目的:本研究旨在細胞水平及分子水平探究人參皂苷Rh1對HER2陽性乳腺癌細胞(SKBR3細胞)的影響。1.探討人參皂苷Rh1對乳腺癌SKBR3細胞的惡性生物學行為和DDX5表達的影響。2.檢測DDX5在乳腺癌組織中的表達水平及DDX5與臨床分期、病理分級等臨床病理特征的關系。方法:1.采用MTS實驗檢測不同濃度人參皂苷Rh1(0、10、50、100、500,uMol)對乳腺癌SKBR3細胞增殖的影響,選擇有意義的藥物濃度及作用時間。2.采用劃痕實驗觀察人參皂苷Rh1在24h、48h時對乳腺癌SKBR3細胞遷移能力的影響。3.采用Transwell侵襲實驗觀察人參皂苷Rh1在24h時對乳腺癌SKBR3細胞侵襲能力的影響。4.采用流式細胞術檢測實驗觀察人參皂苷Rh1在48h時對乳腺癌SKBR3細胞凋亡能力和細胞周期的影響。5.采用免疫印跡法(Western-Blot)檢測人參皂苷Rh1在48h對乳腺癌SKBR3細胞DDX5蛋白表達的影響。6.采用實時熒光定量PCR(Realtime-PCR)檢測人參皂苷Rh1在48h對乳腺癌SKBR3細胞DDX5基因表達的影響。7.收集并篩選出2014年12月1日-2017年12月31日間沈陽軍區(qū)總醫(yī)院存檔的術前未經(jīng)放化療、中藥及其他治療并帶有詳細病理資料及其癌組織蠟塊標本的98例乳腺癌術后患者,其中HER2過表達型(經(jīng)Fish檢測HER2擴增)乳腺癌患者35例,HER2陰性(HER2陰或1+或經(jīng)Fish檢測陰性的2+)乳腺癌63例。通過免疫組織化學法檢測乳腺癌組織中DDX5的表達,結合臨床病理資料,觀察并統(tǒng)計分析DDX5與臨床分期、病理分級等臨床病理特征的關系。結果:1.人參皂苷Rh1對HER2陽性乳腺癌細胞生長的影響(1)MTS實驗結果發(fā)現(xiàn)500uMol人參皂苷Rh1在24h、48h時對HER2陽性人乳腺癌細胞(SKBR3細胞)增殖的抑制有統(tǒng)計學意義,其抑制率分別為18.6%與32.8%。人參皂苷Rh1粉末用二甲基亞砜(DMSO)溶解,遂將以下實驗分為3組:空白對照組,DMSO組,人參皂苷Rh1組。(2)流式細胞術檢測結果發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1可以誘導SKBR3細胞的凋亡,并且可以使SKBR3細胞阻滯于S期。2.人參皂苷Rh1對HER2陽性乳腺癌細胞遷移、侵襲能力的影響(1)劃痕實驗結果發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1干預24h、48h后SKBR3細胞遷移能力明顯減弱。(2)Transwell侵襲實驗結果發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1干預24h后SKBR3細胞侵襲能力明顯減弱。3.人參皂苷Rh1對HER2陽性乳腺癌細胞中DDX5表達的影響(1)免疫印跡法(Western-blot)檢測結果提示500uMol人參皂苷Rh1作用48h可減弱乳腺癌SKBR3細胞DDX5蛋白表達。(2)Rt-PCR檢測結果提示500uMol人參皂苷Rh1在48h對乳腺癌SKBR3細胞中DDX5基因的表達未有抑制作用。4.通過對帶有詳細臨床分期和病理資料的乳腺癌組織切片進行DDX5的免疫組化染色并評分,統(tǒng)計分析得出相比HER2陰性乳腺癌,DDX5蛋白在HER2陽性乳腺癌組織中表達較高;且DDX5蛋白表達高的乳腺癌患者臨床分期較晚、病理分級較差。結論:本課題研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1可抑制SKBR3細胞的增殖、誘導SKBR3細胞的凋亡、使其阻滯于S期;可以抑制SKBR3細胞的遷移、侵襲能力;可以抑制SKBR3細胞中DDX5蛋白的表達,而未抑制DDX5基因的擴增。免疫組織化學染色結果提示DDX5在HER2陽性乳腺癌組織中高表達,且與乳腺癌病理分級、臨床分期有一定的相關性,DDX5高表達的患者病理分級較差、臨床分期較晚。DDX5可能有望成為判斷乳腺癌不良預后的標記物和潛在臨床治療靶點。人參皂苷Rh1可能通過抑制DDX5轉錄后的程序從而抑制DDX5蛋白表達進而影響乳腺癌SKBR3細胞的惡性生物學行為。
【學位單位】：遼寧中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

：不同濃度人參皂苷 Rh1 在不同時間點對 SKBR3 細胞的05，—X表示均值，S 表示標準差，細胞成活率=（用藥組驗提示 500uMol 的人參皂苷 Rh1 可以抑制 SKB記錄空白對照組、DMSO 組以及人參皂苷 Rh1 組4h、48h 細胞劃痕損傷修復情況，觀察到用藥組。運用 ImageJ 軟件計算各組各時間段遷移面積（0h 平均區(qū)域面積-24h 或 48h 平均區(qū)域面積）軟件處理數(shù)據(jù)，繪圖（圖 2），結果顯示：500u

- 21 -圖 2 人參皂苷 Rh1 對 SKBR3 細胞遷移能力的影響驗提示 500uMol 的人參皂苷 Rh1 可以抑制 SKBR3 細SO 組以及人參皂苷 Rh1 組干預 24h 后，行 Transwel襲數(shù)目計算平均值，運用統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)并繪參皂苷 Rh1 組與其他兩組比較 SKBR3 細胞穿過基底膜義（P 值<0.05）。

人參皂苷Rh1對SKBR3細胞侵襲能力的影響
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本文編號：2851387