研究背景:膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,嚴(yán)重威脅人類的健康。探明膀胱癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制,尋找新的治療靶點(diǎn)是改善膀胱癌患者預(yù)后的關(guān)鍵。microRNA是由大約為22個(gè)核糖核苷酸組成的非編碼單鏈RNA分子。大量的報(bào)道顯示出,microRNA在諸多腫瘤中都呈現(xiàn)為異常表達(dá),并影響細(xì)胞內(nèi)癌癥相關(guān)基因的表達(dá)與調(diào)控,從而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。mirco RNA已經(jīng)成為新型的腫瘤分子標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)。Rb基因是常見的抑癌基因。Rb基因的突變或異常表達(dá)與癌癥的進(jìn)展密切相關(guān)。我們通過(guò)查閱相關(guān)的文獻(xiàn)和前期的篩選,假設(shè)miR-6838可能通過(guò)抑制Rb通路誘發(fā)膀胱癌,但上述科學(xué)假設(shè)仍有待進(jìn)一步的研究來(lái)證實(shí)。研究目的:本課題擬闡明miR-6838調(diào)控膀胱癌細(xì)胞增殖與侵襲能力的分子機(jī)制,探討miR-6838介導(dǎo)膀胱癌發(fā)生發(fā)展的可能機(jī)制,為后續(xù)靶向miR-6838治療膀胱癌提供理論依據(jù)。研究對(duì)象和方法:本研究中主要包括90例膀胱腫瘤臨床樣本（包括30例膀胱原位癌,30例T1/T2期膀胱癌和30例T3/T4期膀胱癌）的癌癥手術(shù)中收集膀胱癌組織標(biāo)本、T24膀胱腫瘤細(xì)胞系及HEK293T細(xì)胞。首先在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平,... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
主要英文縮寫詞表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    一、突變的DNA修復(fù)基因在膀胱癌中的作用和意義
        1.1 膀胱癌的發(fā)病機(jī)制及治療進(jìn)展
            1.1.1 膀胱癌的發(fā)病機(jī)制即DDR基因的發(fā)現(xiàn)
            1.1.2 MIBC的新的治療方法和靶點(diǎn)
        1.2 MIBC中DDR基因量的改變
            1.2.1 ERCC2在膀胱癌中的作用
            1.2.2 最常見的突變DDR基因ATM
            1.2.3 錯(cuò)配修復(fù)基因MMR
        1.3 MIBC中DDR基因生物學(xué)特性的改變
        1.4 目前的治療方法在臨床中的應(yīng)用
    二、微小RNA概述
        2.1 miRNA
        2.2 miRNA生物發(fā)生途徑
            2.2.1 轉(zhuǎn)錄
            2.2.2 由Drosha和Dicer處理
            2.2.3 RISC
            2.2.4 替代途徑
        2.3 miRNA靶標(biāo)鑒定
            2.3.1 生物信息學(xué)目標(biāo)預(yù)測(cè)
            2.3.2 生化目標(biāo)識(shí)別
            2.3.3 基于組學(xué)的靶標(biāo)識(shí)別策略
        2.4 miRNA調(diào)節(jié)途徑
        2.5 miRNAs的生物學(xué)作用
        2.6 疾病中miRNA的失調(diào)
            2.6.1 癌癥中miRNA的表達(dá)
            2.6.2 miRNA與代謝性疾病
            2.6.3 病毒的發(fā)病機(jī)理
        2.7 miRNA的診斷標(biāo)記
            2.7.1 miRNA的檢測(cè)方法
            2.7.2 細(xì)胞外液的miRNA
        2.8 miRNA作為治療靶點(diǎn)
            2.8.1 miRNA的模仿和抑制劑
            2.8.2 miRNA通路的小分子抑制劑
        2.9 基因組編輯方法
    三、Rb通路在抑癌功能，干細(xì)胞，代謝和炎癥反應(yīng)中的作用
        3.1 Rb基因突變與腫瘤
            3.1.1 RB基因失活與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤
            3.1.2 Rb在腫瘤進(jìn)展中的作用機(jī)制
        3.2 Rb失活誘導(dǎo)的干細(xì)胞樣特征
        3.3 Rb的失活促進(jìn)促炎信號(hào)傳導(dǎo)
        3.4 Rb失活細(xì)胞內(nèi)ROS微調(diào)的調(diào)節(jié)反饋機(jī)制
        3.5 RB對(duì)促炎因子的轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控
引言
第2章 實(shí)驗(yàn)部分
    第一部分 MiR-6838和Rb在膀胱癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)研究
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 膀胱癌細(xì)胞
            1.2 膀胱癌癌組織及癌旁組織
            1.3 主要儀器
            1.4 主要試劑
            1.5 主要溶劑配制
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析
            2.3 Western blot
            2.4 統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果
            3.1 膀胱癌組織中MiR-6838表達(dá)水平的檢測(cè)
            3.2 膀胱癌細(xì)胞中MiR-6838表達(dá)水平的檢測(cè)
            3.3 膀胱癌細(xì)胞中Rb蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)
        4 小結(jié)
    第二部分 MiR-6838對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.3 熒光定量PCR分析
            2.4 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
            2.5 細(xì)胞增殖和凋亡檢測(cè)
            2.6 統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果
            3.1 MiR-6838過(guò)表達(dá)對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
                3.1.1 MiR-6838過(guò)表達(dá)對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖的影響
                3.1.2 MiR-6838過(guò)表達(dá)對(duì)膀胱癌細(xì)胞凋亡的影響
                3.1.3 MiR-6838過(guò)表達(dá)對(duì)膀胱癌細(xì)胞侵襲的影響
            3.2 抑制MiR-6838表達(dá)對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
                3.2.1 抑制MiR-6838表達(dá)對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖的影響
                3.2.2 抑制MiR-6838表達(dá)對(duì)膀胱癌細(xì)胞凋亡的影響
                3.2.3 抑制MiR-6838表達(dá)對(duì)膀胱癌細(xì)胞侵襲的影響
        4 小結(jié)
    第三部分 MiR-6838靶基因及其促癌機(jī)制初步研究
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 'UTR螢光素酶基因報(bào)道分析
            2.3 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
            2.4 細(xì)胞增殖和凋亡檢測(cè)
            2.5 Western blot
            2.6 統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果
            3.1 MiR-6838直接靶向Rb基因
            3.2 調(diào)節(jié)MiR-6838對(duì)Rb蛋白及細(xì)胞周期蛋白和侵襲相關(guān)蛋白的影響
            3.3 調(diào)節(jié)Rb蛋白對(duì)T24細(xì)胞的增殖、凋亡和侵襲能力的影響
        4 小結(jié)
第3章 討論
第4章 全文結(jié)論
第5章 參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Retinoblastoma tumor suppressor functions shared by stem cell and cancer cell strategies[J]. Susumu Kohno,Shunsuke Kitajima,Nobunari Sasaki,Chiaki Takahashi.  World Journal of Stem Cells. 2016(04)



本文編號(hào)：2921775