O-GalNAc糖基化是一種重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,參與調(diào)控多種細(xì)胞生命活動(dòng)。該修飾由多肽:N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶(ppGalNAc-Ts)家族成員催化起始。人體內(nèi)該酶家族共有20個(gè)成員,其中ppGalNAc-T13在正常生理狀態(tài)下特異性地表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng)及肺組織中。在病理?xiàng)l件下,該酶的異常表達(dá)已被報(bào)道參與神經(jīng)母細(xì)胞瘤及肺癌的發(fā)生發(fā)展,然而其背后的具體功能機(jī)制及其在其它惡性腫瘤中的作用仍然未知。因此,本論文著重探索了ppGalNAc-T13在肺癌及肝癌中的功能。本論文的第一部分主要探究了ppGalNAc-T13參與調(diào)控肺癌發(fā)展過程中的功能機(jī)制。首先,我們通過檢測(cè)細(xì)胞活力,發(fā)現(xiàn)ppGalNAc-T13的表達(dá)不影響肺癌細(xì)胞H460及H1299的增殖能力,但與其平板克隆形成能力密切相關(guān)。其次,由于腫瘤細(xì)胞的平板克隆形成能力是細(xì)胞干性的相關(guān)指標(biāo)之一,我們進(jìn)一步通過體外細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)及耐藥性檢測(cè)實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)在肺癌干細(xì)胞成球的過程中,ppGalNAc-T13的高表達(dá)能夠幫助肺癌細(xì)胞維持其自我更新能力及抵御抗癌藥物吉非替尼的作用。最后,通過檢測(cè)與細(xì)胞干性及耐藥相關(guān)的一些信號(hào)通路,發(fā)現(xiàn)ppGalNAc-T13的表達(dá)能夠影響表皮生長(zhǎng)因子受體、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子等信號(hào)通路,為部分解釋ppGalNAc-T13在肺癌中的功能機(jī)制提供了合理的線索。此外,通過對(duì)22株不同類型腫瘤細(xì)胞系中ppGalNAc-T13表達(dá)水平的檢測(cè),我們發(fā)現(xiàn)ppGalNAc-T13在部分肝癌細(xì)胞系中存在高表達(dá)。因此,本論文第二部分初步探究了ppGalNAc-T13在肝癌中的功能。在肝癌細(xì)胞系模型中,我們發(fā)現(xiàn)ppGalNAc-T13的高表達(dá)能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞MHCC-97L的增殖及遷移,同時(shí)激活表皮生長(zhǎng)因子受體及細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶信號(hào)通路,為后續(xù)進(jìn)一步研究ppGalNAc-T13在肝癌中的功能機(jī)制提供了前期基礎(chǔ)。綜上所述,本文通過肺癌細(xì)胞系腫瘤細(xì)胞行為學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)ppGalNAc-T13在肺癌細(xì)胞成球能力中具有重要功能,并且其表達(dá)能夠提高細(xì)胞對(duì)于吉非替尼的耐受性,其分子作用機(jī)制可能是通過表皮生長(zhǎng)因子及肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子信號(hào)通路的激活實(shí)現(xiàn)。同時(shí),本文發(fā)現(xiàn)ppGalNAc-T13在肝癌細(xì)胞中差異表達(dá),并初步探究了其影響的細(xì)胞表型以及相關(guān)分子機(jī)制。ppGalNAc-T13在肺癌及肝癌中的功能研究為深入理解其在腫瘤中的作用地位提供了新的見解。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R734.2;R735.7
【部分圖文】：

圖 2-1 ppGalNAc-T13 在不同腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平Fig.2-1 The expression of ppGalNAc-T13 in various cancer celR 檢測(cè) ppGalNAc-T13 在不同腫瘤細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄水平跡檢測(cè) ppGalNAc-T13 不同腫瘤細(xì)胞中的蛋白表達(dá)水平免疫印跡條帶定量系中 ppGalNAc-T13 的蛋白表達(dá)水平13 表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌病人生存率的相關(guān)性c-T13 沉默表達(dá)及過表達(dá)肺癌細(xì)胞系的構(gòu)建結(jié)果暗示我們，ppGalNAc-T13 可能通過其 O-GalNA發(fā)揮一定的功能，并影響其進(jìn)程。但具體功能及機(jī)制目先基于 ppGalNAc-T13 在不同肺癌細(xì)胞系中的表達(dá)水22

圖 2-2 ppGalNAc-T13 沉默表達(dá)的 H460 細(xì)胞構(gòu)建及驗(yàn)證Fig.2-2 The construction and validation of ppGalNAc-T13 in H460 cell li-T13 沉默表達(dá)的 H460 細(xì)胞 ppGalNAc-T13 的轉(zhuǎn)錄水平-T13 沉默表達(dá)的 H460 細(xì)胞 ppGalNAc-T13 的蛋白表達(dá)水平c-T13 沉默表達(dá)的 H460 細(xì)胞全蛋白的 O-GalNAc 糖基化水平c-T13 沉默表達(dá)的 H460 細(xì)胞表面膜蛋白的 O-GalNAc 糖基化水平a)c)b)d)

圖 2-3 ppGalNAc-T13 沉默表達(dá)的 A549 細(xì)胞構(gòu)建及驗(yàn)證Fig.2-3 The construction and validation of ppGalNAc-T13 in A549 cec-T13 沉默表達(dá)的 A549 細(xì)胞 ppGalNAc-T13 的轉(zhuǎn)錄水平c-T13 沉默表達(dá)的 A549 細(xì)胞 ppGalNAc-T13 的蛋白表達(dá)水平Ac-T13 沉默表達(dá)的 A549 細(xì)胞全蛋白的 O-GalNAc 糖基化水平Ac-T13 沉默表達(dá)的 A549 細(xì)胞表面膜蛋白的 O-GalNAc 糖基化水平c-T13 沉默表達(dá)的 A549 細(xì)胞形態(tài)（紅色箭頭表示變圓皺縮的細(xì)胞）25
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本文編號(hào)：2873930