研究背景肺癌占我國(guó)惡性腫瘤發(fā)病率及死亡率的首位,非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)約占肺癌的80%,在現(xiàn)有衛(wèi)生技術(shù)條件下,約75%的患者就診時(shí)就已屬中晚期,總體5年生存率不足15%,肺癌嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。到目前為止,肺癌的發(fā)病機(jī)制仍未從根本上闡明。探討肺癌的發(fā)生與演變機(jī)制,對(duì)于降低肺癌的發(fā)病率及尋找新的防治途徑十分重要。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducers and activators of transcription,STAT)具有強(qiáng)烈的抑制細(xì)胞凋亡,促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用,參與了人類惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。STAT3是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子家族(STAT)的重要成員,表現(xiàn)尤為活躍。STAT3信號(hào)通路與細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖及凋亡的關(guān)系十分密切,該通路的持續(xù)激活可以導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖與惡性轉(zhuǎn)化,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),目前已將STAT3定義為癌基因。STAT3在接受非受體酪氨酸激酶、細(xì)胞因子以及生長(zhǎng)因子等細(xì)胞外信號(hào)刺激后被磷酸化激活,形成磷酸化的STAT3(phosphorylated STAT3,p-STAT3),p-STAT3會(huì)迅速移至細(xì)胞核內(nèi),與靶基因的啟動(dòng)子相結(jié)合,激活靶基因的轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖與凋亡。在正常生理情況下,STAT3的激活只是暫時(shí)的,在STAT3完成特定的信號(hào)傳遞后,會(huì)被去磷酸化,并重新回到細(xì)胞質(zhì)中。而在各種致癌信號(hào)的刺激下,STAT3將會(huì)被持續(xù)激活,以活化的狀態(tài)恒定地存于細(xì)胞核中,激活并調(diào)控諸女VEGF、VEGF-C及MUC1等靶基因的轉(zhuǎn)錄,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。已有較多文獻(xiàn)報(bào)道STAT3信號(hào)在多種惡性腫瘤中存在異常表達(dá),阻斷STAT3信號(hào)可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,使腫瘤的生長(zhǎng)受抑。隨著對(duì)STAT3信號(hào)通路的深入研究,STAT3在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中所起的作用越來(lái)越受到重視,以STAT3為靶點(diǎn)的治療方法有望為某些惡性腫瘤的治療開辟新的途徑。NSCLC中是否存在STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,激活狀態(tài)的STAT3是否參與了NSCLC的發(fā)生與發(fā)展,至今在國(guó)內(nèi)外的文獻(xiàn)報(bào)道較少。本課題通過(guò)應(yīng)用Western免疫印跡及免疫組織化學(xué)等技術(shù)探討了STAT3信號(hào)與NSCLC臨床病理特征之間的關(guān)系；探討了NSCLC組織中STAT3與靶基因VEGF、VEGF-C及MUC1之間的相關(guān)性；并結(jié)合NSCLC患者的隨訪資料,探討了STAT3及其靶基因與NSCLC的預(yù)后關(guān)系,利用RNA干擾技術(shù)阻斷人肺腺癌A549細(xì)胞中活化的STAT3信號(hào)通路,探討阻斷STAT3信號(hào)通路的活性對(duì)肺癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響等,以求從體內(nèi)、到體外,從分子到蛋白水平多角度探討STAT3信號(hào)通路在NSCLC發(fā)生與發(fā)展的作用機(jī)制,為NSCLC的基因治療篩選理想的靶標(biāo)提供理論基礎(chǔ)。第一部分STAT3、p-STAT3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征之間的相關(guān)性目的：探討STAT3、p-STAT3在NSCLC組織中的表達(dá)情況及其與臨床特征之間的相關(guān)性。方法：本實(shí)驗(yàn)收集了2011年9月至2011年12月在山東省立醫(yī)院胸外科施行肺癌手術(shù)的72例NSCLC患者的標(biāo)本,包括72例NSCLC組織及隨機(jī)選取的20例癌旁正常肺組織。應(yīng)用Western blot與免疫組化方法檢測(cè)NSCLC組織和癌旁正常肺組織中STAT3蛋白及p-STAT3蛋白的表達(dá)情況。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件,將患者的臨床資料、病理學(xué)特征以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果共同建立數(shù)據(jù)庫(kù)。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或Fisher's精確概率檢驗(yàn)法；計(jì)量資料應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,兩組均數(shù)比較時(shí)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(方差齊時(shí))或t'檢驗(yàn)(方差不齊時(shí)),多組計(jì)量資料樣本比較應(yīng)用方差分析(F檢驗(yàn)),若差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,則行SNK檢驗(yàn)(q檢驗(yàn))進(jìn)行兩兩比較,P0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：Western blot顯示NSCLC組織中STAT3及p-STAT3的表達(dá)量均顯著高于癌旁正常肺組織(P0.01,P0.01)。STAT3的表達(dá)量隨pTNM分期的加重顯著增高(P0.05)。p-STAT3的表達(dá)量與患者腫瘤的病理分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),腺癌患者p-STAT3表達(dá)量顯著高于鱗癌患者(P0.05)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組p-STAT3表達(dá)量顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P0.01)。p-STAT3表達(dá)量隨pTNM分期的加重顯著增高(P0.01)。免疫組化法檢測(cè)STAT3的陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞漿和/或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。p-STAT3的陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。NSGLC組織中STAT3、 p-STAT3的表達(dá)均顯著高于癌旁正常肺組織(P0.01,P0.05)。STAT3的表達(dá)隨pTNM分期的加重均顯著增高(P0.01)。p-STAT3的表達(dá)與患者腫瘤的病理分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),腺癌患者p-STAT3的表達(dá)顯著高于鱗癌患者(P0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組p-STAT3的表達(dá)顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P0.01)。結(jié)論：NSCLC中存在高表達(dá)的STAT3及p-STAT3。NSCL C組織中STAT3的表達(dá)與pTNM分期顯著相關(guān),p-STAT3的表達(dá)與病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及pTNM分期顯著相關(guān),STAT3信號(hào)參與了NSCLC的發(fā)生發(fā)展,激活的STAT3在NSCLC的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中起著一定的作用。較應(yīng)用方差分析(F檢驗(yàn)),若差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,則行SNK檢驗(yàn)(q檢驗(yàn))進(jìn)行兩兩比較,P0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：Western blot顯示NSCLC組織中STAT3及p-STAT3的表達(dá)量均顯著高于癌旁正常肺組織(P0.01,P0.01)。STAT3的表達(dá)量隨pTNM分期的加重顯著增高(P0.05)。p-STAT3的表達(dá)量與患者腫瘤的病理分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),腺癌患者p-STAT3表達(dá)量顯著高于鱗癌患者(P0.05)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組p-STAT3表達(dá)量顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P0.01)。p-STAT3表達(dá)量隨pTNM分期的加重顯著增高(P0.01)。免疫組化法檢測(cè)STAT3的陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞漿和/或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。p-STAT3的陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。NSGLC組織中STAT3、 p-STAT3的表達(dá)均顯著高于癌旁正常肺組織(P0.01,P0.05)。STAT3的表達(dá)隨pTNM分期的加重均顯著增高(P0.01)。p-STAT3的表達(dá)與患者腫瘤的病理分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),腺癌患者p-STAT3的表達(dá)顯著高于鱗癌患者(P0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組p-STAT3的表達(dá)顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P0.01)。結(jié)論：NSCLC中存在高表達(dá)的STAT3及p-STAT3。NSCL C組織中STAT3的表達(dá)與pTNM分期顯著相關(guān),p-STAT3的表達(dá)與病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及pTNM分期顯著相關(guān),STAT3信號(hào)參與了NSCLC的發(fā)生發(fā)展,激活的STAT3在NSCLC的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中起著一定的作用。第二部分非小細(xì)胞肺癌組織中STAT3信號(hào)與靶基因VEGF、VEGF-C、及MUC1關(guān)系的研究目的：探討NSCLC組織中STAT3、p-STAT3與靶基因VEGF、VEGF-C、及MUC1的關(guān)系。方法：本研究選取2011年9月至2011年12月在山東省立醫(yī)院胸外科施行肺癌手術(shù)的72例NSCLC患者的標(biāo)本,包括72例NSCLC組織及隨機(jī)選取的20例癌旁正常肺組織。應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)NSCLC組織及癌旁正常肺組織STAT3、p-STAT3、VEGF、VEGF-C、及MUC1的表達(dá)情況。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件,將患者的臨床資料、病理學(xué)特征以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果共同建立數(shù)據(jù)庫(kù)。應(yīng)用χ2檢驗(yàn)或Fisher's精確概率檢驗(yàn)法比較STAT3、p-STAT3、VEGF、VEGF-C、及MUC1在各組標(biāo)本中表達(dá)的差異情況,各因子之間相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)法,P0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：VEGF日性表達(dá)為細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒,VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒,MUC1日性表達(dá)為細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒。VEGF、VEGF-C、及MUC1蛋白的表達(dá)均顯著高于癌旁正常肺組織(P0.05,P0.05, P0.05)。VEGF的表達(dá)與患者腫瘤大小(pT)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及pTNM分期顯著相關(guān)(P0.05,P0.01,P0.05)。VEGF陽(yáng)性表達(dá)率隨腫瘤的增大、隨pTNM分期的加重顯著增高。在52例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中,有37例(71.6%)存在VEGF表達(dá)陽(yáng)性；在20例沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中,有8例(40.0%)存在VEGF表達(dá)陽(yáng)性,二者相比,差異顯著(P0.05)。在52例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中,有36例(69.2%)存在VEGF-C表達(dá)陽(yáng)性；在20例沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中,有6例(30.0%)存在VEGF-C表達(dá)陽(yáng)性,二者相比,差異顯著(P0.01)。MUC1陽(yáng)性表達(dá)率隨腫瘤的增大(pT)顯著增高(P0.01),MUC1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(71.6%:30.0%, P0.01)。Spearman等級(jí)相關(guān)分析表明,在NSCLC組織中STAT3表達(dá)與p-STAT3表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.307,P0.01),與VEGF表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.309,P0.01); p-STAT3表達(dá)與VEGF表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.381,P0.01),與MUC1表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.495,P0.01)；結(jié)論：VEGF在NSCLC組織中呈高表達(dá),與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及pTNM分期顯著相關(guān)。VEGF-C在NSCLC組織中呈高表達(dá),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。MUC1在NSCLC組織中呈高表達(dá),與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。NSCLC組織中STAT3、p-STAT3及VEGF三者的表達(dá)呈顯著正相關(guān),p-STAT3與MUC1的表達(dá)呈顯著正相關(guān)。STAT信號(hào)通路可能通過(guò)調(diào)控VEGF、MUC1的表達(dá)促進(jìn)NSCLC的發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。第三部分STAT3、p-STAT3、VEGF、VEGF-C、及MUC1與非小細(xì)胞肺癌預(yù)后的關(guān)系目的：探討STAT3、p-STAT3及其靶基因VEGF、VEGF-C、及MUC1與NSCLC預(yù)后的關(guān)系。方法：本研究選取2011年9月至2011年12月在山東省立醫(yī)院胸外科施行肺癌手術(shù)的72例NSCLC患者的標(biāo)本,包括72例NSCLC組織及隨機(jī)選取的20例癌旁正常肺組織。應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)NSCL C組織及STAT3、p-STAT3、VEGF、 VEGF-C.及MUC1的表達(dá)情況。并對(duì)患者出院后進(jìn)行跟蹤隨訪,應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,Kaplan-Meier法計(jì)算生存率,Log-rank檢驗(yàn)比較生存率差別,Cox回歸分析判定手術(shù)后生存率的預(yù)后因素。P0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：應(yīng)用Kaplan-Meie r生存曲線分析顯示本組NSCLC患者3年生存率是54.2%,腫瘤大小(pT)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、pTNM分期、STAT3、p-STAT3、VEGF、MUC1是影響NSCLC患者3年生存率的相關(guān)因素。腫瘤大小(pT)不同組別3年生存率分別為：pTl組100%,pT2組52.8%,pT3組27.3%;經(jīng)Log-Rank檢驗(yàn)總體間差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組患者的3年生存率顯著低于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組患者的3年生存率(38.5%：95.0%,P0.01)。而pTNM分期不同組別3年生存率分別為：pⅠ組94.1%,pⅡ組51.4%,pⅢ組22.2%。經(jīng)Log-Rank檢驗(yàn)總體間差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。STAT3表達(dá)陽(yáng)性組患者的3年生存率同樣顯著低于STAT3表達(dá)陰性組患者的3年生存率(45.9%：100%,P0.01)(圖8)。p-STAT3表達(dá)陽(yáng)性組患者的3年生存率顯著低于p-STAT3表達(dá)陰性組患者的3年生存率(43.6%：66.7%,P0.05)。VEGF表達(dá)陽(yáng)性組患者的3年生存率顯著低于VEGF表達(dá)陰性組患者的3年生存率(44.4%：70.4%,P0.05)。MUC1蛋白表達(dá)陽(yáng)性組患者的3年生存率顯著低于MUC1表達(dá)陰性組患者的3年生存率(44.2:69.0%,P0.05)。VEGF-C陽(yáng)性組患者3年生存率分別為46.5%,雖然低于VEGF-C陰性組患者3年生存率的65.5%,經(jīng)Log-Rank檢驗(yàn)分析,總體間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Cox多因素回歸分析結(jié)果顯示,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是NSCLC患者手術(shù)后3年生存率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。第三部分STAT3、p-STAT3、VEGF、VEGF-C、及MUC1與非小細(xì)胞肺癌預(yù)后的關(guān)系目的：探討STAT3、p-STAT3及其靶基因VEGF、VEGF-C、及MUC1與NSCLC預(yù)后的關(guān)系。方法：本研究選取2011年9月至2011年12月在山東省立醫(yī)院胸外科施行肺癌手術(shù)的72例NSCLC患者的標(biāo)本,包括72例NSCLC組織及隨機(jī)選取的20例癌旁正常肺組織。應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)NSCL C組織及STAT3、p-STAT3、VEGF、 VEGF-C.及MUC1的表達(dá)情況。并對(duì)患者出院后進(jìn)行跟蹤隨訪,應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,Kaplan-Meier法計(jì)算生存率,Log-rank檢驗(yàn)比較生存率差別,Cox回歸分析判定手術(shù)后生存率的預(yù)后因素。P0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：應(yīng)用Kaplan-Meie r生存曲線分析顯示本組NSCLC患者3年生存率是54.2%,腫瘤大小(pT)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、pTNM分期、STAT3、p-STAT3、VEGF、MUC1是影響NSCLC患者3年生存率的相關(guān)因素。腫瘤大小(pT)不同組別3年生存率分別為：pTl組100%,pT2組52.8%,pT3組27.3%;經(jīng)Log-Rank檢驗(yàn)總體間差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組患者的3年生存率顯著低于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組患者的3年生存率(38.5%：95.0%,P0.01)。而pTNM分期不同組別3年生存率分別為：pⅠ組94.1%,pⅡ組51.4%,pⅢ組22.2%。經(jīng)Log-Rank檢驗(yàn)總體間差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。STAT3表達(dá)陽(yáng)性組患者的3年生存率同樣顯著低于STAT3表達(dá)陰性組患者的3年生存率(45.9%：100%,P0.01)(圖8)。p-STAT3表達(dá)陽(yáng)性組患者的3年生存率顯著低于p-STAT3表達(dá)陰性組患者的3年生存率(43.6%：66.7%,P0.05)。VEGF表達(dá)陽(yáng)性組患者的3年生存率顯著低于VEGF表達(dá)陰性組患者的3年生存率(44.4%：70.4%,P0.05)。MUC1蛋白表達(dá)陽(yáng)性組患者的3年生存率顯著低于MUC1表達(dá)陰性組患者的3年生存率(44.2:69.0%,P0.05)。VEGF-C陽(yáng)性組患者3年生存率分別為46.5%,雖然低于VEGF-C陰性組患者3年生存率的65.5%,經(jīng)Log-Rank檢驗(yàn)分析,總體間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Cox多因素回歸分析結(jié)果顯示,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是NSCLC患者手術(shù)后3年生存率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)論：腫瘤大小(pT)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、pTNM分期、STAT3、p-STAT3、VEGF、MUC1與NSCLC患者的3年生存率顯著相關(guān)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是NSCLC患者手術(shù)后3年生存率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。第四部分STAT3 siRNA體外阻斷人肺腺癌A549細(xì)胞系中STAT3信號(hào)通路活性的研究目的：探討STAT3siRNA阻斷STAT3信號(hào)后肺腺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡的變化情況。方法：將STAT3siRNA轉(zhuǎn)染入肺腺癌A549細(xì)胞,作轉(zhuǎn)染組。將未用STAT3siRNA、僅用轉(zhuǎn)染試劑模擬轉(zhuǎn)染過(guò)程的細(xì)胞作為未轉(zhuǎn)染組(對(duì)照組)細(xì)胞。Western Blotting法檢測(cè)轉(zhuǎn)染STAT3siRNA后0,24,48及72h STAT3、p-STAT3蛋白表達(dá)水平。Real-timePCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染STAT3siRNA后0,24,48及72hSTAT3mRNA表達(dá)水平。MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組肺腺癌A549細(xì)胞24、48h及72h后細(xì)胞的增殖情況。轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組肺腺癌A549細(xì)胞細(xì)胞用Annexin V-FITC和PⅠ將細(xì)胞合染,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況和細(xì)胞周期的變化情況。通過(guò)SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件,計(jì)量資料應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,兩組均數(shù)比較時(shí)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),多組計(jì)量資料樣本比較應(yīng)用方差分析,P0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：顯微鏡下觀察,STAT3siRNA轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞后,細(xì)胞開始增殖減慢,48小時(shí)后形態(tài)出現(xiàn)明顯變化細(xì)胞皺縮變小,出現(xiàn)較多的懸浮細(xì)胞。對(duì)照組的細(xì)胞輪廓清楚,細(xì)胞排列緊密,生長(zhǎng)旺盛。A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染STAT3siRNA后0、24、48、72小時(shí),STAT3mRNA和STAT3蛋白的表達(dá)水平在轉(zhuǎn)染STAT3siRNA后隨時(shí)間呈下降趨勢(shì),在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)呈顯著下降,在轉(zhuǎn)染后72小時(shí)僅能檢測(cè)到很極少量的STAT3蛋白；p-STAT3蛋白的表達(dá)量與STAT3蛋白有相同的趨勢(shì),隨轉(zhuǎn)染的時(shí)間呈下降趨勢(shì),尤其在轉(zhuǎn)然后的48小時(shí)呈顯著下降；p-actin為STAT3siRNA的非靶向蛋白,在轉(zhuǎn)染后的各時(shí)間段均未見明顯變化。MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后24、48和72小時(shí)后細(xì)胞的增殖能力,結(jié)果顯示A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染STAT3siRNA48小時(shí)、72小時(shí)A值與對(duì)照組A值相比,具有明顯差異。A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染STAT3siRNA24小時(shí),轉(zhuǎn)染前(0小時(shí))相比,無(wú)顯著性差異；轉(zhuǎn)染48小時(shí)細(xì)胞凋亡發(fā)生率較0小時(shí)明顯增高；STAT3siRNA72小時(shí)后,凋亡發(fā)生率為12.0%,是0小時(shí)的4.8倍。A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染后48、72小時(shí)的G0/G1期細(xì)胞較0小時(shí)分別增加了16.5%,17.8%,同時(shí)S期細(xì)胞明顯減少,由0小時(shí)的18.0%分別減至12.2%、10.0%結(jié)論：STAT3siRNA能夠阻斷肺腺癌細(xì)胞中STAT3信號(hào)通路,其抑制作用具有時(shí)間依賴性和高效特異性。STAT3siRNA能夠抑制肺腺癌細(xì)胞的增殖,促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R734.2
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
符號(hào)說(shuō)明
第一部分 STAT3、p-STAT3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表法及其與
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    附圖
    參考文獻(xiàn)
第二部分 非小細(xì)胞肺癌組織中STAT3信號(hào)與鉛基因VEGF、VEGF-C、及MUC1關(guān)系的研究
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    附圖
    參考文獻(xiàn)
第三部分 STAT3、P-STAT3、VEGF、VEGF-C、及MUC1 與非小細(xì)胞肺癌預(yù)后的關(guān)系
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    附圖
    參考文獻(xiàn)
第四部分 STAT3 siRNA體外阻斷人肺腺癌A549細(xì)胞系中STAT3信號(hào)通路活性的研究
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    附圖
    參考文獻(xiàn)
致謝
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論文二
論文三
附件

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 王彥敏;;血管生成因子VEGF研究進(jìn)展[J];河北醫(yī)藥;2010年11期

2 李遠(yuǎn)航;;非小細(xì)胞肺癌組織中STAT3和磷酸化STAT3蛋白表達(dá)及臨床意義[J];中外婦兒健康;2011年06期

3 王瑞娟;張建中;王萍;;磷酸化STAT3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年03期

本文編號(hào)：2884685