目的:本研究旨在細(xì)胞水平及分子水平探究人參皂苷Rh1對(duì)HER2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞(SKBR3細(xì)胞)的影響。1.探討人參皂苷Rh1對(duì)乳腺癌SKBR3細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為和DDX5表達(dá)的影響。2.檢測(cè)DDX5在乳腺癌組織中的表達(dá)水平及DDX5與臨床分期、病理分級(jí)等臨床病理特征的關(guān)系。方法:1.采用MTS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度人參皂苷Rh1(0、10、50、100、500,uMol)對(duì)乳腺癌SKBR3細(xì)胞增殖的影響,選擇有意義的藥物濃度及作用時(shí)間。2.采用劃痕實(shí)驗(yàn)觀察人參皂苷Rh1在24h、48h時(shí)對(duì)乳腺癌SKBR3細(xì)胞遷移能力的影響。3.采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)觀察人參皂苷Rh1在24h時(shí)對(duì)乳腺癌SKBR3細(xì)胞侵襲能力的影響。4.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)觀察人參皂苷Rh1在48h時(shí)對(duì)乳腺癌SKBR3細(xì)胞凋亡能力和細(xì)胞周期的影響。5.采用免疫印跡法(Western-Blot)檢測(cè)人參皂苷Rh1在48h對(duì)乳腺癌SKBR3細(xì)胞DDX5蛋白表達(dá)的影響。6.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Realtime-PCR)檢測(cè)人參皂苷Rh1在48h對(duì)乳腺癌SKBR3細(xì)胞DDX5基因表達(dá)的影響。7.收集并篩選出2014年12月1日-2017年12月31日間沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院存檔的術(shù)前未經(jīng)放化療、中藥及其他治療并帶有詳細(xì)病理資料及其癌組織蠟塊標(biāo)本的98例乳腺癌術(shù)后患者,其中HER2過(guò)表達(dá)型(經(jīng)Fish檢測(cè)HER2擴(kuò)增)乳腺癌患者35例,HER2陰性(HER2陰或1+或經(jīng)Fish檢測(cè)陰性的2+)乳腺癌63例。通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)乳腺癌組織中DDX5的表達(dá),結(jié)合臨床病理資料,觀察并統(tǒng)計(jì)分析DDX5與臨床分期、病理分級(jí)等臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果:1.人參皂苷Rh1對(duì)HER2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響(1)MTS實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)500uMol人參皂苷Rh1在24h、48h時(shí)對(duì)HER2陽(yáng)性人乳腺癌細(xì)胞(SKBR3細(xì)胞)增殖的抑制有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其抑制率分別為18.6%與32.8%。人參皂苷Rh1粉末用二甲基亞砜(DMSO)溶解,遂將以下實(shí)驗(yàn)分為3組:空白對(duì)照組,DMSO組,人參皂苷Rh1組。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1可以誘導(dǎo)SKBR3細(xì)胞的凋亡,并且可以使SKBR3細(xì)胞阻滯于S期。2.人參皂苷Rh1對(duì)HER2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響(1)劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1干預(yù)24h、48h后SKBR3細(xì)胞遷移能力明顯減弱。(2)Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1干預(yù)24h后SKBR3細(xì)胞侵襲能力明顯減弱。3.人參皂苷Rh1對(duì)HER2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞中DDX5表達(dá)的影響(1)免疫印跡法(Western-blot)檢測(cè)結(jié)果提示500uMol人參皂苷Rh1作用48h可減弱乳腺癌SKBR3細(xì)胞DDX5蛋白表達(dá)。(2)Rt-PCR檢測(cè)結(jié)果提示500uMol人參皂苷Rh1在48h對(duì)乳腺癌SKBR3細(xì)胞中DDX5基因的表達(dá)未有抑制作用。4.通過(guò)對(duì)帶有詳細(xì)臨床分期和病理資料的乳腺癌組織切片進(jìn)行DDX5的免疫組化染色并評(píng)分,統(tǒng)計(jì)分析得出相比HER2陰性乳腺癌,DDX5蛋白在HER2陽(yáng)性乳腺癌組織中表達(dá)較高;且DDX5蛋白表達(dá)高的乳腺癌患者臨床分期較晚、病理分級(jí)較差。結(jié)論:本課題研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1可抑制SKBR3細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)SKBR3細(xì)胞的凋亡、使其阻滯于S期;可以抑制SKBR3細(xì)胞的遷移、侵襲能力;可以抑制SKBR3細(xì)胞中DDX5蛋白的表達(dá),而未抑制DDX5基因的擴(kuò)增。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示DDX5在HER2陽(yáng)性乳腺癌組織中高表達(dá),且與乳腺癌病理分級(jí)、臨床分期有一定的相關(guān)性,DDX5高表達(dá)的患者病理分級(jí)較差、臨床分期較晚。DDX5可能有望成為判斷乳腺癌不良預(yù)后的標(biāo)記物和潛在臨床治療靶點(diǎn)。人參皂苷Rh1可能通過(guò)抑制DDX5轉(zhuǎn)錄后的程序從而抑制DDX5蛋白表達(dá)進(jìn)而影響乳腺癌SKBR3細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。
【學(xué)位單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

：不同濃度人參皂苷 Rh1 在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì) SKBR3 細(xì)胞的05，—X表示均值，S 表示標(biāo)準(zhǔn)差，細(xì)胞成活率=（用藥組驗(yàn)提示 500uMol 的人參皂苷 Rh1 可以抑制 SKB記錄空白對(duì)照組、DMSO 組以及人參皂苷 Rh1 組4h、48h 細(xì)胞劃痕損傷修復(fù)情況，觀察到用藥組。運(yùn)用 ImageJ 軟件計(jì)算各組各時(shí)間段遷移面積（0h 平均區(qū)域面積-24h 或 48h 平均區(qū)域面積）軟件處理數(shù)據(jù)，繪圖（圖 2），結(jié)果顯示：500u

- 21 -圖 2 人參皂苷 Rh1 對(duì) SKBR3 細(xì)胞遷移能力的影響驗(yàn)提示 500uMol 的人參皂苷 Rh1 可以抑制 SKBR3 細(xì)SO 組以及人參皂苷 Rh1 組干預(yù) 24h 后，行 Transwel襲數(shù)目計(jì)算平均值，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)并繪參皂苷 Rh1 組與其他兩組比較 SKBR3 細(xì)胞穿過(guò)基底膜義（P 值<0.05）。

人參皂苷Rh1對(duì)SKBR3細(xì)胞侵襲能力的影響
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本文編號(hào)：2851387