發(fā)布時間：2020-11-09 13:41

　　 目的:在結(jié)腸癌上分選及鑒定一類長期腫瘤起源細胞(LT-TICs),并探討PRDX2靶向調(diào)控LT-TICs對結(jié)腸癌致瘤、轉(zhuǎn)移及耐藥的影響及相關機制。方法:1.在基于腫瘤干細胞的分選鑒定原理的基礎上結(jié)合LT-TICs的兩個關鍵表型((1)在連續(xù)異種移植動物模型中維持腫瘤的形成;(2)在體內(nèi)驅(qū)動腫瘤的轉(zhuǎn)移),通過連續(xù)致瘤試驗、體外侵襲遷移試驗、體內(nèi)轉(zhuǎn)移試驗及耐藥試驗等試驗分選及鑒定一群富集LT-TICs的細胞亞群。2.免疫組化檢測CD133(+)CD44(+)與CD133(-)CD44(-)結(jié)腸癌組織上PRDX2的表達;qRT-PCR檢測癌旁組織與癌組織上CD133、CD44、PRDX2的mRNA水平,并分析PRDX2與CD133、CD44在轉(zhuǎn)錄水平上的相關性;免疫熒光檢測成球的CD133~+CD44~+細胞與粘附的CD133~-CD44~-細胞上的PRDX2表達情況;干細胞特性相關功能試驗驗證PRDX2與CD133~+CD44~+細胞的功能相關性。3.免疫組化檢測癌旁組織、無轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織及肝轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織中PRDX2的表達情況,并檢測結(jié)腸癌侵襲區(qū)域PRDX2的表達情況;體外及體內(nèi)轉(zhuǎn)移相關試驗檢測PRDX2靶向調(diào)控CD133~+CD44~+細胞對其轉(zhuǎn)移表型的影響;機制上通過West blotting檢測EMT、WNT通路上相關蛋白的表達情況。4.流式凋亡試驗檢測在CD133~+CD44~+細胞上下調(diào)PRDX2的表達對細胞耐藥的影響;機制上通過DCFH-DA檢測細胞內(nèi)ROS水平及通過堿性彗星試驗檢測細胞內(nèi)DNA損傷情況。結(jié)果:1.CD133~+CD44~+細胞在功能上具有LT-TICs的連續(xù)致瘤潛能。2.CD133~+CD44~+細胞在功能上再現(xiàn)LT-TICs驅(qū)動腫瘤轉(zhuǎn)移的潛能。3.CD133~+CD44~+細胞對5-Fu及奧沙利鉑耐藥。4.PRDX2與CD133~+CD44~+細胞之間存在顯著的相關性。5.在CD133~+CD44~+細胞上沉默PRDX2的表達抑制了腫瘤成瘤效率及成瘤速度。6.PRDX2在肝轉(zhuǎn)移患者結(jié)腸癌組織上表達上調(diào);在CD133~+CD44~+細胞上沉默PRDX2的表達顯著降低了CD133~+CD44~+細胞驅(qū)動肝臟轉(zhuǎn)移能力;機制上涉及Wnt/β-catenin信號通路和EMT過程。7.更重要的是,在CD133~+CD44~+細胞中下調(diào)PRDX2的表達使細胞產(chǎn)生更多的ROS,從而導致CD133~+CD44~+細胞對氧化應激和化療更為敏感。結(jié)論:CD133~+CD44~+細胞富集LT-TICs,可以作為LT-TICs的一類典型代表的細胞亞群。PRDX2可靶向調(diào)控LT-TICs的致瘤、轉(zhuǎn)移及耐藥,對治療結(jié)腸癌具有重要臨床意義。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R735.35
【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
    參考文獻
第一部分 結(jié)腸癌長期腫瘤起源細胞的分選與鑒定
    引言
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
    4 討論
    參考文獻
第二部分 PRDX2靶向調(diào)LT-TICs對結(jié)腸癌致瘤、轉(zhuǎn)移及耐藥的影響及機制
    引言
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
    4 討論
    參考文獻
全文總結(jié)
文獻綜述
    參考文獻
致謝
攻讀學位期間研究成果

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