目的:淋巴管是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要通道,而腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散轉(zhuǎn)移是腫瘤患者死亡的主要原因,我們旨在研究腫瘤相關(guān)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)和分泌的SEMA4C在腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移中所起的作用,并評估血清SEMA4C能否早期診斷乳腺癌。方法:通過淋巴管激光捕獲顯微切割分離腫瘤相關(guān)的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞和正常的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞,鑒定后進(jìn)行c DNA表達(dá)譜芯片分析來確定淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)差異。m RNA和蛋白水平上的差異通過實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白免疫印跡技術(shù)(WB)檢測。蛋白質(zhì)質(zhì)譜技術(shù)、細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞培養(yǎng)上清的WB檢測以及細(xì)胞培養(yǎng)上清的ELISA檢測確定了分泌形式的存在。并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測了小樣本健康對照、乳腺癌和宮頸癌患者的血標(biāo)本。用免疫熒光和免疫組化技術(shù)評估SEMA4C的定位和表達(dá)水平。并通過活體成像評估淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況。SEMA4C在體外對淋巴管生成的作用通過淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和成管實(shí)驗(yàn)來觀察的。接下來我們進(jìn)行了一項(xiàng)大樣本的回顧性研究,在2014年9月到2016年6月間,于華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院甲乳外科和體檢中心共收集948名乳腺癌、乳腺良性腫瘤患者和健康女性的血清標(biāo)本,并收集參與者病歷信息或者打電話咨詢,同時(shí)進(jìn)行血清SEMA4C值檢測,最終通過受試者工作曲線(ROC)來計(jì)算診斷的準(zhǔn)確性。結(jié)果:腫瘤相關(guān)的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)SEMA4C并能產(chǎn)生分泌型的片段,并在細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞培養(yǎng)上清中得到了證明。在乳腺癌和宮頸癌患者血清中檢測到了高水平的SEMA4C。SEMA4C通過與腫瘤細(xì)胞和淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞相結(jié)合來發(fā)揮作用,體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明了SEMA4C通過不同的信號通路來介導(dǎo)淋巴管新生、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移、增殖。我們檢測了948名女性(449例乳腺癌術(shù)前標(biāo)本,182例乳腺癌術(shù)后標(biāo)本,206例乳腺良性腫瘤術(shù)前標(biāo)本和111例健康對照標(biāo)本)中的血清SEMA4C值,并進(jìn)行臨床病理分析。發(fā)現(xiàn)浸潤性乳腺癌患者的血清中SEMA4C水平顯著高于所有對照組。繪制ROC曲線后選取最佳診斷乳腺癌的SEMA4C截?cái)帱c(diǎn)為5.00 ng/m L。乳腺癌與健康對照相比較:AUC為0.807,(95%CI:0.76-0.86),敏感度62.58%,特異度81.08%;乳腺癌與良性乳腺疾病相比較:AUC為0.748(95%CI:0.71-0.79),敏感度為62.36%,特異度為71.36%;乳腺癌與非乳腺癌相比較:AUC為0.768(95%CI:0.73-0.80),敏感度和特異度分別為62.58%和74.76%。另外在治療后監(jiān)測患者血清SEMA4C時(shí)發(fā)現(xiàn)SEMA4C水平下降,但并沒有恢復(fù)到健康對照的水平。結(jié)論:SEMA4C能夠以分泌因子的形式存在并促進(jìn)淋巴管新生和腫瘤細(xì)胞淋巴轉(zhuǎn)移,SEMA4C可能成為乳腺癌治療過程中的一個(gè)行之有效的靶點(diǎn),血清中高的SEMA4C可能是乳腺癌和宮頸癌的一個(gè)生物標(biāo)志物。血清SEMA4C有可能成為早期發(fā)現(xiàn)和診斷乳腺癌的一種新型血清蛋白標(biāo)志物。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

結(jié)果A4C 在腫瘤相關(guān)的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá)找到腫瘤相關(guān)的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞和正常的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞之間的顯微切割技術(shù)對淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行分離，并采用淋巴管內(nèi)皮細(xì)離出來的細(xì)胞（圖 1.1-A），從 Sciencell 購買的 HLECs 作為陽性離和培養(yǎng)是成功的。后將分離培養(yǎng)的細(xì)胞提取 RNA、逆轉(zhuǎn)錄通過現(xiàn)了腫瘤相關(guān)的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞與正常 LECs 之間的差異基因（分別在乳腺癌和宮頸癌組織分離和培養(yǎng)的 LECs 中對芯片中有差了 RT-PCR 驗(yàn)證（圖 1.1-C），發(fā)現(xiàn)驗(yàn)證的結(jié)果與芯片的結(jié)果相一在 semaphorins 家族，所以我們選擇了前十種基因中排在第一位的研究的對象。

圖 1.2、 組織切片和細(xì)胞水平發(fā)現(xiàn) SEMA4C 在腫瘤相關(guān)的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上高表達(dá)。（A-C）對乳腺癌組織和宮頸癌組織進(jìn)行連續(xù)切片，并分別進(jìn)行 SEMA4C、LYVE1和 SEMA4C、CD34 免疫組織化學(xué)染色，發(fā)現(xiàn) SEMA4C 高表達(dá)的區(qū)域與 LYVE1 表達(dá)

圖 1.3、 SEMA4C 是一種分泌蛋白。（A）蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析腫瘤相關(guān)的 LECs 的培養(yǎng)上清，證實(shí)了 SEMA4C 分泌形式的存在，發(fā)現(xiàn)特異性肽段的序列分別是AVESDCYAEQVVAR 和 DLPAEQPGSFLYDAR（。B）WB 分析正常和腫瘤相關(guān)的 LECs細(xì)胞內(nèi)和培養(yǎng)上清中 SEMA4C 的水平，左側(cè)為細(xì)胞內(nèi)，右側(cè)為上清中（上清采用免
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Jianjian Gao;Qingyun Zhang;Jianjun Xu;Lijuan Guo;Xuefeng Li;;Clinical significance of serum miR-21 in breast cancer compared with CA153 and CEA[J];Chinese Journal of Cancer Research;2013年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 韓迎燕;線粒體蛋白QCR2降解p53促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展[D];華中科技大學(xué);2016年

2 劉眈;SIX1促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移[D];華中科技大學(xué);2014年

本文編號：2861941