目的:肝癌是一類侵襲性強(qiáng)、死亡率高,對(duì)臨床治療反應(yīng)差的惡性腫瘤,目前臨床上缺乏有效治療手段。近年來,腫瘤來源的exosome（TEX）作為抗原有效載體在腫瘤免疫治療中取得可喜進(jìn)展,本實(shí)驗(yàn)室在前期工作中,證明TEX可作為肝癌抗原的有效運(yùn)輸載體,促進(jìn)樹突狀細(xì)胞成熟和活化,從而在荷瘤小鼠上介導(dǎo)有效的抑瘤作用。然而,針對(duì)肝癌的復(fù)雜免疫微環(huán)境,亟需研發(fā)能夠進(jìn)一步提高樹突狀細(xì)胞免疫原性的新策略。有研究表明:預(yù)警素,特別是high mobility group nucleosome-binding protein 1（HMGN1）,具有招募樹突狀細(xì)胞（DC）及促進(jìn)樹突狀細(xì)胞活化的作用,被廣泛用作新型的免疫佐劑,但其在肝癌免疫治療中的應(yīng)用潛力有待研究。因此,在本研究中,擬利用基因工程及本實(shí)驗(yàn)室創(chuàng)建的exosomes功能化修飾平臺(tái),在肝癌體外、體內(nèi)模型上,系統(tǒng)研究HMGN1在肝癌免疫治療中的可行性及潛力。方法:通過慢病毒轉(zhuǎn)染肝癌Hepa1-6細(xì)胞系,以獲得穩(wěn)定表達(dá)HMGN1蛋白的Hepa1-6細(xì)胞(Hepa1-6_HMGN1);通過比較Hepa1-6_HMGN1細(xì)... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Hepa1-6HMGN1細(xì)胞系的建立及體外驗(yàn)證

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 結(jié)果2A），說明 HMGN1 蛋白表達(dá)不影響肝癌細(xì)胞的體外增殖速率。為進(jìn)一步評(píng)估HMGN1 蛋白對(duì)肝癌細(xì)胞成瘤性的影響，我們將 5x105的 Hepa1-6HMGN1與Hepa1-6 細(xì)胞分別接種到野生型 C57/BL6 小鼠腹股溝，在接種七天后，開始測(cè)量小鼠皮下瘤大小。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：Hepa1-6HMGN1皮下瘤的生長(zhǎng)速率顯著慢于Hepa1-6（圖 2B-C）。對(duì) Hepa1-6HMGN1荷瘤鼠生存期的測(cè)試結(jié)果表明：與 Hepa1-6皮下瘤相比，Hepa1-6HMGN1荷瘤鼠生存期顯著延長(zhǎng)（圖 2D）。以上結(jié)果說明，由于細(xì)胞表達(dá) HMGN1 蛋白，Hepa1-6 皮下瘤的生長(zhǎng)速度受到了明顯的抑制，這表明 HMGN1 蛋白在抗腫瘤免疫中發(fā)揮了關(guān)鍵的作用。

科大學(xué)碩士學(xué)位論文 過膜融合及細(xì)胞吞噬作用等方式參與到機(jī)體免疫當(dāng)中[36,37]。了獲得純度較高，形態(tài)結(jié)構(gòu)完整的 exosomes，我們選取 Hepa1-6細(xì)胞，通過超速離心和蔗糖梯度純化的方式提純細(xì)胞培養(yǎng)上清mes。通過電鏡觀察及納米顆粒跟蹤分析儀分析純化后的 exosomes經(jīng)過蔗糖梯度純化后的 exosomes 形態(tài)均一，結(jié)構(gòu)完整，可以觀察膜結(jié)構(gòu)（圖 3A-B）。為了檢測(cè)純化后的 exosomes 上的蛋白表達(dá)WB 技術(shù)檢測(cè) exosomes 上的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果表明：蔗糖梯度mes 表面攜帶有其源細(xì)胞系 Hepa1-6 所帶有的肝癌標(biāo)志性抗原 AFPALIX 作為 exosomes 的內(nèi)參蛋白表達(dá)（圖 3C）。這些結(jié)果說明經(jīng)somes 可作為有效的肝癌特異性抗原載體。


本文編號(hào)：2954642