目的:分析Twist在胰腺癌細胞株和胰腺癌組織中的表達,再通過體內(nèi)外實驗,觀察上調(diào)和下調(diào)Twist對胰腺癌細胞新生血管形成的影響,并試圖闡述Twist與VEGFA在胰腺癌中的相互關(guān)系,為基于靶向調(diào)控Twist在胰腺癌治療中的應(yīng)用提供有用的實驗參考。方法:利用免疫組化和RT-PCR方法檢測Twist和VEGFA在胰腺癌組織和胰腺癌旁正常組織中的表達,免疫組化分析胰腺癌組織中CD34的表達;利用慢病毒建立穩(wěn)定過表達和沉默Twist的胰腺癌細胞株并檢測穩(wěn)轉(zhuǎn)株中VEGFA和Twist蛋白的表達、細胞生長、細胞侵襲和其CM(conditioned medium,條件培養(yǎng)基)對體外人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)侵襲和血管新生的影響;利用沉默Twist及其對照的穩(wěn)轉(zhuǎn)胰腺癌細胞株建立人胰腺癌裸鼠原位移植瘤模型,觀察下調(diào)Twist對裸鼠胰腺腫瘤生長和轉(zhuǎn)移情況,明膠-氧化鉛血管造影法觀察Twist對胰腺腫瘤血管生長的影響,免疫組化法檢測Ki-67、CD34、VEGFA和Twist在兩組胰腺腫瘤組織中的表達。結(jié)果:Twist和VEGFA在胰腺癌組織中的表達較正常胰腺組織明顯升高,Twist mRNA的表達與胰腺癌臨床病理分期相關(guān),Twist和CD34以及VEGFA在胰腺癌組織中的表達均呈正相關(guān);成功建立過表達Twist的穩(wěn)轉(zhuǎn)胰腺癌Capan-1細胞株和沉默Twist的穩(wěn)轉(zhuǎn)胰腺癌Bxpc-3細胞株,過表達Twist可促進VEGFA在Capan-1細胞中的表達,而沉默Twist可抑制VEGFA在Bxpc-3細胞中的表達;上調(diào)Twist在Capan-1細胞中的表達后,Capan-1細胞生長明顯被促進,而下調(diào)Twist在Bxpc-3中的表達后可抑制體外Bxpc-3細胞增殖;過表達Twist可促進Capan-1細胞對體外HUVECs侵襲和血管新生誘導(dǎo)作用,而沉默Twist對上述作用產(chǎn)生抑制作用;下調(diào)Twist在胰腺癌細胞中的表達后可顯著延長裸鼠生存期,抑制裸鼠胰腺腫瘤生長,并減少轉(zhuǎn)移瘤數(shù)量;抑制Twist在胰腺癌中的表達可有效抑制體內(nèi)胰腺癌組織血管生長,同時抑制Ki-67、CD34和VEGFA的陽性表達。結(jié)論:通過體內(nèi)外實驗證實Twist與胰腺癌新生血管生長關(guān)系密切,抑制Twist在胰腺癌細胞中的表達可有效抑制體內(nèi)外胰腺癌細胞生長和血管新生,VEGFA和Twist可能在胰腺癌血管生長過程中起到協(xié)同作用,而Twist有望成為治療胰腺癌新的作用靶點。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.9
【部分圖文】：

個反應(yīng)體系中的Ｃｔ值與初始ｍＲＮＡ表達量的對數(shù)值存在一定的線性關(guān)系，初始??表達量越多則Ｃｔ值越小。為此，通過已知初始表達量的標準品即可繪制標準曲??線（圖１－２），橫坐標表示為初始表達量的對數(shù)值，而Ｃｔ值代表為縱坐標，利??用目的基因的Ｃｔ值后再從標準曲線中即可計算出目的基因的初始表達量。??１７??

ｌａ?？?２２??Ｃｙｃｌｅ??圖１－１：實時熒光定量ＰＣＲ反應(yīng)擴增曲線圖。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｌｏｔ．?Ｂａｓｅｌｉｎｅ－ｓｕｂｔｒａｃｔｅｄ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｖｅｒｓｕｓ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｃｙｃｌｅｓ．??熒光擴增曲線包括熒光背景信號階段、熒光信號指數(shù)倍增階段、熒光信號??線性增長階段及平臺期這四個階段。熒光背景信號階段中的熒光背景信號將擴??增的熒光信號覆蓋，從而難以準確獲取目的基因表達量。線性期和平臺期的目??的基因產(chǎn)物不再以指數(shù)式倍增，難以通過監(jiān)測ＰＣＲ產(chǎn)物量反映初始ＤＮＡ表達??量，只有在熒光信號指數(shù)倍增階段，ＰＣＲ產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間呈??線性關(guān)系。為了對這種線性關(guān)系進行分析，需要了解實時熒光定量ＰＣＲ反應(yīng)中??的兩個重要參數(shù)：熒光閾值和Ｃｔ值。前者是一個人為設(shè)定在任意熒光信號倍增??階段上的值，一般將其設(shè)置在４－１２個循環(huán)的熒光信號的１２倍左右區(qū)間。Ｃｔ值??是指當(dāng)反應(yīng)管中的熒光信號到達預(yù)先設(shè)定的閾值時所發(fā)生的ＰＣＲ循環(huán)次數(shù)，每??個反應(yīng)體系中的Ｃｔ值與初始ｍＲＮＡ表達量的對數(shù)值存在一定的線性關(guān)系，初始??表達量越多則Ｃｔ值越小。為此

Ｌｏｇ?Ｓｔａｒｔｉｎｇ?Ｑｕａａｔｉｆ／．ｃｃｐｙ?ｎｕｍｂｅｒ??令?ＳＹＢＲ?Ｅ＝?９９．９５Ｓ?ＲＡ２＝１．０００?ｓ＇ｏｐｅ＝－Ｓ．?３２４?＞－１〇１＝３４．?Ｓ７２??圖１－２：實時熒光定量ＰＣＲ反應(yīng)標準曲線圖。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｉｎ?ｑＲＴ－ＰＣＲ．??１．２．１．２實驗步驟??（１）
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 梁葉;王臻;謝思明;;Twist基因在口腔鱗狀細胞癌中的研究進展[J];海南醫(yī)學(xué);2017年04期

2 卓越;梁冬;;Twist和血管內(nèi)皮生長因子在非小細胞肺癌組織中的表達及其與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系[J];中國老年學(xué)雜志;2017年18期

3 譚琬玉;;Twist基因在人胃癌組織、癌旁組織、胃癌轉(zhuǎn)移灶組織中表達及臨床意義研究[J];大家健康(學(xué)術(shù)版);2015年24期

4 許紅;;新年愿望清單[J];家居主張;2017年01期

5 周勇;石堅;張朝躍;;TWIST基因及其在骨肉瘤中的研究進展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2014年06期

6 曾志;王敏;何旖旎;雙婷;閆效宇;;Twist蛋白在卵巢漿液性囊腺癌中的表達及臨床意義[J];腫瘤學(xué)雜志;2013年02期

7 陳芙蓉;任宏政;趙衛(wèi);王磊;樊琳蕊;陳奎生;;Twist蛋白在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的表達及意義[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;2011年05期

8 裴素霞;齊貴勝;;Twist和基質(zhì)金屬蛋白酶-2在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的表達分析[J];中國全科醫(yī)學(xué);2010年32期

9 周國鋒,李曉延,史耀武,徐濱士;Three-dimensional finite element analysis of critical pre-twist strain angle for torsional axis[J];Journal of Central South University of Technology(English Edition);2005年S2期

10 薛克敏,章爭榮,呂炎;Experimental Research on Photoplasticity of Twist-compression Deformation[J];Journal of Harbin Institute of Technology;1997年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉岸;Twist在促進胰腺癌血管生長中的作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

2 張燕齊;TWIST在胃癌及其血管生成中的作用與分子機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2007年

3 楊洲;反義Twist轉(zhuǎn)錄因子對上皮—間充質(zhì)轉(zhuǎn)型的調(diào)控及抑制胃癌轉(zhuǎn)移的研究[D];四川大學(xué);2007年

4 尹科;Twist在骨肉瘤轉(zhuǎn)移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中作用及機制[D];中南大學(xué);2013年

5 李娟清;Twist異常甲基化介導(dǎo)的細胞遷移和侵襲在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機制中的作用[D];浙江大學(xué);2017年

6 洪士開;Twist、上皮鈣粘連素、神經(jīng)鈣粘連素mRNA及蛋白在胃癌中的表達及其意義[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2009年

7 Bikash Rai（畢卡斯）;Twist基因影響結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

8 王文雙;Twist與卵巢癌侵襲、轉(zhuǎn)移及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)性研究[D];山東大學(xué);2012年

9 吳暢;TWIST調(diào)控TNF-α誘導(dǎo)的肝癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的實驗研究[D];中南大學(xué);2013年

10 張娟;Twist基因?qū)Y(jié)腸癌細胞增殖、凋亡及侵襲能力影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 丁登峰;TWIST、VEGF在骨肉瘤中的表達及其與血管生成的關(guān)系[D];中南大學(xué);2013年

2 向輝飛;Twist蛋白在胃腸道間質(zhì)瘤中的表達及其意義[D];中南大學(xué);2009年

3 李瀟;Twist、VEGF在腎癌中的表達和意義[D];南華大學(xué);2013年

4 古力米熱·布然江;Twist在宮頸癌中的表達及頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的意義[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

5 王淑為;Twist基因在造血系統(tǒng)惡性腫瘤中的表達及其對白血病細胞系作用的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

6 賀亮;Twist基因在胃癌中的表達與分析[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

7 葉入裴;Twist在乳腺癌中的表達研究和乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測因素[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

8 趙陽;Twist在乳腺浸潤性微乳頭狀癌中的表達及其意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

9 鄭婧;Twist蛋白在口腔鱗狀細胞癌中的表達及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

10 周海芝;Twist在鼻咽癌中的表達及意義的初步研究[D];中南大學(xué);2011年

本文編號：2884799