研究背景:膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,嚴重威脅人類的健康。探明膀胱癌的發(fā)生發(fā)展機制,尋找新的治療靶點是改善膀胱癌患者預后的關鍵。microRNA是由大約為22個核糖核苷酸組成的非編碼單鏈RNA分子。大量的報道顯示出,microRNA在諸多腫瘤中都呈現(xiàn)為異常表達,并影響細胞內(nèi)癌癥相關基因的表達與調控,從而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。mirco RNA已經(jīng)成為新型的腫瘤分子標志物及治療靶點。Rb基因是常見的抑癌基因。Rb基因的突變或異常表達與癌癥的進展密切相關。我們通過查閱相關的文獻和前期的篩選,假設miR-6838可能通過抑制Rb通路誘發(fā)膀胱癌,但上述科學假設仍有待進一步的研究來證實。研究目的:本課題擬闡明miR-6838調控膀胱癌細胞增殖與侵襲能力的分子機制,探討miR-6838介導膀胱癌發(fā)生發(fā)展的可能機制,為后續(xù)靶向miR-6838治療膀胱癌提供理論依據(jù)。研究對象和方法:本研究中主要包括90例膀胱腫瘤臨床樣本（包括30例膀胱原位癌,30例T1/T2期膀胱癌和30例T3/T4期膀胱癌）的癌癥手術中收集膀胱癌組織標本、T24膀胱腫瘤細胞系及HEK293T細胞。首先在轉錄及翻譯水平,... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
主要英文縮寫詞表
第1章 文獻綜述
    一、突變的DNA修復基因在膀胱癌中的作用和意義
        1.1 膀胱癌的發(fā)病機制及治療進展
            1.1.1 膀胱癌的發(fā)病機制即DDR基因的發(fā)現(xiàn)
            1.1.2 MIBC的新的治療方法和靶點
        1.2 MIBC中DDR基因量的改變
            1.2.1 ERCC2在膀胱癌中的作用
            1.2.2 最常見的突變DDR基因ATM
            1.2.3 錯配修復基因MMR
        1.3 MIBC中DDR基因生物學特性的改變
        1.4 目前的治療方法在臨床中的應用
    二、微小RNA概述
        2.1 miRNA
        2.2 miRNA生物發(fā)生途徑
            2.2.1 轉錄
            2.2.2 由Drosha和Dicer處理
            2.2.3 RISC
            2.2.4 替代途徑
        2.3 miRNA靶標鑒定
            2.3.1 生物信息學目標預測
            2.3.2 生化目標識別
            2.3.3 基于組學的靶標識別策略
        2.4 miRNA調節(jié)途徑
        2.5 miRNAs的生物學作用
        2.6 疾病中miRNA的失調
            2.6.1 癌癥中miRNA的表達
            2.6.2 miRNA與代謝性疾病
            2.6.3 病毒的發(fā)病機理
        2.7 miRNA的診斷標記
            2.7.1 miRNA的檢測方法
            2.7.2 細胞外液的miRNA
        2.8 miRNA作為治療靶點
            2.8.1 miRNA的模仿和抑制劑
            2.8.2 miRNA通路的小分子抑制劑
        2.9 基因組編輯方法
    三、Rb通路在抑癌功能，干細胞，代謝和炎癥反應中的作用
        3.1 Rb基因突變與腫瘤
            3.1.1 RB基因失活與視網(wǎng)膜母細胞瘤
            3.1.2 Rb在腫瘤進展中的作用機制
        3.2 Rb失活誘導的干細胞樣特征
        3.3 Rb的失活促進促炎信號傳導
        3.4 Rb失活細胞內(nèi)ROS微調的調節(jié)反饋機制
        3.5 RB對促炎因子的轉錄和轉錄后調控
引言
第2章 實驗部分
    第一部分 MiR-6838和Rb在膀胱癌細胞和組織中的表達研究
        1 實驗材料
            1.1 膀胱癌細胞
            1.2 膀胱癌癌組織及癌旁組織
            1.3 主要儀器
            1.4 主要試劑
            1.5 主要溶劑配制
        2 實驗方法
            2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2 實時熒光定量PCR分析
            2.3 Western blot
            2.4 統(tǒng)計分析
        3 結果
            3.1 膀胱癌組織中MiR-6838表達水平的檢測
            3.2 膀胱癌細胞中MiR-6838表達水平的檢測
            3.3 膀胱癌細胞中Rb蛋白表達水平的檢測
        4 小結
    第二部分 MiR-6838對膀胱癌細胞生物學行為的影響
        1 實驗材料
        2 實驗方法
            2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2 細胞轉染
            2.3 熒光定量PCR分析
            2.4 細胞侵襲實驗
            2.5 細胞增殖和凋亡檢測
            2.6 統(tǒng)計分析
        3 結果
            3.1 MiR-6838過表達對膀胱癌細胞生物學行為的影響
                3.1.1 MiR-6838過表達對膀胱癌細胞增殖的影響
                3.1.2 MiR-6838過表達對膀胱癌細胞凋亡的影響
                3.1.3 MiR-6838過表達對膀胱癌細胞侵襲的影響
            3.2 抑制MiR-6838表達對膀胱癌細胞生物學行為的影響
                3.2.1 抑制MiR-6838表達對膀胱癌細胞增殖的影響
                3.2.2 抑制MiR-6838表達對膀胱癌細胞凋亡的影響
                3.2.3 抑制MiR-6838表達對膀胱癌細胞侵襲的影響
        4 小結
    第三部分 MiR-6838靶基因及其促癌機制初步研究
        1 實驗材料
        2 實驗方法
            2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2 'UTR螢光素酶基因報道分析
            2.3 細胞侵襲實驗
            2.4 細胞增殖和凋亡檢測
            2.5 Western blot
            2.6 統(tǒng)計分析
        3 結果
            3.1 MiR-6838直接靶向Rb基因
            3.2 調節(jié)MiR-6838對Rb蛋白及細胞周期蛋白和侵襲相關蛋白的影響
            3.3 調節(jié)Rb蛋白對T24細胞的增殖、凋亡和侵襲能力的影響
        4 小結
第3章 討論
第4章 全文結論
第5章 參考文獻
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Retinoblastoma tumor suppressor functions shared by stem cell and cancer cell strategies[J]. Susumu Kohno,Shunsuke Kitajima,Nobunari Sasaki,Chiaki Takahashi.  World Journal of Stem Cells. 2016(04)



本文編號：2921775