原發(fā)性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一個世界性的主要的健康問題,因乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)和丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)的不斷傳播,其發(fā)生率在全球不斷地升高。多數(shù)患者是由HBV或HCV感染后導(dǎo)致慢性肝炎或肝硬化和非病毒性因素包括酒精性及非酒精性脂肪肝發(fā)展而來。少部分患者是由黃曲霉素暴露和一些遺傳因素導(dǎo)致。并且肝硬化的患者具有很高的肝癌發(fā)生危險。肝癌在早期階段可以治愈,但發(fā)展到晚期治療困難,并且患者的預(yù)后差。肝癌早期無明顯特異性的癥狀,這為早期發(fā)現(xiàn)肝癌帶來困難,因此探究可早期發(fā)現(xiàn)肝癌或可預(yù)測肝癌發(fā)生風(fēng)險的腫瘤標(biāo)志物具有十分重要的臨床意義。第一部分:中心體(centrosome)是細(xì)胞內(nèi)主要的微管組織中心,中心體復(fù)制調(diào)節(jié)異常會通過異常細(xì)胞分裂導(dǎo)致腫瘤發(fā)生和染色體錯誤分離。因此,準(zhǔn)確地維持中心體數(shù)目對細(xì)胞的正常存活十分重要。闡明中心體的調(diào)控機(jī)制對了解中心體過度復(fù)制與腫瘤的因果關(guān)系十分必要,并可能因而發(fā)掘出更有效的抗腫瘤治療方法。中心體數(shù)目增多即中心體擴(kuò)增(centrosome amplification,CA)是中心體異常的主要表現(xiàn)形式,存在于多種人類腫瘤中。自噬(autophagy)是一個細(xì)胞內(nèi)進(jìn)化上保守的過程,細(xì)胞質(zhì)和受損的細(xì)胞器等會被溶酶體內(nèi)的水解酶通過此過程降解后完成能量的循環(huán)利用。在細(xì)胞遇到營養(yǎng)缺乏或一些其它的刺激時,自噬可為細(xì)胞提供存活的機(jī)制。近年來在自噬與腫瘤的研究方面有了很多進(jìn)展,并且自噬缺陷與腫瘤的發(fā)生相關(guān)。有關(guān)肝癌內(nèi)中心體的情況的研究甚少,本研究應(yīng)用免疫熒光及免疫組織化學(xué)等多種實驗方法探究肝癌組織內(nèi)中心體及自噬的狀況。共收集了21例正常肝臟組織,77例肝癌組織包括HBV陽性63例和HBV陰性14例。并利用肝癌細(xì)胞系初步探索異常中心體與自噬間的潛在關(guān)系。實驗結(jié)果如下:人肝癌組織內(nèi)中心體數(shù)目明顯高于正常人肝臟組織內(nèi)的中心體數(shù)目,而自噬缺陷標(biāo)志物p62在肝癌組織內(nèi)的表達(dá)比正常肝臟內(nèi)高,并且HBV感染的肝癌組織內(nèi)中心體數(shù)目與p62的表達(dá)呈正相關(guān)。但是肝癌組織內(nèi)中心體數(shù)目在腫瘤組織病理學(xué)分級和TNM(Tumor Node Metastasis)分期中都沒有顯著的差異。分別觀察了HepRG細(xì)胞、HepG2細(xì)胞、HepG2.2.15細(xì)胞內(nèi)中心體的狀態(tài),發(fā)現(xiàn)除HepRG細(xì)胞內(nèi)中心體正常外,HepG2細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞均存在異常中心體,主要表現(xiàn)為數(shù)目異常。HepG2細(xì)胞、HepG2.2.15細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)入LC3,并進(jìn)一步p62熒光染色,含有HBV基因組的HepG2.2.15細(xì)胞內(nèi)LC3及p62的熒光強(qiáng)度均明顯高于HepG2細(xì)胞,即自噬的起始程度較高,但存在自噬缺陷,自噬過程不能完成。發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染HBV或HBx的HepG2細(xì)胞可同時觀察到中心體異常及p62高表達(dá),并且多余的中心體與p62可共定位,說明至少部分多余的中心體是因HBV或HBx誘導(dǎo)的自噬缺陷而不能降解導(dǎo)致。同時給予一組HepG2細(xì)胞饑餓刺激誘導(dǎo)自噬起始,其中心體數(shù)目較正常HepG2細(xì)胞中少,可能原因是多余中心體被自噬途徑降解來維持細(xì)胞存活。綜上,這些結(jié)果表明肝組織內(nèi)中心體異常增多可作為肝癌的腫瘤生物學(xué)標(biāo)志物。HBV可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞自噬起始但自噬完成受阻,異常的中心體不能通過自噬過程清除,這可能是HBV相關(guān)性肝癌內(nèi)存在中心體異常的潛在機(jī)制之一。第二部分:畸胎瘤衍生生長因子-1(Cripto-1,CR-1)是細(xì)胞膜錨定蛋白,在調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育過程中具有重要作用,其在多種人類腫瘤的形成和進(jìn)展中也起到重要角色,可刺激細(xì)胞增殖、上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化、遷移和腫瘤血管生成等。有研究證明,在胚胎發(fā)育期間的細(xì)胞發(fā)展調(diào)節(jié)和腫瘤形成過程中的細(xì)胞轉(zhuǎn)化具有共同的信號通路,表明胚胎信號通路調(diào)節(jié)異常激活可能致使成年組織中細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤進(jìn)展。據(jù)報道Cripto-1是有活性的膜相關(guān)共受體,并且Cripto-1的可溶性形式也在很多不同的體內(nèi)和體外實驗中證明其具有活性。很多腫瘤組織中檢測到Cripto-1的表達(dá)較正常組織中升高,近年研究中發(fā)現(xiàn)在一些腫瘤患者的血漿或血清內(nèi),其表達(dá)水平也升高,但在肝病患者尤其是肝癌患者的血清中Cripto-1的表達(dá)情況尚不清楚。我們應(yīng)用夾心酶聯(lián)免疫吸附法(sandwich-type ELISA)檢測330名包括肝癌、肝硬化、慢性肝炎的患者和明確沒有HBV或HCV感染的50名正常志愿者血清中Cripto-1的水平。實驗結(jié)果如下:肝癌患者血清Cripto-1的水平比正常對照組高,并且乙肝肝癌患者比丙肝肝癌患者高。另外,在乙肝肝癌患者血清中Cripto-1水平與甲胎蛋白(alpha fetal protein,AFP)相關(guān)。肝硬化和慢性肝炎患者血清內(nèi)Cripto-1的水平也高于志愿者對照。乙肝肝硬化患者血清Cripto-1水平比慢性乙型肝炎患者高,但在丙肝肝硬化和慢性丙型肝炎患者中無此差異。總之,肝癌患者血清Cripto-1水平升高,但其診斷乙肝相關(guān)性肝癌的敏感性較低,僅可作為臨床上診斷乙肝相關(guān)性肝癌的補(bǔ)充生物學(xué)標(biāo)志物。乙肝相關(guān)性肝臟疾病患者血清內(nèi)的高水平Cripto-1可能部分源于HBV感染。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7
【部分圖文】：

在正常細(xì)胞中，復(fù)制后的中心體移動到細(xì)胞的兩個有絲分裂紡錘體極。這個過程保證有絲分裂期染色體是動物細(xì)胞中主要的微管組織中心（microtubule-or此它在細(xì)胞間期調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動性、黏附力和極性，并極的形成。多種腫瘤中存在紡錘體極組織功能異常，可[36]，因為多余且常為異常的中心體可導(dǎo)致細(xì)胞分裂異陷的中心體常在腫瘤中發(fā)現(xiàn)，報道最多的中心體異常中心體擴(kuò)增（centrosome amplification, CA）[38]。染色基因的激活和腫瘤抑制基因的失控，這些都涉及到腫不均衡也涉及到腫瘤進(jìn)展和發(fā)展為腫瘤轉(zhuǎn)移的潛在可體的核心組成部分，有另一個獨特的功能是作為基體，纖毛和鞭毛在生理、發(fā)育和疾病中有關(guān)鍵的作用。的嚴(yán)格控制對機(jī)體健康十分重要。

[39]。染色體不穩(wěn)定性的潛在機(jī)制仍不清楚，但可能包括染色體凝聚力、有絲分檢查點功能、中心體復(fù)制數(shù)目、著絲點微管附著力和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)缺陷[40]。之前人們就猜測中心體擴(kuò)增和人類腫瘤發(fā)展之間的因果關(guān)系[41]，然而這個猜測的證仍未完全證實。中心體擴(kuò)增存在于多種腫瘤中，包括實體腫瘤和血液腫瘤，并及到多極有絲分裂、染色體不穩(wěn)定性和非整倍體的主要產(chǎn)生機(jī)制。存在兩個中體的細(xì)胞可形成雙極紡錘體，染色體可正常分離，細(xì)胞可以保持增殖。細(xì)胞進(jìn)有絲分裂時具有超過兩個中心體也可進(jìn)入多極有絲分裂或中心體聚集后任然成雙極紡錘體。多極分裂后的細(xì)胞為非整倍體，通常不能生存而少見。而聚集中心體會導(dǎo)致滯后染色體產(chǎn)生，如圖 1.2[42]。已知多個致癌基因和腫瘤抑制蛋定位于中心體，它們的異常調(diào)節(jié)可能導(dǎo)致中心體異常[43]。一些新的研究表明在些癌前病變中可檢測到中心體缺陷，同時也發(fā)現(xiàn)中心體變異增多與疾病進(jìn)展關(guān)。此外，它與染色體組型大量變異和患者預(yù)后差相關(guān)，支持其在人類腫瘤中重要臨床意義。

圖 1.3 自噬過程的描述Figure 1.3 Depiction of the process of autophagy1.3.3 自噬控制蛋白質(zhì)質(zhì)量自噬通過其基本的活動降解過多或受損的蛋白質(zhì)和細(xì)胞器，這對維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和功能具有關(guān)鍵作用。尤其對分裂后的不能通過細(xì)胞分裂稀釋細(xì)胞內(nèi)廢棄產(chǎn)物的細(xì)胞更為重要。自噬受損的小鼠會導(dǎo)致休眠細(xì)胞如神經(jīng)元和肝細(xì)胞堆積泛素和p62 標(biāo)記的蛋白內(nèi)容物、異常膜結(jié)構(gòu)和畸形的線粒體，伴隨著神經(jīng)元退化和肝損傷[92; 93]。泛素和 p62 標(biāo)記的內(nèi)容物已被證實與多種肝臟疾病有關(guān)，包括肝炎和原發(fā)性肝癌[94]。P62 積累會造成肝毒性，因為在自噬缺陷的小鼠細(xì)胞內(nèi)敲除 p62 基因會起到部分抑制蛋白內(nèi)容物的形成和肝損傷[95]。遺傳受損是否是一些人類肝臟疾病的病因以及刺激自噬是否會延緩疾病進(jìn)展十分值得探究。
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3 劉旭凌;邵周俊;殷霞;李季;吳堅;陳建杰;;阿德福韋酯聯(lián)合苦味葉下珠片對HBV陽性肝硬化患者IL-7、病毒載量及巨核細(xì)胞的影響[J];中國老年學(xué)雜志;2017年21期

4 曾學(xué)文;劉平華;;補(bǔ)益類中藥在乙肝相關(guān)性肝癌患者中應(yīng)用探討[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2009年21期

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6 王方寒;付偉偉;;三維適形放療聯(lián)合香菇多糖治療HBV感染的原發(fā)性肝癌的近期療效[J];臨床醫(yī)學(xué);2010年09期

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