目的:揭示前列腺液中EZH2的表達(dá)在前列腺癌診斷中可能的臨床價(jià)值,為非損傷性前列腺癌診斷提供新思路。探索EZH2在去勢(shì)抵抗性前列腺癌多西他賽耐藥中的作用及其機(jī)制。方法:收集臨床有前列腺穿刺指征的可疑前列腺癌患者的前列腺液,根據(jù)病理結(jié)果分組;通過(guò)RT-PCR及酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)前列腺液中不同分組EZH2的表達(dá)水平;分析EZH2在前列腺癌早期診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值,以及與臨床病理特征之間的關(guān)系。通過(guò)間斷遞增濃度的方法構(gòu)建去勢(shì)抵抗性前列腺癌多西他賽耐藥細(xì)胞株P(guān)C-3/DR,并應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR和western-blotting（WB）檢測(cè)細(xì)胞株耐藥前后EZH2m RNA和蛋白的表達(dá)變化。再應(yīng)用流式細(xì)胞儀和MTT檢測(cè)了EZH2抑制單獨(dú)或者聯(lián)合多西他賽對(duì)耐藥細(xì)胞遷移、侵襲、凋亡和增殖能力的影響。然后,通過(guò)裸鼠皮下注射PC-3/DR細(xì)胞和EZH2穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的PC-3/DR細(xì)胞,建立了荷瘤鼠模型,并觀察了RNAi聯(lián)合多西他賽對(duì)腫瘤瘤體、荷瘤鼠體重等的影響。最后,應(yīng)用免疫組化和Western bloting檢測(cè)了瘤體的EZH2、H3-（me）3-K27和Bcl-2的蛋白表達(dá)。結(jié)果:前列腺癌組前列腺液中EZ... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：110 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

A）ELISA法檢測(cè)各組受試者前列腺液中EZH2蛋白的表達(dá)量；B)Real-timePCR定量分析各組受試者前列腺液中EZH2mRNA的表達(dá)量

類(lèi)別 tPSA fPSA EZH2 mRNA灰度比值EZH2 mRNA相對(duì)定量值年齡 0.075/0.695 0.043/0.801 -0.146/0.556 0.082/0.695Gleason 評(píng)分 -0.322/0.115 -0.433/0.059 0.866/0.000 0.839/0.000TNM 分期 0.239/0.522 0.086/0.776 0.056/0.845 -0.013/0.912前列腺體積 -0.232/0.442 -0.233/0.633 0.565/0.013 0.323/0.1985. PSA、EZH2 mRNA 灰度比值、相對(duì)定量值的靈敏度和特異度我們利用 ROC 曲線分析了 PSA、EZH2 灰度比值和相對(duì)定量值的靈敏度和特異度，結(jié)果如圖 1-2 和表 1-7 所示。結(jié)果顯示，EZH2 相對(duì)定量值的曲線下面積最大，達(dá)到 0.935，明顯高于 EZH2 mRNA 的灰度值和 PSA，說(shuō)明其診斷前列腺癌的價(jià)值優(yōu)于 EZH2 mRNA灰度值和 PSA。當(dāng) EZH2 mRNA 相對(duì)定量值取 0.66時(shí)，其敏感度為 100%，特異度達(dá)到 83.2%。

采用 SPSS 17.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差（ x ±SD）表示，采用 t檢驗(yàn)或者卡方檢驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)樣本均數(shù)，且均經(jīng)過(guò)正態(tài)性驗(yàn)證，若不符合正態(tài)性分布，則采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，采用單因素方差分析 (One-Way ANOVA)來(lái)分析多組數(shù)據(jù)， P < 0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié) 果1. CRPC 耐藥株 PC-3/DR 細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化為研究 EZH2 在去勢(shì)抵抗性前列腺癌多西他賽耐藥中的作用，我們首先采用多西他賽濃度遞增的方法誘導(dǎo)建立了 PC-3 多西他賽耐藥株，PC-3/DR。經(jīng)過(guò) 5 個(gè)多月逐步誘導(dǎo)后，PC-3/DR 可以在 50 nmol/l 多西他賽劑量下穩(wěn)定生長(zhǎng)。我們首先觀察了PC-3 耐藥前后的形態(tài)學(xué)變化。如圖 2-1 所示，PC-3/DR 細(xì)胞能貼壁生長(zhǎng)，與 PC-3 相比，附壁能力無(wú)明顯差異。相對(duì) PC-3，PC-3/DR 的形態(tài)有所改變，細(xì)胞由形態(tài)規(guī)則變?yōu)橄鄬?duì)不規(guī)則，核的體積變小。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]EZH2與腫瘤的研究進(jìn)展[J]. 曹春雨,楊凡,王艷林.  生命的化學(xué). 2016(05)
[2]EZH2基因在他莫昔芬耐藥乳腺癌MCF-7細(xì)胞系的表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞增殖的影響[J]. 駱廣濤,施航,王本忠.  中華乳腺病雜志(電子版). 2015(01)
[3]前列腺穿刺活檢術(shù)后并發(fā)癥的相關(guān)因素分析:多中心回顧性研究[J]. 劉秉乾,梁宏,張國(guó)兵,王義昆,武玉東,范志強(qiáng),馮超杰,胡建庭,張昊,潘周輝,王智勇,劉新奎,王玲,李鑫,魏金星.  中華泌尿外科雜志. 2014 (09)
[4]前列腺癌動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J]. 黃燁清,陳明.  東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2014(02)
[5]乳腺癌多西他賽耐藥的分子機(jī)制[J]. 吳新剛,黃謙,向安萍.  腫瘤防治研究. 2014(04)
[6]EZH2基因在腫瘤方面的研究進(jìn)展[J]. 王紅梅,呼群,蘇烏云.  醫(yī)學(xué)綜述. 2014(07)
[7]實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 王惠,錢(qián)沖,郭峰,關(guān)超,蘇長(zhǎng)青,白洪志.  種子. 2013(06)
[8]EZH2基因與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 呂佳,孫曉陽(yáng),丁漣沭.  臨床神經(jīng)病學(xué)雜志. 2012(02)
[9]前列腺特異性抗原異常患者前列腺液細(xì)胞學(xué)檢查的臨床分析[J]. 陳鑫,李宇峰,王萍,岳東民,葉青,楊卓,臧偉清,王廣浩,曲曉光,高福金.  中華泌尿外科雜志. 2012 (02)
[10]組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶EZH2在卵巢癌組織中的表達(dá)及意義[J]. 唐移忠,田金華,曾定元.  現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué). 2009(10)

碩士論文
[1]EZH2基因在前列腺癌中的表達(dá)及其功能研究[D]. 王臻帆.蘇州大學(xué) 2011



本文編號(hào)：2924064