目的研究人骨髓間充質(zhì)干細胞對胃癌KATO-III細胞生物學(xué)特性的調(diào)控機制。材料與方法利用Transwell小室構(gòu)建人胃癌細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞的非接觸共培養(yǎng)模型,進而將KATO-III細胞分為KATO-III細胞單獨培養(yǎng)組和KATO-III細胞與BMSCs非接觸共培養(yǎng)組,分別予以SDF-1α刺激、或/和阻滯劑（AMD3100或LY294002）阻滯。觀察SDF-1α刺激KATO-III細胞2h后的刺激作用。進而觀察AMD3100或LY294002預(yù)處理KATO-III細胞30 min后,再加入SDF-1α刺激兩小時后的效應(yīng)變化。此外,亦以無SDF-1α刺激為對照,由此分為不同亞組（表2）。所有檢測的目的細胞均為KATO-III細胞。采用CCK-8法檢測各組KATO-III細胞的增殖能力以及對氟尿嘧啶（5-FU）和順鉑的敏感性,Transwell小室法檢測其侵襲能力,半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法鑒定CD133、CXCR4、凋亡相關(guān)因子及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化因子的表達。結(jié)果與單獨培養(yǎng)相比,BMSCs可調(diào)控KATO-III細胞干細胞相關(guān)標記物的表達,促進KATO-III細胞增殖能力（... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

BMSCs遷移至腫瘤微環(huán)境Fig1.bonemarrowmesenchymalstemcellsmigrationtocancermicroenvironment[13]

3) 取2ml人BMSCs懸液加入共培養(yǎng)系統(tǒng)下室，1ml腫瘤細胞懸液加入上室進行培養(yǎng)，3天后用0.25%EDTA胰蛋白酶消化，收集細胞行后續(xù)實驗檢測。圖2. 非接觸共培養(yǎng)模型示意圖Fig 2 .the diagram of noncontact co-culture model注：A: 非接觸共培養(yǎng)模型示意圖；B:所用的Transwell小室六孔板；C:倒置顯微鏡示Transwell小室中的KATO-III細胞(×200)；D:倒置顯微鏡示六孔板下層的BMSC細胞(×200)；1.2.8 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）1) 胃癌 KATO-III 細胞株中總 RNA 的提取a. 提取各組共培養(yǎng)和單獨培養(yǎng)組的 KATO-III 細胞，在各組細胞沉淀中加入 1mLTrizol，充分吹打混勻后吸入 1.5mL EP 管中，室溫靜置 5min。0.4μm 孔徑半透膜

圖 3. 共培養(yǎng)前后兩種細胞 TGF-β和 SDF-1 mRNA 表達Fig 3. the expression of mRNA of TGF-βand SDF-1 before and after co-culture注：A: RT-PCR 檢測共培養(yǎng)組與單獨培養(yǎng)組兩種細胞 TGF-β和 SDF-1 mRNA 表達電泳條帶圖；B:共培養(yǎng)組與單獨培養(yǎng)組兩種細胞 TGF-β和 SDF-1 mRNA 表達柱狀圖；

【參考文獻】：
期刊論文
[1]TGF-β1誘導(dǎo)胃癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及促進干細胞特性獲得的研究[J]. 蔡成,俞繼衛(wèi),吳巨鋼,陸瑞祺,倪曉春,王守練,姜波健.  國際外科學(xué)雜志. 2012 (12)
[2]基質(zhì)細胞源性因子-1α/CXC趨化因子受體-4軸經(jīng)PI3K/Akt通路對胃癌細胞CD133表達的調(diào)控作用[J]. 姜海廣,陸瑞祺,吳巨鋼,周國才,俞繼衛(wèi),姜波健.  中華實驗外科雜志. 2012 (03)



本文編號：2925356