腫瘤細胞即使在常氧條件下也會重編其代謝程序而優(yōu)先選擇糖酵解途徑供能,即“有氧糖酵解”。SIRT1是去乙�；讣易�,他們依賴于NAD~+對目的蛋白的賴氨酸進行去乙�；瘡亩鴮崿F(xiàn)其生物學功能,SIRT1在多種腫瘤中存在異常表達,其在糖代謝中的具體生物學作用還有待研究。本研究發(fā)現(xiàn),SIRT1可在癌細胞中通過干預腫瘤細胞糖酵解,抑制腫瘤生長。其具體作用和機制是:SIRT1在結直腸癌中低表達,且SIRT1可以抑制腫瘤細胞攝取葡萄糖和生成乳酸,SIRT1通過在細胞核中與PKM2結合影響PKM2 K433位的去乙�；�,從而使PKM2從細胞核中釋放至細胞質中,由共轉錄因子變?yōu)槠胀ǖ谋峒っ?而高活性的丙酮酸激酶不利于代謝產(chǎn)物的積聚,從而減慢腫瘤細胞的合成代謝,抑制腫瘤生長。
【學位單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R735.34
【部分圖文】：

華 中 科 技 大 學 博 士 學 位 論 文隨后我們提取了總 RNA 及蛋白，利用 Real-Time PCR 法及 Western blot 法，測定 SIR的表達，我們發(fā)現(xiàn)在腫瘤原發(fā)灶中，無論是 mRNA 水平還是蛋白水平 SIRT1 的平表達量均低于癌旁組織（mRNA: n=12，配對 t-test，p<0.001）。以上實驗結果提示在結直腸癌中，SIRT1 的表達低于配對的癌旁組織，其差異有統(tǒng)計學意義，SIRT1 能存在某種方式抑制腫瘤生長（如圖 1）。

圖 2A. SW480 細胞感染 Sh-Con 和 Sh-SIRT1，通過 western blot 驗證感染效果，通過 BrdU試驗檢測細胞 DNA 合成（**P<0.01）；B. SW480 細胞感染 Sh-Con 和 Sh-SIRT1，通過 CCK-8 檢測細胞增殖；C. SW480 細胞感染 Lenti-Con 和 Lenti-SIRT1，通過 western blot 驗證感染效果，通BrdU/PI 試驗檢測細胞 DNA 合成；D. SW480 細胞感染 Lenti-Con 和 Lenti-SIRT1，通過 CCK-8 檢測細胞增殖。3.在體內(nèi)實驗中證實 SIRT1 對結直腸癌腫瘤細胞增殖的影響通過上述試驗，我們已經(jīng)證實 SIRT1 在不同營養(yǎng)條件下對于細胞的增殖有著不的影響，那么 SIRT1 在體內(nèi)條件下究竟扮演著怎樣的角色呢？為了進一步證實 SIR的生物學功能，我們在 SW480 中感染 SIRT1 高表達病毒及陰性對照病毒，將對照細胞注射到裸鼠左側后腿皮下，將高表達 SIRT1 細胞注射到裸鼠右側后腿皮下，注

華 中 科 技 大 學 博 士 學 位 論 文為 1×106，給予裸鼠正常喂養(yǎng)，在注射后第六天開始測量移植瘤的長短徑，算腫瘤體積，繪制腫瘤生長曲線，我們發(fā)現(xiàn)高表達 SIRT1 的移植瘤體積明顯組，在第 36 天，處死裸鼠，并小心解剖，完整干凈地取出每個移植瘤，并小鼠肌肉或皮膚粘連，通過測量移植瘤的重量，進一步證實 SIRT1 對于腫瘤的影響。結果提示：高表達 SIRT1 在小鼠體內(nèi)也可明顯抑制結直腸腫瘤細胞拍照后將各個移植瘤一分為二，分別放置于液氮保存及 4%多聚甲醛固定液estern blot 證實體內(nèi)高表達 SIRT1 的可持續(xù)性。動物實驗結果與 SIRT1 在體低糖條件下的結果相一致，查閱相關文獻及我們自己檢測發(fā)現(xiàn)，這可能是因內(nèi)的血糖水平為 3.12±0.61mmol/L（0.56±0.11g/L），這與體外實驗時的低糖接近，因此在體內(nèi)試驗中，SIRT1 也表現(xiàn)出抑制腫瘤生長的作用（如圖 3）
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本文編號：2887869