肺癌是全世界癌癥相關(guān)死亡最主要的原因,EGFR(The epidermal growth factor receptor,表皮生長因子受體)屬于RTK(receptor tyrosine kinases,受體酪氨酸激酶)Erb B家族,與肺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。測序分析顯示EGFR在NSCLC(Non-small cell lung cancer,非小細(xì)胞肺癌)中存在高的突變頻率,而突變的EGFR具有持續(xù)性激活的激酶活性從而導(dǎo)致腫瘤的生長。雖然對野生型EGFR的內(nèi)吞降解機(jī)制研究的比較清楚,但對突變體EGFR的內(nèi)吞降解仍有爭議。19號外顯子缺失突變的EGFR因其在在NSCLC高的突變頻率而被廣泛研究,我們發(fā)現(xiàn)在NSCLC細(xì)胞中,19號外顯子缺失突變的EGFR通過不依賴于Dynamin(發(fā)動(dòng)蛋白)的活性進(jìn)行持續(xù)性的內(nèi)吞作用經(jīng)溶酶體降解。EGF刺激和抑制HSP90的活性能夠進(jìn)一步加快19號外顯子缺失突變EGFR的降解,但分別以Dynamin活性依賴和非依賴的形式進(jìn)行。雖然19號外顯子缺失突變EGFR以不同的方式進(jìn)行內(nèi)吞,但都是通過泛素化介導(dǎo)的內(nèi)體-溶酶體途徑進(jìn)行降解,而且這種降解必須依賴其激酶活性。酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼能夠有效治療19號外顯子缺失突變EGFR的NSCLC患者,但大多數(shù)患者在接受治療后會(huì)出現(xiàn)藥物耐受,而EGFR的二次突變及c-MET的擴(kuò)增是獲得性耐藥最主要的原因,仍有大約30%吉非替尼獲得性耐藥的機(jī)制并不明確。因此,對新型吉非替尼耐藥機(jī)制的研究顯得十分重要。在本研究中,以對吉非替尼敏感的細(xì)胞系HCC827為親本,建立篩選新型的吉非替尼耐藥細(xì)胞RE-1和RE-2,并對其耐藥機(jī)制進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)HCC827對吉非替尼的耐受是通過多方面的改變引起的,涉及到FGFFGFR信號通路和NF-κB信號通路的活化、EMT(epithelial–mesenchymal transition,表皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化)、細(xì)胞干性的增強(qiáng)、ROS(reactive oxygen species,活性氧)的顯著下調(diào)等。去泛素化酶(Deubiquitinases,DUBs)在參與調(diào)節(jié)許多細(xì)胞進(jìn)程中扮演著重要的作用。泛素化(ubiquitylation)和去泛素化(deubiquitylation)作為一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的過程參與各種重要的生命活動(dòng)。UCHL1(Ubiquitin C-terminal hydrolase L1,泛素羧基末端水解酶L1)在吉非替尼耐藥細(xì)胞中的高表達(dá),可能預(yù)示著其可以作為一個(gè)新的腫瘤細(xì)胞耐藥標(biāo)志物或治療靶標(biāo)。同時(shí),吉非替尼耐藥細(xì)胞對傳統(tǒng)化療藥物順鉑更為敏感,這也為獲得性耐藥患者的治療提供了新的思路。因此我們關(guān)于19號外顯子缺失突變EGFR的內(nèi)吞降解調(diào)控及吉非替尼耐藥機(jī)制研究可能對NSCLC患者的臨床治療提供新的理論依據(jù)和治療策略。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R734.2
【部分圖文】：

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圖 2：19 號外顯子缺失突變 EGFR 的持續(xù)性內(nèi)吞降解A.細(xì)胞經(jīng)血清饑餓處理 6 h，再加 20 或 100 ng/mL EGF 處理不同時(shí)間收集蛋白樣品檢測 EGFR表達(dá)水平，β-Actin為內(nèi)參蛋白，誤差線代表平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（n=3）。B.免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示HCC827和 H1650 在加入 EGF 處理 4 小時(shí)后 EGFR 在細(xì)胞中的定位。C 和 D.A549、H1650 和 HCC827

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文外顯子缺失突變 EGFR 通過內(nèi)體-溶酶體途徑進(jìn)的研究表明，EGFR 通過溶酶體進(jìn)行持續(xù)性的降解。而突變體 E途徑通過溶酶體降解有待進(jìn)一步研究，所以，我們通過激光共聚變體 EGFR 是否與早期內(nèi)體標(biāo)志物 EEA1 和晚期內(nèi)體/溶酶體標(biāo) 存在共定位。如圖 3，突變體 EGFR 確實(shí)與 EEA1 和 LAMP2 存在說明 19 號外顯子缺失突變的 EGFR 同野生型 EGFR 一樣，都是-溶酶體途徑進(jìn)行降解。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Byung Min Chung;Eric Tom;Neha Zutshi;Timothy Alan Bielecki;Vimla Band;Hamid Band;;Nexus of signaling and endocytosis in oncogenesis driven by non-small cell lung cancer-associated epidermal growth factor receptor mutants[J];World Journal of Clinical Oncology;2014年05期

本文編號：2881587