目的:DEP結(jié)構(gòu)域蛋白1(DEPDC1)的異位表達(dá)與肺腺癌的不良預(yù)后密切相關(guān),但是其作用及機(jī)制尚不明確。本研究擬檢測(cè)DEPDC1在肺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平,分析DEPDC1在肺腺癌細(xì)胞中的作用,并研究其機(jī)制。方法:采用蛋白免疫印跡方法檢測(cè)DEPDC1在肺癌細(xì)胞系中的表達(dá),篩選出DEPDC1高表達(dá)的A549細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。在A549細(xì)胞中表達(dá)DEPDC1抑制因子miR-130a,隨后檢測(cè)A549細(xì)胞的增殖與凋亡。用CCK-8技術(shù)確定11R-DEP:611-628多肽的最佳作用濃度后,用5μM的多肽處理A549細(xì)胞,結(jié)合免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)等方法研究多肽處理對(duì)A549細(xì)胞增殖和凋亡的影響。用JNK抑制劑+多肽處理A549細(xì)胞,檢測(cè)JNK在肺癌細(xì)胞中的功能。結(jié)果:DEPDC1在多種肺癌細(xì)胞中呈高表達(dá)狀態(tài);mi R-130a和11R-DEP:611-628多肽(5μM)均可抑制A549細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡;11R-DEP:611-628多肽處理細(xì)胞后可提高A20轉(zhuǎn)錄水平,顯著減少核內(nèi)的NF-κB,促進(jìn)JNK磷酸化。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,DEPDC1可通過抑制A549細(xì)胞中A20的表達(dá)、調(diào)節(jié)NF-κB通路信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),從而抑制細(xì)胞凋亡。當(dāng)用11R-DEP:611-628多肽處理A549細(xì)胞后,JNK被激活,發(fā)揮保護(hù)細(xì)胞的作用。結(jié)論:1、miR-130a和11R-DEP:611-628多肽可有效抑制A549細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡;2、在A549細(xì)胞中,DEPDC1通過抑制A20表達(dá),激活NF-κB發(fā)揮抗凋亡作用;3、在A549細(xì)胞中,抑制JNK活性可增強(qiáng)11R-DEP:611-628多肽的凋亡誘導(dǎo)效果。
【學(xué)位單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R734.2
【部分圖文】：

結(jié)果.1 DEPDC1 在多種肺癌細(xì)胞株中表達(dá)根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，我們得知癌蛋白 DEPDC1 在肺癌組織中呈高狀態(tài)[18]，為了進(jìn)一步在體外研究 DEPDC1 作用機(jī)制，我們選取株常用的肺癌細(xì)胞株，即 H3255、HCC827、H1993、H1995 及 A5用 western blot 方法檢測(cè) DEPDC1 的表達(dá)水平。我們發(fā)現(xiàn)，DEPD這 5 種肺癌細(xì)胞株中均有表達(dá)，并且其在 H3255 和 A549 細(xì)胞株水平高于其他三種細(xì)胞株，考慮 A549 細(xì)胞為目前科研領(lǐng)域最為應(yīng)用的肺癌細(xì)胞株，故我們選取 A549 細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。

32圖 2. miR-130a 過表達(dá)抑制 A549 細(xì)胞增殖并且誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡。予以 A549 細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-130a 表達(dá)質(zhì)粒 72 h 處理。A 顯微成像技術(shù)觀察細(xì)胞形態(tài)。B 細(xì)胞計(jì)數(shù)。C qRT-PCR 技術(shù)檢測(cè) miR-130a 的轉(zhuǎn)錄水平。D 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) A549 細(xì)胞的凋亡水平。E western blot 技術(shù)檢測(cè) DEPDC1 的蛋白水平。F qRT-PCR 技術(shù)檢測(cè) A20 的轉(zhuǎn)錄水平。** p < 0.01；*** p <

差異（圖 3），并且其作用效果呈劑量依賴性。我們的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)提示，DEPDC1 通過與 ZNF224 形成復(fù)合物發(fā)揮其作用；此外，5 μM 的11R-DEP:611-628 多肽可有效抑制 A549 細(xì)胞增殖，并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此，我們選取 5 μM 為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的干擾多肽最佳藥物作用濃度。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2874297