目的:研究GDF11過表達(dá)對肝細(xì)胞癌細(xì)胞系SMMC-7721體內(nèi)及體外增殖能力的影響,并初步分析其可能的作用機制。方法:構(gòu)建重組質(zhì)粒,包被慢病毒。篩選GDF11過表達(dá)的SMMC-7721細(xì)胞系（Lenti-GDF11 group）,同時以空載體感染組（Lenti-GFP group）及野生型細(xì)胞組（Control group）為對照。分別于培養(yǎng)24、48、72、96、120、144h時采用CCK-8法檢測三種細(xì)胞體外增殖能力,繪制細(xì)胞增殖曲線,檢測GDF11過表達(dá)對細(xì)胞體外增殖能力的影響;分別以500、1000、2000、5000個細(xì)胞的密度梯度接種,平板克隆實驗檢測GDF11過表達(dá)對細(xì)胞克隆形成能力的影響。配制不同梯度濃度的順鉑作用細(xì)胞24h,CCK-8法檢測GDF11過表達(dá)對SMMC-7721細(xì)胞體外順鉑敏感性的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測三種細(xì)胞細(xì)胞周期分布。同時培養(yǎng)實驗組、空載體感染組及對照組細(xì)胞,建立裸鼠皮下移植瘤模型。記錄成瘤時間,繪制移植瘤體內(nèi)生長曲線,2周后,剖取腫瘤,稱取瘤重。應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP-9000三步法檢測裸鼠移植瘤組織標(biāo)本中GDF11、Ki-67蛋白的表達(dá)及腫瘤微... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Westernblot驗證各組細(xì)胞中GDF11蛋白的表達(dá)情況，從左至右依次

450nm 波長的吸光度，繪制細(xì)胞增殖曲線。CCK-8 實驗結(jié)胞組及陰性對照細(xì)胞組的生長速度接近，增殖較快，差異DF11 過表達(dá) SMMC-7721 實驗組細(xì)胞生長明顯受到抑制，h 時細(xì)胞增殖抑制效應(yīng)最顯著（P<0.05）；表明 GDF11 過表胞癌 SMMC-7721 細(xì)胞的體外增殖能力（圖 2）。

板克隆形成實驗檢測 GDF11 蛋白過表達(dá)對 SMMC-7721 細(xì)胞克隆響。GDF11 過表達(dá)明顯抑制 SMMC-7721 細(xì)胞體外克隆形成能力。: Colony formation test was used to examine the colony formation averexpression coμld inhibit colony formation ability.F11 過表達(dá)增加肝細(xì)胞癌 SMMC-7721 細(xì)胞體外對順鉑的敏過不同處理的肝細(xì)胞癌 SMMC-7721 細(xì)胞經(jīng)不同濃度順鉑（2.5、5、g/ml）作用 24h，CCK-8 法測定各組細(xì)胞不同藥物濃度作用后的吸光抑制率。結(jié)果顯示，GDF11 過表達(dá)組 SMMC-7721 細(xì)胞對順鉑作照組更敏感，不同濃度的抑制率均高于對照組(見圖 4)，對照組及差異無統(tǒng)計學(xué)差異，且當(dāng)順鉑濃度取 20μg/ml 及 40μg/ml 時，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 三組細(xì)胞順鉑作用的 IC50 值分別為：野生型7721 細(xì)胞組 8.244μg/ml，空載體 SMMC-7721 細(xì)胞組為 7.818μg /m表達(dá) SMMC-7721 組為 5.232μg /ml，實驗組明顯低于對照組，GD加強細(xì)胞對順鉑敏感性。


本文編號：2899303