背景:肝癌為全世界高發(fā)、高致死癌癥之一,術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率高是肝癌患者5年生存率低的重要因素,積極的抗轉(zhuǎn)移治療將讓患者受益。DHX32最先由Abdelhaeem教授于2002年報道在急性淋巴細(xì)胞白血病中表達(dá)下調(diào),并與淋巴細(xì)胞的分化有關(guān),但其中的機(jī)制尚未明確。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌中DHX32表達(dá)上調(diào),并與結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲有關(guān)。初步探明,DHX32通過β-catenin/VEGFA信號通路,調(diào)控結(jié)直腸癌的血管生成;DHX32可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移、侵襲,并可能與Racl結(jié)合,但DHX32調(diào)控肝癌細(xì)胞遷移、侵襲的機(jī)制尚未闡明。目的:本論文旨在前期研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探索DHX32促進(jìn)肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的相關(guān)分子機(jī)制。研究對象:1)肝癌患者的病理組織石蠟切片;2)肝癌細(xì)胞株:MHCC-97H（穩(wěn)定敲低DHX32的MHCC-97H及其對照細(xì)胞株）、QGY-7701;3)BALB/c裸鼠。研究方法:我們采用IHC方法,分析肝癌及癌旁的正常組織中DHX32的表達(dá)情況,并采用logistic回歸的方法分析DHX32與臨床病理特征的關(guān)系;在體外表達(dá)、純化His-DHX32和GST-Rac1蛋... 

【文章來源】：廈門大學(xué)福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１．肝癌組織中ＤＨＸ３２蛋白的表達(dá)??Ｆｉｇｕｒｅ?３．１．?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ＤＨＸ３２?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＨＣＣ?（Ｔ）?ａｎｄ?ｔｈｅｉｒ??ａｄｊａｃｅｎｔ?ｎｏｒｍａｌ?ｔｉｓｓｕｅｓ?（Ｎ），?ＤＨＸ３２??

?ＧＳＴ?—ｍ０?ｍｍ?＾??圖３．３探索ＧＳＴ－ｐｕｌｌ?ｄｏｗｎ實驗的最佳條件??Ｆｉｇ?３．３?Ｅｘｐｌｏｒｉｎｇ?ｔｈｅ?ｏｐｔｉｍａｌ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ?ｆｏｒ?ｔｈｅ?ＧＳＴ－ｐｕｌｌ?ｄｏｗｎ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，??ｑｕａｎｔｉｔｙ：?Ｔｈｅ?ａｍｏｕｎｔ?ｏｆ?Ｈｉｓ－ＤＨＸ３２?ａｎｄ?ＧＳＴ－Ｒａｃｌ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ａｄｄｅｄ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ；??ｂｌｏｃｋ：ＢＳＡ?（％）?＆?ｂｌｏｃｋ?ｔｉｍｅ：?ｂｌｏｃｋ?ｕｓｅｄ?ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｔｉｍｅ?ｏｆ?ＢＳＡ?ｉｎ?ｔｈｅ??ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．??采用最適條件，重復(fù)實驗，最終結(jié)果如圖３．７所示，結(jié)果表明，在體外，??ＤＨＸ３２與Ｒａｃｌ可以直接作用。??Ｈｉｓ－ＤＨＸ３２?＿?＋?？?＋?－??ＧＳＴ－Ｒａｃ１?三?＋?＋?－－??ＧＳＴ?ｃ?－?？?＋?＋??Ｈｉｓ－ＤＨＸ３２?￣ｔ￣￣?—?￣｜］ａ４）ＨＸ３２??ＧＳＴ－Ｒａｃ１?－一一?１?ａ－Ｒａｃ１??ＧＳＴ?—￣＾｜］ａ－ＧＳＴ??圖３．４．?ＤＨＸ３２與Ｒａｃｌ相互結(jié)合??Ｆｉｇｕｒｅ?３．４．?Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＤＨＸ３２?ａｎｄ?Ｒａｃｌ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ．?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ａｎｄ??ｐｕｒｉｆｉｅｄ?Ｈｉｓ－ｔａｇｇｅｄ?ＤＨＸ３２?ａｎｄ?ＧＳＴ－ｔａｇｇｅｄ?Ｒａｃｌ?ｗｅｒｅ?ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ?ｔｏ?ＧＳＴ?ｐｕｌｌ－ｄｏｗｎ??ａｓｓａｙｓ?ａｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ．?ＤＨＸ３２，?ＧＴＰ－Ｒａｃｌ?ａｎｄ?ＧＴＰ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｗｅｒ

ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ）分別處理細(xì)胞Ｏｈ、４ｈ、８ｈ和丨２ｈ，然后收取細(xì)胞??裂解液，檢測Ｒａｃｌ的蛋白水平并用灰度分析的方法繪制蛋白變化曲線。結(jié)果如??圖３．８所示，和對照組相比，敲低ＤＨＸ３２使Ｒａｃｌ蛋白的降解速度加快，而過??表達(dá)ＤＨＸ３２使Ｒａｃｌ蛋白的降解速度減慢，說明ＤＨＸ３２通過與Ｒａｃｌ相互結(jié)合??并抑制它的泛素化降解


本文編號：2897639