發(fā)布時(shí)間：2020-12-16 08:51

　　一、研究背景與目的研究發(fā)現(xiàn)miRNA的表達(dá)異常與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān),miRNA可能成為腫瘤診斷和預(yù)后判斷的生物標(biāo)志物。本研究基于前期Solexa高通量測(cè)序及miRDeep2軟件預(yù)測(cè)的結(jié)果,對(duì)候選新miRNA進(jìn)行了二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,評(píng)估候選新miRNA與食管癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),進(jìn)一步評(píng)價(jià)它們的生物學(xué)功能,初步探討可能的調(diào)控機(jī)制,為尋找潛在的腫瘤標(biāo)志物及其臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支持。二、研究方法與結(jié)果（一）食管癌相關(guān)候選新miRNA的鑒定及與食管癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)研究基于前期對(duì)食管癌細(xì)胞RNA的Solexa高通量測(cè)序和miRDeep2軟件預(yù)測(cè)的結(jié)果,選擇了miRDeep2軟件評(píng)分最高的4個(gè)候選新miRNA,使用sflod在線預(yù)測(cè)網(wǎng)站分析候選新miRNA前體序列的二級(jí)結(jié)構(gòu),結(jié)果顯示4個(gè)候選新miRNA的前體序列都能以較低的自由能形成莖環(huán)結(jié)構(gòu),且成熟體序列分別位于莖環(huán)的3’及5’臂上。使用熒光定量PCR檢測(cè)候選新miRNA在食管癌細(xì)胞及食管上皮細(xì)胞中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示novel-miR-4885、novel-miR-13894、novel-miR-21009均能在食管癌細(xì)胞及食管上皮細(xì)胞中穩(wěn)定... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

候選新miRNA的PCR產(chǎn)物TA克隆測(cè)序峰圖

癌相關(guān)候選新 miRNA 的鑒定及與食管癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)研究13圖1-4. 熒光定量 PCR 檢測(cè)候選新 miRNA 在食管癌組織及癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)3.2 候選新 miRNA 與食管癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)分析為探討候選新 miRNA 與食管癌發(fā)病之間的關(guān)系，以 novelmiRNA 的相對(duì)表達(dá)(- Cт)為協(xié)變量，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行條件 logistic 回歸分析。結(jié)果顯示，novel-miR-4885、novel-miR-7121、novel-miR-21009 表達(dá)的升高能顯著增加食管癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(P<0.05)，而 novel-miR-13894 表達(dá)的升高不影響食管癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn) (P>0.05)。提示 novel- miR-4885、novel-miR-7121、novel-miR-21009 可能是食管癌的促癌因子 (表 1-4)。表1-4. 候選 novel-miRNA 與食管癌患病風(fēng)險(xiǎn)的條件 logistic 回歸分析novel-miRNA group β SE Wald P OR 95%CInovel-miR-4885 cancer tissue 0.208 0

第二章 候選新 miRNA 的生物學(xué)功能研究21圖2-2. 候選新 miRNA 對(duì)食管癌細(xì)胞早期凋亡的影響，*P<0.05 與 miR-NC 比較3.4 候選新 miRNA 對(duì)食管癌細(xì)胞增殖的影響通過(guò)EdU染色成像法檢測(cè)miRNAmimic轉(zhuǎn)染后EC109細(xì)胞的增殖情況，novle-miR-4885、novel-miR-7121、novel-miR-13894、novel-miR-21009 轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖率分別為(37.25±4.09)%、(31.32±3.53)%、(31.25±1.21)%、(30.71±4.25)%，與對(duì)照組(31.36±2.98)%相比，novel-miR-4885轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞增殖率顯著升高(P<0.05)，表明 novel-miR-4885 能促進(jìn)食管癌細(xì)胞的增殖；novel-miR-7121、novel-miR-13894、novel-miR-21009 轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖率與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(圖 2-3)。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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