研究目的探討膽汁酸膜受體(G Protein-Coupled Bile Acid Receptor 1,GPBAR1,TGR5)在非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表達(dá)、作用機(jī)制及其臨床意義。研究方法1.利用免疫組化法檢測(cè)160例NSCLC及相應(yīng)癌旁肺組織中TGR5的表達(dá),分析TGR5表達(dá)與NSCLC患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。2.采用基因干擾或過(guò)表達(dá)等手段,從體內(nèi)、體外多個(gè)層面,考察TGR5對(duì)NSCLC細(xì)胞增殖、周期、凋亡、遷移和侵襲以及腫瘤生長(zhǎng)的影響,利用Western blot技術(shù)檢測(cè)TGR5對(duì)細(xì)胞周期蛋白、運(yùn)動(dòng)分子及基質(zhì)降解酶的作用,明確TGR5調(diào)控NSCLC增殖和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。3.探討TGR5對(duì)Janus激酶2/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(Janus kinase2/Signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信號(hào)通路的影響;采用熒光素酶(Luciferase)報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)TGR5對(duì)STAT3的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用;考察JAK2/STAT3通路對(duì)TGR5誘導(dǎo)的NSCLC細(xì)胞增殖、運(yùn)動(dòng)及腫瘤生長(zhǎng)的影響,探討JAK2抑制劑在TGR5高表達(dá)腫瘤中的應(yīng)用。利用免疫組化法檢測(cè)同一NSCLC組織中磷酸化STAT3(p-STAT3~(Tyr705))的表達(dá)情況,分析TGR5與p-STAT3~(Tyr705)表達(dá)的相關(guān)性,并進(jìn)行預(yù)后生存分析。4.采用ELISA法檢測(cè)NSCLC患者及健康人中的血清膽汁酸水平,分析NSCLC中膽汁酸水平與TGR5表達(dá)的相關(guān)性,并進(jìn)一步通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)明確膽汁酸對(duì)NSCLC細(xì)胞相關(guān)表型的影響。研究結(jié)果1.免疫組化結(jié)果顯示,與癌旁組織相比,TGR5在NSCLC癌組織中表達(dá)顯著升高(P0.001)。TGR5高表達(dá)者臨床分期較晚,腫瘤直徑較大(P0.05)。TGR5高表達(dá)是NSCLC患者預(yù)后不良的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)(Hazard ratio[HR]=1.967,95%CI=1.203-3.214;P=0.007)。2.TGR5可通過(guò)上調(diào)細(xì)胞周期蛋白分子的表達(dá)如cyclin D1,cyclin E1,p-Rb,c-Myc,CDK4/6等,促進(jìn)NSCLC細(xì)胞增殖;敲低TGR5引起NSCLC細(xì)胞G1期阻滯,而不影響細(xì)胞凋亡。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)TGR5促進(jìn)裸小鼠移植瘤生長(zhǎng)。此外,TGR5可通過(guò)調(diào)控基質(zhì)降解酶MMP2、MMP9、RhoA和ROCK1的表達(dá)而促進(jìn)NSCLC細(xì)胞遷移和侵襲能力。3.Western blot結(jié)果顯示TGR5促進(jìn)JAK2和STAT3的磷酸化水平,并可上調(diào)STAT3的轉(zhuǎn)錄活性。此外,JAK2/STAT3通路的活化介導(dǎo)了TGR5高表達(dá)促進(jìn)的NSCLC細(xì)胞增殖、運(yùn)動(dòng),且JAK2抑制劑明顯逆轉(zhuǎn)TGR5高表達(dá)誘導(dǎo)的腫瘤體內(nèi)生長(zhǎng)。在NSCLC組織樣本中,TGR5與p-STAT3~(Tyr705)表達(dá)呈明顯正相關(guān),兩者同時(shí)高表達(dá)的NSCLC患者預(yù)后最差。4.NSCLC患者血清中的膽汁酸水平如DCA,CDCA和UDCA明顯比健康人高;且膽汁酸水平與TGR5表達(dá)呈正相關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)顯示DCA可通過(guò)活化TGR5促進(jìn)NSCLC細(xì)胞運(yùn)動(dòng)。研究結(jié)論1.本研究首次發(fā)現(xiàn)TGR5在NSCLC患者癌組織中表達(dá)升高,TGR5高表達(dá)是NSCLC患者預(yù)后不良的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo);2.TGR5通過(guò)活化JAK2/STAT3信號(hào)通路促進(jìn)NSCLC細(xì)胞體外增殖、運(yùn)動(dòng)和體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng);3.NSCLC患者血清中膽汁酸水平較高,且與TGR5表達(dá)呈正相關(guān);膽汁酸通過(guò)活化TGR5促進(jìn)NSCLC細(xì)胞遷移和侵襲。本研究首次在國(guó)內(nèi)外揭示了TGR5在NSCLC發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)作用,因此,TGR5有望成為判斷NSCLC預(yù)后和治療的新靶標(biāo)。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R734.2
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中英文縮略詞表
緒論
第一章 TGR5在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及臨床意義探討
    1.1 引言
    1.2 材料與方法
    1.3 結(jié)果
    1.4 討論
    小結(jié)
第二章 TGR5 對(duì)非小細(xì)胞肺癌增殖、周期、遷移等生物學(xué)行為的影響
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
    2.3 結(jié)果
    2.4 討論
    小結(jié)
第三章 TGR5 活化JAK2/STAT3 通路促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖、運(yùn)動(dòng)和腫瘤生長(zhǎng)
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
    3.3 結(jié)果
    3.4 討論
    小結(jié)
第四章 膽汁酸通過(guò)TGR5 受體發(fā)揮促癌作用
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
    4.3 結(jié)果
    4.4 討論
    小結(jié)
全文總結(jié)及下一步研究方向
    結(jié)論
    下一步研究方向
參考文獻(xiàn)
致謝
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    期刊論文
    會(huì)議論文

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