目的:探討microRNA-378(miR-378)對(duì)腎癌細(xì)胞體外增殖和遷移能力的影響及其可能的作用機(jī)制并探討miR-378對(duì)前列腺癌細(xì)胞體外增殖能力及對(duì)成骨前體細(xì)胞分化的影響。方法:在腎癌的相關(guān)研究中(第一部分),使用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析腎癌和正常腎上皮組織中miR-378的表達(dá)情況并使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)的方法在人腎癌細(xì)胞系及人腎小管上皮細(xì)胞系(HK2)中驗(yàn)證miR-378的表達(dá)情況。人工合成miR-378 mimic和inhibitor并轉(zhuǎn)染腎癌細(xì)胞系。使用CCK8法檢測(cè)miR-378對(duì)腎癌細(xì)胞增殖的影響,通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-378對(duì)腎癌細(xì)胞遷移的影響,通過(guò)生物信息學(xué)分析篩選腎癌細(xì)胞中miR-378可能的靶基因并通過(guò)qRT-PCR及蛋白免疫印跡(western blot)方法驗(yàn)證。在前列腺癌的相關(guān)研究中(第二部分),通過(guò)掃描電鏡觀察及粒徑分布儀檢測(cè)分析不同來(lái)源外泌體的形態(tài)和純度。人工合成miR-378 mimic并分別轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞系LNCaP細(xì)胞和小鼠成骨前體細(xì)胞系MC3T3-E1細(xì)胞。通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)比較前列腺癌細(xì)胞系LNCaP細(xì)胞和前列腺良性增生細(xì)胞系BPH1細(xì)胞培養(yǎng)上清來(lái)源的外泌體中miR-378的表達(dá)差異。使用CCK8法檢測(cè)miR-378并同時(shí)抑制外泌體的釋放對(duì)LNCaP細(xì)胞增殖的影響。通過(guò)生物信息學(xué)分析并通過(guò)qRT-PCR、免疫熒光染色驗(yàn)證LNCaP細(xì)胞及MC3T3-E1細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-378并抑制外泌體釋放后miR-378相應(yīng)靶基因的表達(dá)變化。結(jié)果:在腎癌的相關(guān)研究中(第一部分)我們發(fā)現(xiàn)miR-378在腎癌組織和腎癌細(xì)胞系中表達(dá)顯著上調(diào)(P0.001);過(guò)表達(dá)miR-378在體外促進(jìn)腎癌細(xì)胞的增殖(P0.01)及遷移能力(P0.001)。本研究首次在腎癌中篩選并鑒定了miR-378的靶基因大型腫瘤抑制因子2(large tumor suppressor 2,LATS2),qRT-PCR和western blot實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了該基因表達(dá)與miR-378的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。在前列腺癌的相關(guān)研究中(第二部分),qRT-PCR實(shí)驗(yàn)表明,與BPH1細(xì)胞比較,LNCaP細(xì)胞體外培養(yǎng)上清來(lái)源的外泌體中miR-378表達(dá)量顯著升高(P0.01)。在LNCaP細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-378并同時(shí)抑制外泌體釋放在體外可抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖(P0.01)。在MC3T3-E1細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-378并抑制外泌體釋放顯著上調(diào)成骨前體細(xì)胞分化標(biāo)志物osteocalcin、OSX的表達(dá)。本研究首次在前列腺癌細(xì)胞中篩選并鑒定了miR-378的靶基因MAOA,在MC3T3-E1細(xì)胞中篩選并鑒定了miR-378的靶基因Gli3和Schnurri3,通過(guò)qRT-PCR驗(yàn)證了靶基因的表達(dá)與miR-378的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。在LNCaP和MC3T3-E1細(xì)胞中分別過(guò)表達(dá)miR-378并抑制外泌體釋放可抑制MAOA及Gli3和Schnurri3的表達(dá)(P0.01)。結(jié)論:腎癌的相關(guān)研究中(第一部分)表明,在體外過(guò)表達(dá)miR-378可通過(guò)抑制LATS2表達(dá)增強(qiáng)人腎癌細(xì)胞的增殖和遷移。前列腺癌的相關(guān)研究中(第二部分)表明,體外過(guò)表達(dá)miR-378可通過(guò)抑制MAOA表達(dá)而抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖,可通過(guò)抑制Gli3和Schnurri3表達(dá)促進(jìn)成骨前體細(xì)胞的分化。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737
【部分圖文】：

圖 1-1 miR-378 在腎癌臨床樣本和腎癌細(xì)胞系中的顯著高表達(dá)。 A:腎癌組織和正常腎上皮組織的 miR-378 的相對(duì)表達(dá)情況。NC：正常腎上皮組織對(duì)照。B：癌組織高表達(dá)和低表達(dá) miR-378 的腎癌病人的總體生存情況。C：qRT-PCR 檢測(cè)腎癌細(xì)胞系和腎小管上皮細(xì)胞系中 miR-378 的相對(duì)表達(dá)情況。Figure 1-1 miR-378 is significantly overexpressed in renal Carcinoma tissues and cell lines.A: The relative expression level of miR-378 in renal Carcinoma tissues（n=379） and normal renaltissues(n=36). NC: normal control *P<0.05. B: Kaplan-Meier analysis of the overall survival ofpatients with renal carcinoma with high and low levels of miR-378 expression. *** P<0.001. C: Therelative expression level of miR-378 in renal Carcinoma cell lines and in renal proximal tubularepithelial cell line (HK2) detected by qRT-PCR. *** P<0.001.3.2 過(guò)表達(dá)或者敲低 miR-378 對(duì)腎癌細(xì)胞增殖的影響為了研究 miR-378 對(duì)細(xì)胞增殖的影響，我們首先將 miR-378mimic 轉(zhuǎn)染 786-O和 Caki-1 細(xì)胞，利用 CCK-8 方法分析細(xì)胞增殖能力的變化。如圖 2A 顯示，過(guò)表

圖 1-2: miR-378 可顯著促進(jìn) 786-O 和 Caki-1 細(xì)胞的增殖。 A：CCK8 實(shí)驗(yàn)表明 miR-378表達(dá)可明顯促進(jìn)786-O和Caki-1 細(xì)胞的增殖。B: 敲降miR-378則明顯抑制786-O和Caki-1胞的增殖Figure 1-2: miR-378 promoted the proliferation of 786-O and Caki-1 cells. A：miR-378verexpression significantly promoted the growth of both 786-O and Caki-1 cells. B: miR-378nockdown significantly inhibited the growth of both 786-O and Caki-1 cells, as demonstrated byCK-8 proliferation assay..3 過(guò)表達(dá)或者敲低 miR-378 對(duì)腎癌細(xì)胞遷移的影響我們選取低表達(dá) miR-378 的腎癌細(xì)胞系 786-O 過(guò)表達(dá) miR-378,選擇高表達(dá)iR-378 的腎癌細(xì)胞系 Caki-1 進(jìn)行敲降 miR-378，利用 Transwell 小室檢測(cè) miR-378腎癌細(xì)胞遷移能力的影響。結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá) miR-378 后 786-O 細(xì)胞的遷移能顯著增加（P＜0.001）（圖 3A）。敲降 miR-378 后 Caki-1 細(xì)胞的遷移能力顯著減

圖 1-3：miR-378 對(duì)腎癌細(xì)胞遷移的影響。 A：過(guò)表達(dá) miR-378 可以顯著增加 786-O 細(xì)胞的遷移能力。B：敲降 miR-378 可以顯著降低 Caki-1 細(xì)胞的遷移能力。Figure1-3: The effect of miR-378 on the migration of renal cancer cells. A: miR-378overexpression significantly promoted the migration of 786-O cells. B: miR-378 knockdownsignificantly inhibited the migration of Caki-1 cells. Migrated cells were counted under a 100×microscope field. Scale Bar: ***P<0.001.3.4 過(guò)表達(dá)或者敲低 miR-378 對(duì)腎癌細(xì)胞遷移的影響分別在 786-O 細(xì)胞中過(guò)表達(dá) miR-378、在 Caki-1 細(xì)胞中敲降 miR-378 后，利用劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè) miR-378 對(duì)腎癌細(xì)胞遷移的影響。如圖 4A 顯示，過(guò)表達(dá)miR-378 促進(jìn) 786-O 細(xì)胞的遷移。敲降 miR-378 抑制 Caki-1 細(xì)胞的遷移。
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本文編號(hào)：2857380