孤兒核受體Nur77(也稱為NGFI-B或TR3)是由立早基因NR4A1編碼的轉(zhuǎn)錄因子,屬于核受體(NR)超家族,在多種癌癥中起到了重要的調(diào)控作用。實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),在黑色素瘤細(xì)胞中,無糖培養(yǎng)條件可促進(jìn)ERK2對Nur77的磷酸化修飾并促進(jìn)其轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入線粒體,與脂肪酸氧化中關(guān)鍵硫解酶TPβ發(fā)生結(jié)合,從而削弱ROS引起的TPβ的氧化失活,進(jìn)而促進(jìn)脂肪酸氧化,NADPH的產(chǎn)生及ROS的清除,幫助黑色素瘤細(xì)胞抵抗葡萄糖饑餓引起的死亡。然而,Nur77如何進(jìn)入線粒體,以及通過何種方式保護(hù)TPβ尚不明確。本文中的研究中,我們發(fā)現(xiàn)線粒體外膜蛋白Nix可與磷酸化的Nur77相互作用,從而幫助Nur77轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入線粒體,并與TPβ結(jié)合。Nur77的線粒體定位及其與TPβ的結(jié)合是Nur77保護(hù)TPβ免于氧化失活的前提,也是Nur77促進(jìn)細(xì)胞抵抗葡萄糖饑餓所必需的。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),在葡萄糖饑餓情況下,Nur77LBD上的Cys505、Cys551和Cys566發(fā)生了氧化修飾。如果突變了這三個氧化位點(diǎn),則Nur77喪失保護(hù)TPβ免于氧化失活的能力。進(jìn)一步通過點(diǎn)突變和氧化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),葡萄糖饑餓條件下,Nur77自身比TPβ更容易被氧化。Nur77通過與TPβ結(jié)合,以“自我犧牲”的方式保護(hù)TPβ不被氧化從而保護(hù)其酶活,促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞的脂肪酸氧化。Nur77關(guān)鍵磷酸化位點(diǎn)和氧化位點(diǎn)突變喪失降低黑色素瘤細(xì)胞ROS、提高存活率的能力。最后,我們采用小鼠循環(huán)腫瘤細(xì)胞存活模型模擬生理狀態(tài)下腫瘤細(xì)胞經(jīng)歷的葡萄糖饑餓,結(jié)果進(jìn)一步證明Nur77關(guān)鍵磷酸化位點(diǎn)和氧化位點(diǎn)的突變降低循環(huán)腫瘤細(xì)胞存活,抑制黑色素瘤轉(zhuǎn)移。綜上所述,本文在對Nur77在黑色素瘤細(xì)胞中促進(jìn)細(xì)胞存活的機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)了 Nix的新功能和Nur77新的調(diào)控方式,為癌癥研究提供了新思路,為黑色素瘤的治療提供了新靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.5
【部分圖文】：

應(yīng)答元件（ＮＧＦＩ－Ｂ?ｒｅｓｐｏｎｓｅ?ｅｌｅｍｅｎｔ，?ＮＢＲＥ）來調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄。與其他核受體??類似，ＮＲ４Ａ受體與多種共調(diào)節(jié)劑相互作用，以達(dá)到最佳基因的調(diào)控效果??Ｎｕｒ７７參與調(diào)控細(xì)胞周期，炎癥和凋亡。Ｎｕｒ７７蛋白的亞細(xì)胞定位在細(xì)胞的??存活和死亡中起關(guān)鍵作用［９］，它可以從細(xì)胞核易位到線粒體誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。已經(jīng)??鑒定了編碼相同蛋白質(zhì)的多個可變剪接變體。作為基因表達(dá)的調(diào)控者，ＮＲ４Ａ亞??家族對控制許多代謝和其他生理過程的多種基因具有深遠(yuǎn)的影響。在過去的幾年??中己經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多新的靶基因，這些基因在許多功能中起著重要的作用。??２．１?Ｎｕｒ７７的結(jié)構(gòu)??Ｎｕｒ７７蛋白主要由以下幾個結(jié)構(gòu)組成：轉(zhuǎn)錄激活域（ａｍｉｎｏ－ｔｅｒｍｉｎａｌ?ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎ??ｄｏｍａｉｎ，ＴＡＤ），ＤＮＡ?結(jié)合域（ＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇ?ｄｏｍａｉｎ，ＤＢＤ），鉸鏈區(qū)（Ｈｉｎｇｅ），配??體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（ｌｉｇａｎｄ?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｄｏｍａｉｎ，ＬＢＤ）組成（圖?１．１）。??ＡＦ－１?ＡＦ－２??

我們檢測了在無糖條件下，黑色素瘤細(xì)胞ＭＶ３中Ｂｄ－２的敲低是否??影響Ｎｕｒ７７的定位。通過線粒體分離實(shí)驗(yàn)我們可以看到，無糖培養(yǎng)條件下，??Ｎｕｒ７７的線粒體定位不受Ｂｃｌ－２敲低的影響（圖３．２）。換言之，Ｂｃｌ－２在這一過??程中并沒有發(fā)揮相關(guān)的功能。??Ｉｎｐｕｔ?Ｍｉｔｏ??Ｓｃｒａｍｂｌｅ?＋?＋?－?—ｉ－?＋?——??巳?ｃｌ－２－ＫＤ?—?—?＋?ｈ—?—?＋?＋??－Ｇｌｃ?—?＋?—?—?＋??ＩＢ：Ｎｕｒ７７?＿＿?，－??ｊ?＾?‘＊＊＊＂＊＊?＾＊＊＊＊＊４：?＂－＊＊＊１＊１１＇?＊＊＾：．?＂＊＊＊＊．??１Ｂ??舊：Ｔｕｂｕｌｉｎ??圖３．２無糖條件下Ｂｃｌ－２敲低對Ｎｕｒ７７線粒體定位的影響。??Ｆｉｇ?３．２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?Ｂｃｌ－２?Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ?ｏｎ?Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ?Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｎｕｒ７７??ｕｎｄｅｒ?Ｇｌｕｃｏｓｅ?Ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ?Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ?．Ｕｎｄｅｒ?ｇｌｕｃｏｓｅ?ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，?Ｂｃｌ－??２?ｉｓ?ｎｏｔ?ｒｅｑｕｉｒｅｄ?ｆｏｒ?ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｎｕｒ７７．?Ｂｃｌ－２?ｗａｓ?ｋｎｏｃｋｅｄ?ｄｏｗｎ??ｉｎ?ＭＶ３?ｃｅｌｌｓ．?Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｎｕｒ７７?ｗａｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?３?ｈｏｕｒｓ?ａｆｔｅｒ?ｇｌｕｃｏｓｅ??ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ．??最近，我們報道了一種線粒體外膜蛋白Ｎｉｘ可以作為載體來促進(jìn)黑素瘤細(xì)胞??中的Ｎｕｒ７７轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入線粒體［Ｍ］。那么

ＩＢ?＊５ｏｉ￣２??ＩＢ：Ｔｕｂｕｌｉｎ?＿ＭＭ？ａｉ??圖３．１?Ｂｃｌ－２的敲低效率。??Ｆｉｇ?３．１?Ｋｎｏｃｋ?ｄｏｗｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ?ｏｆ?ＢｃＩ－２．?Ｔｈｅ?ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ?ｏｆ?ｓｉ－Ｂｃｌ－２?１０２０??ｗａｓ?ｂｅｔｔｅｒ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｔｗｏ?ｓｈＲＮＡ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?ｏｆ?Ｂｃｌ－２．??隨后，我們檢測了在無糖條件下，黑色素瘤細(xì)胞ＭＶ３中Ｂｄ－２的敲低是否??影響Ｎｕｒ７７的定位。通過線粒體分離實(shí)驗(yàn)我們可以看到，無糖培養(yǎng)條件下，??Ｎｕｒ７７的線粒體定位不受Ｂｃｌ－２敲低的影響（圖３．２）。換言之，Ｂｃｌ－２在這一過??程中并沒有發(fā)揮相關(guān)的功能。??Ｉｎｐｕｔ?Ｍｉｔｏ??Ｓｃｒａｍｂｌｅ?＋?＋?－?—ｉ－?＋?——??巳?ｃｌ－２－ＫＤ?—?—?＋?ｈ—?—?＋?＋??－Ｇｌｃ?—?＋?—?—?＋??ＩＢ：Ｎｕｒ７７?＿＿?，－??ｊ?＾?‘＊＊＊＂＊＊?＾＊＊＊＊＊４：?＂－＊＊＊１＊１１＇?＊＊＾：．?＂＊＊＊＊．??１Ｂ??舊：Ｔｕｂｕｌｉｎ??圖３．２無糖條件下Ｂｃｌ－２敲低對Ｎｕｒ７７線粒體定位的影響。??Ｆｉｇ?３．２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?Ｂｃｌ－２?Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ?ｏｎ?Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ?Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｎｕｒ７７??ｕｎｄｅｒ?Ｇｌｕｃｏｓｅ?Ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ?Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ?．Ｕｎｄｅｒ?ｇｌｕｃｏｓｅ?ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
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