5p、miR-183-5p、mi... 

【文章來源】：華北理工大學河北省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第1章 TCGA數(shù)據(jù)庫中臨床肝癌組織miRNAs的表達
    1.1 TCGA數(shù)據(jù)庫中臨床肝癌組織相關數(shù)據(jù)的獲取
        1.1.1 肝癌組織中差異表達miRNAs的篩選
        1.1.2 肝癌組織中差異表達miRNAs物種保守性的篩選
        1.1.3 肝癌組織中差異表達miRNAs與肝癌患者生存期的篩選
        1.1.4 肝癌組織中差異表達miRNAs與肝癌患者臨床資料的分析
        1.1.5 qRT-PCR驗證正常肝細胞LO2和肝癌細胞miRNAs的表達水平
    1.2 結果
        1.2.1 差異表達miRNAs在肝癌組織中的分析
        1.2.2 差異表達miRNAs物種保守性的分析
        1.2.3 差異表達miRNAs與肝癌患者生存期的分析
        1.2.4 差異表達miRNAs與肝癌患者臨床特征的分析
        1.2.5 差異表達miRNAs在肝癌組織中的表達
    1.3 討論
    1.4 小結
第2章 miRNAs對肝癌細胞生物學行為的影響
    2.1 主要實驗儀器和試劑
        2.1.1 實驗儀器
        2.1.2 實驗試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 qRT-PCR檢測正常肝細胞LO2 和肝癌細胞HepG2、SMMC-7721中miRNAs的表達水平
        2.2.3 CCK8檢測miRNAs對肝癌細胞HepG2和SMMC-7721 增殖能力的影響
        2.2.4 Transwell檢測miR-33b-5p對肝癌細胞HepG2遷移能力的影響
        2.2.5 Transwell檢測miR-33b-5p對肝癌細胞HepG2侵襲能力的影響
    2.3 實驗結果
        2.3.1 qRT-PCR檢測miRNAs表達水平
        2.3.2 miRNAs對肝癌細胞增殖能力影響
        2.3.3 miRNAs對肝癌細胞遷移能力影響
        2.3.4 miRNAs對肝癌細胞侵襲能力影響
    2.4 討論
    2.5 小結
第3章 miR-33b-5p在肝癌細胞中靶基因的確定
    3.1 實驗試劑和儀器
        3.1.1 實驗試劑
        3.1.2 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 miR-33b-5p靶基因的篩選
        3.2.2 熒光報告載體的構建
        3.2.3 熒光素酶實驗驗證MMP16是miR-33b-5p的靶基因
        3.2.4 qRT-PCR檢測miR-33b-5p對肝癌細胞中MMP16mRNA表達水平的影響
        3.2.5 Westernblot檢測miR-33b-5p對肝癌細胞中MMP16 蛋白表達水平的影響
        3.2.6 統(tǒng)計學處理
    3.3 結果
        3.3.1 miR-33b-5p候選靶基因的預測
        3.3.2 熒光素酶實驗驗證MMP16是miR-33b-5p的靶基因
        3.3.3 miR-33b-5p對肝癌細胞中MMP16 mRNA表達水平的影響
        3.3.4 miR-33b-5p對肝癌細胞中MMP16 蛋白表達水平的影響
    3.4 討論
    3.5 小結
參考文獻
結論
第4章 綜述
    4.1 肝癌的近況
    4.2 miRNAs的簡介
    4.3 miRNAs與腫瘤的關系
    4.4 具有癌基因作用的miRNAs
        4.4.1 miR-767與腫瘤
        4.4.2 miR-184與腫瘤
        4.4.3 miR-183與腫瘤
        4.4.4 miR-205與腫瘤
    4.5 具有抑癌基因作用的miRNAs
        4.5.1 miR-1258與腫瘤
        4.5.2 miR-490與腫瘤
        4.5.3 miR-139與腫瘤
        4.5.4 miR-33b與腫瘤
    參考文獻
致謝
在學期間研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Validation of a serum microRNA panel as biomarkers for early diagnosis of hepatocellular carcinoma post-hepatitis C infection in Egyptian patients[J]. Moustafa Nouh Elemeery,Ahmed Noah Badr,Marwa Anwar Mohamed,Doaa Ahmed Ghareeb.  World Journal of Gastroenterology. 2017(21)
[2]MicroRNAs as possible biomarkers for diagnosis and prognosis of hepatitis b- and c-related-hepatocellularcarcinoma[J]. Sirio Fiorino,Maria Letizia Bacchi-Reggiani,Michela Visani,Giorgia Acquaviva,Adele Fornelli,Michele Masetti,Andrea Tura,Fabio Grizzi,Matteo Zanello,Laura Mastrangelo,Raffaele Lombardi,Luca Di Tommaso,Arrigo Bondi,Sergio Sabbatani,Andrea Domanico,Carlo Fabbri,Paolo Leandri,Annalisa Pession,Elio Jovine,Dario de Biase.  World Journal of Gastroenterology. 2016(15)
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本文編號：3003662