目的:腎細胞癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,盡管腎癌治療取得了重大進展,但預后仍然較差,死亡率仍然很高。因此,迫切需要研究腎癌細胞增殖和轉移的分子機制,為腎癌的治療提供新的方法。課題組前期研究表明與正常腎組織相比較,VDR表達在腎癌中明顯降低,進一步分析還發(fā)現TPRV5和VDR的表達水平相關,提示TRPV5可能受VDR的調控參與腎細胞癌的發(fā)生和發(fā)展,然而,VDR是否調控TRPV5表達,及其在腎癌生物學行為中的作及調控機制并不明確,本研究的目的為揭示VDR是否可調控TRPV5轉錄表達從而影響腎細胞癌增殖和轉移。方法:western blot和RT-PCR檢測正常腎細胞癌細胞株caki-1和786-O細胞中VDR蛋白的表達情況;用慢病毒構建VDR過表達和敲除的caki-1和786-O細胞模型,分別用RT-PCR和western blot檢測過表達和敲除VDR基因的caki-1和786-O細胞的VDR的mRNA和蛋白水平變化;分別用MTT法、流式細胞術、Transwell小室實驗檢測過表達和敲除VDR后,caki-1和786-O細胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲情況;轉錄組測序方法檢測過表達和敲除VDR后caki-1細胞的差異表達基因功能富集/信號通路分析情況;用RT-PCR和western blot檢測過表達和敲除VDR基因的caki-1細胞的TRPV5的mRNA和蛋白水平變化;用MTT法、Transwell小室實驗檢測單純敲除VDR、同時敲除VDR和TRPV5、陰性對照組三組caki-1細胞的增殖、遷移和侵襲情況。結果:VDR在caki-1細胞中的表達量要高于786-O細胞。體外細胞功能實驗表過表達VDR能夠顯著抑制caki-1和786-O細胞的增殖、遷移和侵襲,并促進細胞凋亡;相反的,敲除VDR能促進以上兩種細胞的增殖、遷移和侵襲,并抑制細胞凋亡。轉錄組測序也表明過表達和敲除VDR的caki-1細胞顯著差異表達基因富集在細胞凋亡、增殖、分化和遷移等功能上,另外,差異表達基因顯著的富集在TGF-β、Apoptosis、TNF、Wnt等信號通路上。此外,我們發(fā)現TRPV5和VDR表達呈負相關,即VDR敲除能夠促進TRPV5的表達,VDR過表達則抑制TRPV5的表達。最后,單獨敲除VDR、同時敲除VDR和TRPV5、陰性對照組三組caki-1細胞實驗表明敲除VDR可以誘導細胞增殖、遷移和侵襲能力增強,但在caki-1細胞敲除VDR的基礎上,繼續(xù)敲除TRPV5后,細胞增殖、遷移和侵襲的能力又被削弱,換言之,敲除TRPV5可以抑制caki-1細胞被VDR敲除所誘導的增殖、遷移和侵襲的能力。結論:VDR在腎細胞癌細胞株中起著一個腫瘤抑制因子的作用,此外,VDR可以通過調控TRPV5的轉錄表達來抑制腎癌細胞株的增殖和轉移。
【學位單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.11
【部分圖文】：

3.1 VDR 在不同組別腎細胞癌細胞株內的表達情況如圖 1.1（A）所示，WB 和 RT-PCR 結果顯示 VDR 在 RCC 細胞株 caki-1 和 786-O細胞中均表達，且 VDR 在 caki-1 細胞中的表達量要高于 786-O 細胞。如圖 1.1（B）和（C）所示，WB 和 RT-PCR 結果顯示在 RCC 細胞株 caki-1 和786-O 細胞中，LeVDR 組（VDR 過表達組）較 LeCtrl 組（過表達陰性對照組）VDR的表達量明顯升高；而 shVDR 組（VDR 敲除組）較 shCtrl（敲除陰性對照組）VDR的表達量明顯較少，且有統(tǒng)計學意義。結果證實慢病毒介導的 VDR 過表達和敲除有效，成功的構建了 VDR 過表達和敲除的 RCC 細胞株。3 實驗結果

圖 1.2 VDR 抑制 RCC 細胞增殖3.3 過表達 VDR 抑制 786-O 細胞遷移；敲除 VDR 促進 786-O 細胞遷移。Transwell 小室遷移實驗用來檢測細胞遷移能力，實驗結果顯示，VDR 過表達組的 786-O 細胞遷移能力較對照組明顯減弱（p<0.01），與之相反，VDR 敲除組的786-O 細胞遷移能力較對照組有所增強（p<0.05）�？梢缘贸鼋Y論，VDR 可以抑制786-O 細胞的遷移能力（見圖 1.3）。

圖 1.3 VDR 抑制 786-O 細胞遷移能力。左圖為細胞在 100x 光鏡下圖形；右圖為200x 光鏡下 5 個視野所得統(tǒng)計圖形3.4 過表達 VDR 抑制 786-O 細胞侵襲；敲除 VDR 促進 786-O 細胞侵襲Transwell 小室侵襲實驗用來檢測細胞侵襲能力，實驗結果顯示，VDR 過表達組的 786-O 細胞侵襲能力較對照組明顯減弱（p<0.01），與之相反，VDR 敲除組的786-O 細胞侵襲能力較對照組有所增強（p<0.05）�？梢缘贸鼋Y論，VDR 可以抑制786-O 細胞的侵襲能力（見圖 1.4）。
【參考文獻】

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本文編號：2874827