第一部分膜型和分泌型的IL-1α在急性肝損傷中的作用目的：IL-1α主要表達在細胞膜上,但在炎癥狀態(tài)下,IL-1α也可以分泌到細胞外。分泌型和膜型的IL-1α在急性肝臟炎癥中的作用尚不清楚。因此我們研究了分泌型和膜型的IL-1α在四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷模型中的作用和功能。方法：首先構(gòu)建了能表達小鼠分泌型和膜型IL-1α的微環(huán)質(zhì)粒,通過高壓水流動力學(xué)注射的方法將微環(huán)質(zhì)粒注射到小鼠體內(nèi),從而使目的基因表達在小鼠的肝臟中,然后使用四氯化碳誘導(dǎo)建立小鼠急性肝損傷模型。利用流式細胞術(shù)檢測小鼠體內(nèi)免疫細胞亞群的比例。CBA試劑盒檢測小鼠血清中細胞因子的水平。結(jié)果：在CC14誘導(dǎo)的急性肝損傷中,分泌型IL-1α?xí)又丶毙愿螕p傷,而膜型的IL-1α可以減輕肝損傷。進一步的結(jié)果表明分泌型IL-1α?xí)龠MT細胞的活化,還能促進MDSC的增殖。清除MDSC會加重肝損傷,證明在此過程中MDSC可能起到負反饋調(diào)控的作用。此外,IL-1α誘導(dǎo)肝細胞分泌IL-6,在體內(nèi)中和IL-6會降低MDSC的增殖。分泌IL-1α還會促進肝細胞表達趨化因子CCL2和CXCL5,而且CCL2和CXCL5的受體拮抗劑能明顯減少MDSC遷移的數(shù)量。結(jié)論：實驗結(jié)果證明分泌型和膜型IL-1α在急性肝損傷中發(fā)揮著不同的作用。分泌型IL-1α不僅可以促進T細胞的活化,還能通過上調(diào)IL-6水平來促進MDSC的增殖或通過促進肝細胞產(chǎn)生CCL2和CXCL5來促進MDSC到肝臟的遷移。因此控制IL-1α的分泌可能有助于調(diào)控急性肝臟炎癥過程。第二部分膜型的IL-1α在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制研究目的：肝細胞肝癌是一個治療方案選擇有限、預(yù)后不良的全球性的健康問題。炎癥與肝損傷、肝細胞重建密切相關(guān),它會導(dǎo)致肝臟纖維化、肝硬化并最終發(fā)展為肝癌。IL-1α屬于雙功能細胞因子,它是一個非常重要的炎性因子,參與炎癥和腫瘤的發(fā)展。IL-1α在體內(nèi)存在多種形式,包括前體、propiece、膜型和分泌型,不同的形式具有不同的功能。膜型IL-1α在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用還不清楚,所以我們將對這一問題進行研究。方法：構(gòu)建hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系(對照和膜型IL-1 α),并建立三種小鼠肝癌模型(皮下腫瘤模型,原位肝癌模型和DEN誘導(dǎo)肝癌模型)。體外實驗中,使用激光共聚焦和western blot來確定是否表達膜型IL-lα。CCK-8、Ki67和細胞周期實驗研究膜型IL-1α對hepal-6生物學(xué)功能的影響。在皮下腫瘤模型和原位肝癌模型中,將hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞注射到小鼠體內(nèi)使其成瘤。在DEN誘導(dǎo)肝癌模型,通過高壓水流動力學(xué)基因注射方法將微環(huán)質(zhì)粒注射到小鼠體內(nèi)從而研究膜型IL-1α對小鼠自發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展的影響。流式細胞術(shù)檢測荷瘤小鼠體內(nèi)免疫細胞亞群的情況。胞內(nèi)染色確定CD4+T、CD8+T和NK細胞表達TNF-a和IFN-γ的情況。使用非放射性細胞毒實驗檢測小鼠CTL的殺傷活性,并使用CBA試劑盒檢測小鼠血清中細胞因子的表達水平。結(jié)果：成功構(gòu)建了表達膜型IL-1α的hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。體外實驗中,膜型的IL-1α?xí)龠M腫瘤細胞自身的增殖。而在體內(nèi)實驗中,三個肝癌模型中的膜型IL-1α均能有效抑制肝癌的發(fā)生發(fā)展。進一步的研究表明膜型IL-1α?xí)约毎佑|的方式促進T細胞的活化。膜型IL-1α增加了腫瘤微環(huán)境中的NK. DC和巨噬細胞。此外膜型IL-1α還能促進CD8+T和NK細胞產(chǎn)生IFN-γ,并能提高CTL的殺傷活性。結(jié)論：我們的研究證明了膜型IL-1α可以通過活化T細胞和NK細胞來發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。這可能是膜型IL-1α通過與T細胞、NK細胞表面的IL-1R相作用從而促進了T和NK細胞的活化。我們將對這一問題進行研究。方法：構(gòu)建hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系(對照和膜型IL-1 α),并建立三種小鼠肝癌模型(皮下腫瘤模型,原位肝癌模型和DEN誘導(dǎo)肝癌模型)。體外實驗中,使用激光共聚焦和western blot來確定是否表達膜型IL-lα。CCK-8、Ki67和細胞周期實驗研究膜型IL-1α對hepal-6生物學(xué)功能的影響。在皮下腫瘤模型和原位肝癌模型中,將hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞注射到小鼠體內(nèi)使其成瘤。在DEN誘導(dǎo)肝癌模型,通過高壓水流動力學(xué)基因注射方法將微環(huán)質(zhì)粒注射到小鼠體內(nèi)從而研究膜型IL-1α對小鼠自發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展的影響。流式細胞術(shù)檢測荷瘤小鼠體內(nèi)免疫細胞亞群的情況。胞內(nèi)染色確定CD4+T、CD8+T和NK細胞表達TNF-a和IFN-γ的情況。使用非放射性細胞毒實驗檢測小鼠CTL的殺傷活性,并使用CBA試劑盒檢測小鼠血清中細胞因子的表達水平。結(jié)果：成功構(gòu)建了表達膜型IL-1α的hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。體外實驗中,膜型的IL-1α?xí)龠M腫瘤細胞自身的增殖。而在體內(nèi)實驗中,三個肝癌模型中的膜型IL-1α均能有效抑制肝癌的發(fā)生發(fā)展。進一步的研究表明膜型IL-1α?xí)约毎佑|的方式促進T細胞的活化。膜型IL-1α增加了腫瘤微環(huán)境中的NK. DC和巨噬細胞。此外膜型IL-1α還能促進CD8+T和NK細胞產(chǎn)生IFN-γ,并能提高CTL的殺傷活性。結(jié)論：我們的研究證明了膜型IL-1α可以通過活化T細胞和NK細胞來發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。這可能是膜型IL-1α通過與T細胞、NK細胞表面的IL-1R相作用從而促進了T和NK細胞的活化。第三部分 分泌型的IL-1α在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制研究目的：IL-1α是促炎癥細胞因子,能刺激與炎癥相關(guān)的基因表達。IL-1α在細胞惡變過程中可能發(fā)揮重要功能。IL-1α可以被calpain酶切成分泌型的IL-1α。分泌型的IL-1α可以被壞死細胞被動釋放,也可以主動分泌到細胞外。分泌型IL-1α與炎癥和腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。腫瘤細胞分泌的IL-1α和全身性注射分泌型IL-1α蛋白在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用還不清楚,所以我們將對這一問題進行研究。方法：構(gòu)建hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系(對照和分泌型IL-1α),并使用了兩種小鼠肝癌模型(皮下腫瘤模型和原位肝癌模型)。體外實驗中,使用激光共聚焦、western blot和ELISA檢測分泌型IL-1α的表達。CCK-8、Ki67和細胞周期實驗研究分泌型IL-la對hepal-6生物學(xué)功能的影響。在皮下腫瘤模型和原位肝癌模型中,將hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞注射到小鼠體內(nèi)來研究腫瘤分泌的IL-1α對腫瘤生長的作用。在原位肝癌模型中,將hepal-6細胞通過高壓水流動力學(xué)的方法注射到小鼠體內(nèi),再給小鼠腹腔注射分泌型IL-1α重組蛋白來研究全身性分泌型IL-1α對肝癌發(fā)展的影響。流式細胞術(shù)檢測荷瘤小鼠體內(nèi)免疫細胞亞群的情況。使用非放射性細胞毒實驗檢測小鼠CTL的殺傷活性,并使用CBA試劑盒檢測小鼠血清中細胞因子的表達水平。結(jié)果：成功構(gòu)建了分泌IL-1α的hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。體外實驗中,分泌型IL-1α對腫瘤細胞自身生物學(xué)功能幾乎無影響。腫瘤分泌的IL-1α?xí)龠M肝癌的生長。進一步的研究表明腫瘤分泌的IL-1α?xí)种芓和NK細胞的活化,還會減弱CTL的殺傷活性。腫瘤分泌的IL-1α還會降低腫瘤微環(huán)境中DC和中性粒細胞的數(shù)量。腫瘤分泌的IL-la會增加MDSC的數(shù)量,而MDSC剔除后會明顯抑制腫瘤的生長。相反的是,全身性注射分泌型IL-1α蛋白會抑制腫瘤的生長。分泌型IL-1α蛋白能促進T細胞的活化,增強CTL的殺傷活性。結(jié)論：我們的研究證明了腫瘤細胞分泌的IL-1α和全身性注射分泌型IL-1α蛋白在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用是不同的。腫瘤細胞分泌的IL-1α通過募集MDSC來抑制T細胞的活化從而促進腫瘤的發(fā)展。而全身性注射分泌型IL-1α蛋白則通過活化T細胞來發(fā)揮抗腫瘤作用。因此分泌型IL-1α的功能取決于它的來源和作用環(huán)境。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R735.7
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 膜型和分泌型的IL-1α在急性肝損傷中的作用
    1 引言
    2 材料與方法
    3 結(jié)果
    4 討論
第二部分 膜型的IL-1α在肝細胞肝癌中的作用及機制的研究
    1 引言
    2 材料與方法
    3 結(jié)果
    4 討論
第三部分 分泌型的IL-1α在肝細胞肝癌中的作用及機制的研究
    1 引言
    2 材料與方法
    3 結(jié)果
    4 討論
參考文獻
綜述
    參考文獻
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1 Wojciech Blonski;David S Kotlyar;Kimberly A Forde;;Non-viral causes of hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2010年29期

本文編號：2851147