目的:研究GDF11過(guò)表達(dá)對(duì)肝細(xì)胞癌細(xì)胞系SMMC-7721體內(nèi)及體外增殖能力的影響,并初步分析其可能的作用機(jī)制。方法:構(gòu)建重組質(zhì)粒,包被慢病毒。篩選GDF11過(guò)表達(dá)的SMMC-7721細(xì)胞系（Lenti-GDF11 group）,同時(shí)以空載體感染組（Lenti-GFP group）及野生型細(xì)胞組（Control group）為對(duì)照。分別于培養(yǎng)24、48、72、96、120、144h時(shí)采用CCK-8法檢測(cè)三種細(xì)胞體外增殖能力,繪制細(xì)胞增殖曲線(xiàn),檢測(cè)GDF11過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞體外增殖能力的影響;分別以500、1000、2000、5000個(gè)細(xì)胞的密度梯度接種,平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)GDF11過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞克隆形成能力的影響。配制不同梯度濃度的順鉑作用細(xì)胞24h,CCK-8法檢測(cè)GDF11過(guò)表達(dá)對(duì)SMMC-7721細(xì)胞體外順鉑敏感性的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)三種細(xì)胞細(xì)胞周期分布。同時(shí)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)組、空載體感染組及對(duì)照組細(xì)胞,建立裸鼠皮下移植瘤模型。記錄成瘤時(shí)間,繪制移植瘤體內(nèi)生長(zhǎng)曲線(xiàn),2周后,剖取腫瘤,稱(chēng)取瘤重。應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP-9000三步法檢測(cè)裸鼠移植瘤組織標(biāo)本中GDF11、Ki-67蛋白的表達(dá)及腫瘤微... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Westernblot驗(yàn)證各組細(xì)胞中GDF11蛋白的表達(dá)情況，從左至右依次

450nm 波長(zhǎng)的吸光度，繪制細(xì)胞增殖曲線(xiàn)。CCK-8 實(shí)驗(yàn)結(jié)胞組及陰性對(duì)照細(xì)胞組的生長(zhǎng)速度接近，增殖較快，差異DF11 過(guò)表達(dá) SMMC-7721 實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制，h 時(shí)細(xì)胞增殖抑制效應(yīng)最顯著（P<0.05）；表明 GDF11 過(guò)表胞癌 SMMC-7721 細(xì)胞的體外增殖能力（圖 2）。

板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè) GDF11 蛋白過(guò)表達(dá)對(duì) SMMC-7721 細(xì)胞克隆響。GDF11 過(guò)表達(dá)明顯抑制 SMMC-7721 細(xì)胞體外克隆形成能力。: Colony formation test was used to examine the colony formation averexpression coμld inhibit colony formation ability.F11 過(guò)表達(dá)增加肝細(xì)胞癌 SMMC-7721 細(xì)胞體外對(duì)順鉑的敏過(guò)不同處理的肝細(xì)胞癌 SMMC-7721 細(xì)胞經(jīng)不同濃度順鉑（2.5、5、g/ml）作用 24h，CCK-8 法測(cè)定各組細(xì)胞不同藥物濃度作用后的吸光抑制率。結(jié)果顯示，GDF11 過(guò)表達(dá)組 SMMC-7721 細(xì)胞對(duì)順鉑作照組更敏感，不同濃度的抑制率均高于對(duì)照組(見(jiàn)圖 4)，對(duì)照組及差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且當(dāng)順鉑濃度取 20μg/ml 及 40μg/ml 時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 三組細(xì)胞順鉑作用的 IC50 值分別為：野生型7721 細(xì)胞組 8.244μg/ml，空載體 SMMC-7721 細(xì)胞組為 7.818μg /m表達(dá) SMMC-7721 組為 5.232μg /ml，實(shí)驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組，GD加強(qiáng)細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性。


本文編號(hào)：2899303