目的:本研究旨在觀察芪蓮益髓清毒顆粒聯(lián)合化療治療急性白血病的臨床癥狀改善情況,評(píng)價(jià)芪蓮益髓清毒顆粒聯(lián)合化療治療急性白血病的臨床有效性和安全性,同時(shí)并探討芪蓮益髓清毒顆粒對(duì)急性白血病NB4細(xì)胞端粒相關(guān)蛋白的影響及作用機(jī)制,為其更好的用于白血病的治療尋求實(shí)驗(yàn)學(xué)支持,以期為提高白血病的臨床療效提供新的思路和方法。方法:1.臨床試驗(yàn):選擇2015年9月—2017年12月就診于山東省中醫(yī)院血液科的急性白血病初治患者30例,年齡在15-75歲之間,隨機(jī)分為中藥組和對(duì)照組,每組15例,中藥組給予常規(guī)化療方案加芪蓮益髓清毒顆粒,每次3袋,每日三次輔助治療;對(duì)照組給予常規(guī)化療方案。兩個(gè)療程后,分析兩組患者中醫(yī)癥候積分、療效與臨床血象。2.體外實(shí)驗(yàn):(1)培養(yǎng)急性白血病NB4細(xì)胞株。(2)CCK-8法檢測不同濃度、不同時(shí)間點(diǎn)芪蓮益髓清毒顆粒對(duì)NB4細(xì)胞體外生長的抑制作用,由此確定芪蓮益髓清毒顆粒的I50值。(3)Western-blot檢測用藥組RAP1、TRF1、TRF2、TZAP的蛋白表達(dá)水平。(4)實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢測用藥組RAP1、TRF1、TRF2、TZAP m RNA的表達(dá)水平。結(jié)果:1.臨床試驗(yàn):中醫(yī)癥候總積分比較:兩周期化療后,采用芪蓮益髓清毒顆粒聯(lián)合化療的中藥組的中醫(yī)癥候總積分明顯低于采用單純化療的對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。血象比較:治療前后兩組白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板等血象變化顯示,中藥組的血象恢復(fù)程度明顯優(yōu)于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。中醫(yī)癥候療效比較:中藥組的中醫(yī)癥候療效明顯優(yōu)于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.體外實(shí)驗(yàn):(1)CCK-8法示芪蓮益髓清毒顆粒對(duì)NB4細(xì)胞體外生長具有抑制作用,并且結(jié)果呈濃度、時(shí)間相關(guān)性。芪蓮益髓清毒顆粒作用于NB4細(xì)胞48h的IC50為62mg/m L。因此我們選取中劑量濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn),芪蓮益髓清毒顆粒濃度為60mg/m L(低于IC50值)。(2)Western-blot法檢測TZAP、TRF1、TRF2、RAP1蛋白的表達(dá),結(jié)果表明,中藥組與對(duì)照組比較可出現(xiàn)NB4細(xì)胞中TRF1蛋白表達(dá)增加;TRF2、RAP1、TZAP蛋白表達(dá)減少,有顯著性差異(P0.01)。Spearman相關(guān)系數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示:TRF2蛋白表達(dá)與TRF1、TZAP蛋白表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r1=-0.863、r2=-0.843);TRF1蛋白表達(dá)與TZAP表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.922)。(3)RT-PCR檢測基因表達(dá)結(jié)果與Western-blot蛋白表達(dá)結(jié)果改變基本相同,提示芪蓮益髓清毒顆�？赡芡ㄟ^基因轉(zhuǎn)錄水平影響蛋白表達(dá)。結(jié)論:我們選取的芪蓮益髓清毒顆粒對(duì)化療具有增效減毒的作用,在臨床輔助治療急性白血病方面具有一定的有效性與安全性。在體外實(shí)驗(yàn)研究中芪蓮益髓清毒顆粒表現(xiàn)出一定程度的抗癌活性,其作用機(jī)制可能與上調(diào)TRF1、TZAP、RAP1蛋白表達(dá)水平;下調(diào)TRF2蛋白表達(dá)水平,以誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡加速有關(guān),為芪蓮益髓清毒顆粒在臨床上的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R733.71
【文章目錄】：
提要
Abstract
引言
第一部分 芪蓮益髓清毒顆粒聯(lián)合化療治療急性白血病的臨床觀察
    1.臨床資料
        1.1 病例來源
        1.2 病例分組
    2.試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)
        2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)
        2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)
        2.3 脫落與剔除標(biāo)準(zhǔn)
    3.研究方法
        3.1 治療方法
        3.2 支持治療
    4.觀察指標(biāo)
        4.1 安全性觀測
        4.2 療效性觀測
    5.療效判定
        5.1 中醫(yī)證候分級(jí)：（見表 1）
        5.2 療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)
    6.統(tǒng)計(jì)方法
    結(jié)果
        1.病例入組情況
        2.兩組間基數(shù)比較
            2.1 兩組患者急性白血病各分型所占比例比較
            2.2 兩組患者治療前一般情況比較
            2.3 兩組患者治療前血象比較
        3.治療結(jié)果分析
            3.1 兩組治療前后中醫(yī)證候積分比較
            3.2 兩組中醫(yī)癥候療效比較
            3.3 兩組治療前后外周血象比較
第二部分 芪蓮益髓清毒顆粒對(duì)急性白血病NB4細(xì)胞株端粒相關(guān)蛋白的影響及作用機(jī)制
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        1.3 實(shí)驗(yàn)藥品芪蓮益髓清毒顆粒儲(chǔ)存液配制
        1.4 細(xì)胞培養(yǎng)試劑
        1.5 細(xì)胞清洗液
        1.6 細(xì)胞活性檢測試劑
        1.7 WesternBlot試劑
        1.8 RT-PCR試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 CCK-8 法檢測細(xì)胞活性
        2.3 Western-blotting檢測RAP1、TRF1、TRF2、P16、TERT蛋白的表達(dá)
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        2.5 RT-PCR檢測RAP1、TRF1、TRF2、TZAP的 mRNA的表達(dá)
    3.分析方法
    4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 CCK-8 法檢測細(xì)胞活性
        4.2 Western-blotting檢測TRF1、TRF2、RAP1、TZAP蛋白表達(dá)水平改變及相關(guān)性
        4.3 RT-PCR檢測TRF1、TRF2、RAP1、TZAP mRNA表達(dá)水平改變
第三部分 討論
    1.中醫(yī)學(xué)對(duì)于急性白血病的認(rèn)識(shí)
        1.1 病名溯源
        1.2 病因病機(jī)
        1.3 現(xiàn)代中醫(yī)藥對(duì)于白血病的研究
    2.端粒相關(guān)蛋白
        2.1 端粒
        2.2 端粒結(jié)合蛋白復(fù)合體（Shelterin）
    3.芪蓮益髓清毒顆粒組方及研究
        3.1 中藥功效分析及現(xiàn)代藥理研究
        3.2 立方原則及配伍特點(diǎn)
    4.中醫(yī)“祛邪扶正法”在治療急性白血病中的作用
    5.研究結(jié)果分析
        5.1 芪蓮益髓清毒顆粒聯(lián)合化療治療急性白血病療效的臨床觀察
        5.2 芪蓮益髓清毒顆粒誘導(dǎo)NB4 細(xì)胞凋亡及影響4 種端粒相關(guān)蛋白表達(dá)研究的體外實(shí)驗(yàn)
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
發(fā)表文章

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2894303