發(fā)布時間：2020-11-07 18:03

　　 目的:DEP結(jié)構域蛋白1(DEPDC1)的異位表達與肺腺癌的不良預后密切相關,但是其作用及機制尚不明確。本研究擬檢測DEPDC1在肺癌細胞中的表達水平,分析DEPDC1在肺腺癌細胞中的作用,并研究其機制。方法:采用蛋白免疫印跡方法檢測DEPDC1在肺癌細胞系中的表達,篩選出DEPDC1高表達的A549細胞用于后續(xù)實驗研究。在A549細胞中表達DEPDC1抑制因子miR-130a,隨后檢測A549細胞的增殖與凋亡。用CCK-8技術確定11R-DEP:611-628多肽的最佳作用濃度后,用5μM的多肽處理A549細胞,結(jié)合免疫熒光、流式細胞術等方法研究多肽處理對A549細胞增殖和凋亡的影響。用JNK抑制劑+多肽處理A549細胞,檢測JNK在肺癌細胞中的功能。結(jié)果:DEPDC1在多種肺癌細胞中呈高表達狀態(tài);mi R-130a和11R-DEP:611-628多肽(5μM)均可抑制A549細胞增殖、促進其凋亡;11R-DEP:611-628多肽處理細胞后可提高A20轉(zhuǎn)錄水平,顯著減少核內(nèi)的NF-κB,促進JNK磷酸化。這些實驗結(jié)果表明,DEPDC1可通過抑制A549細胞中A20的表達、調(diào)節(jié)NF-κB通路信號轉(zhuǎn)導,從而抑制細胞凋亡。當用11R-DEP:611-628多肽處理A549細胞后,JNK被激活,發(fā)揮保護細胞的作用。結(jié)論:1、miR-130a和11R-DEP:611-628多肽可有效抑制A549細胞增殖、促進其凋亡;2、在A549細胞中,DEPDC1通過抑制A20表達,激活NF-κB發(fā)揮抗凋亡作用;3、在A549細胞中,抑制JNK活性可增強11R-DEP:611-628多肽的凋亡誘導效果。
【學位單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R734.2
【部分圖文】：

結(jié)果.1 DEPDC1 在多種肺癌細胞株中表達根據(jù)文獻報道，我們得知癌蛋白 DEPDC1 在肺癌組織中呈高狀態(tài)[18]，為了進一步在體外研究 DEPDC1 作用機制，我們選取株常用的肺癌細胞株，即 H3255、HCC827、H1993、H1995 及 A5用 western blot 方法檢測 DEPDC1 的表達水平。我們發(fā)現(xiàn)，DEPD這 5 種肺癌細胞株中均有表達，并且其在 H3255 和 A549 細胞株水平高于其他三種細胞株，考慮 A549 細胞為目前科研領域最為應用的肺癌細胞株，故我們選取 A549 細胞進行后續(xù)實驗研究。

32圖 2. miR-130a 過表達抑制 A549 細胞增殖并且誘導其發(fā)生凋亡。予以 A549 細胞轉(zhuǎn)染miR-130a 表達質(zhì)粒 72 h 處理。A 顯微成像技術觀察細胞形態(tài)。B 細胞計數(shù)。C qRT-PCR 技術檢測 miR-130a 的轉(zhuǎn)錄水平。D 流式細胞術檢測 A549 細胞的凋亡水平。E western blot 技術檢測 DEPDC1 的蛋白水平。F qRT-PCR 技術檢測 A20 的轉(zhuǎn)錄水平。** p < 0.01；*** p <

差異（圖 3），并且其作用效果呈劑量依賴性。我們的實驗數(shù)據(jù)提示，DEPDC1 通過與 ZNF224 形成復合物發(fā)揮其作用；此外，5 μM 的11R-DEP:611-628 多肽可有效抑制 A549 細胞增殖，并且具有統(tǒng)計學意義，因此，我們選取 5 μM 為后續(xù)實驗的干擾多肽最佳藥物作用濃度。
【參考文獻】

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本文編號：2874297