第一部分膜型和分泌型的IL-1α在急性肝損傷中的作用目的：IL-1α主要表達(dá)在細(xì)胞膜上,但在炎癥狀態(tài)下,IL-1α也可以分泌到細(xì)胞外。分泌型和膜型的IL-1α在急性肝臟炎癥中的作用尚不清楚。因此我們研究了分泌型和膜型的IL-1α在四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷模型中的作用和功能。方法：首先構(gòu)建了能表達(dá)小鼠分泌型和膜型IL-1α的微環(huán)質(zhì)粒,通過(guò)高壓水流動(dòng)力學(xué)注射的方法將微環(huán)質(zhì)粒注射到小鼠體內(nèi),從而使目的基因表達(dá)在小鼠的肝臟中,然后使用四氯化碳誘導(dǎo)建立小鼠急性肝損傷模型。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠體內(nèi)免疫細(xì)胞亞群的比例。CBA試劑盒檢測(cè)小鼠血清中細(xì)胞因子的水平。結(jié)果：在CC14誘導(dǎo)的急性肝損傷中,分泌型IL-1α?xí)又丶毙愿螕p傷,而膜型的IL-1α可以減輕肝損傷。進(jìn)一步的結(jié)果表明分泌型IL-1α?xí)龠M(jìn)T細(xì)胞的活化,還能促進(jìn)MDSC的增殖。清除MDSC會(huì)加重肝損傷,證明在此過(guò)程中MDSC可能起到負(fù)反饋調(diào)控的作用。此外,IL-1α誘導(dǎo)肝細(xì)胞分泌IL-6,在體內(nèi)中和IL-6會(huì)降低MDSC的增殖。分泌IL-1α還會(huì)促進(jìn)肝細(xì)胞表達(dá)趨化因子CCL2和CXCL5,而且CCL2和CXCL5的受體拮抗劑能明顯減少M(fèi)DSC遷移的數(shù)量。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明分泌型和膜型IL-1α在急性肝損傷中發(fā)揮著不同的作用。分泌型IL-1α不僅可以促進(jìn)T細(xì)胞的活化,還能通過(guò)上調(diào)IL-6水平來(lái)促進(jìn)MDSC的增殖或通過(guò)促進(jìn)肝細(xì)胞產(chǎn)生CCL2和CXCL5來(lái)促進(jìn)MDSC到肝臟的遷移。因此控制IL-1α的分泌可能有助于調(diào)控急性肝臟炎癥過(guò)程。第二部分膜型的IL-1α在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制研究目的：肝細(xì)胞肝癌是一個(gè)治療方案選擇有限、預(yù)后不良的全球性的健康問(wèn)題。炎癥與肝損傷、肝細(xì)胞重建密切相關(guān),它會(huì)導(dǎo)致肝臟纖維化、肝硬化并最終發(fā)展為肝癌。IL-1α屬于雙功能細(xì)胞因子,它是一個(gè)非常重要的炎性因子,參與炎癥和腫瘤的發(fā)展。IL-1α在體內(nèi)存在多種形式,包括前體、propiece、膜型和分泌型,不同的形式具有不同的功能。膜型IL-1α在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用還不清楚,所以我們將對(duì)這一問(wèn)題進(jìn)行研究。方法：構(gòu)建hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系(對(duì)照和膜型IL-1 α),并建立三種小鼠肝癌模型(皮下腫瘤模型,原位肝癌模型和DEN誘導(dǎo)肝癌模型)。體外實(shí)驗(yàn)中,使用激光共聚焦和western blot來(lái)確定是否表達(dá)膜型IL-lα。CCK-8、Ki67和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)研究膜型IL-1α對(duì)hepal-6生物學(xué)功能的影響。在皮下腫瘤模型和原位肝癌模型中,將hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞注射到小鼠體內(nèi)使其成瘤。在DEN誘導(dǎo)肝癌模型,通過(guò)高壓水流動(dòng)力學(xué)基因注射方法將微環(huán)質(zhì)粒注射到小鼠體內(nèi)從而研究膜型IL-1α對(duì)小鼠自發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)荷瘤小鼠體內(nèi)免疫細(xì)胞亞群的情況。胞內(nèi)染色確定CD4+T、CD8+T和NK細(xì)胞表達(dá)TNF-a和IFN-γ的情況。使用非放射性細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠CTL的殺傷活性,并使用CBA試劑盒檢測(cè)小鼠血清中細(xì)胞因子的表達(dá)水平。結(jié)果：成功構(gòu)建了表達(dá)膜型IL-1α的hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。體外實(shí)驗(yàn)中,膜型的IL-1α?xí)龠M(jìn)腫瘤細(xì)胞自身的增殖。而在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,三個(gè)肝癌模型中的膜型IL-1α均能有效抑制肝癌的發(fā)生發(fā)展。進(jìn)一步的研究表明膜型IL-1α?xí)约?xì)胞接觸的方式促進(jìn)T細(xì)胞的活化。膜型IL-1α增加了腫瘤微環(huán)境中的NK. DC和巨噬細(xì)胞。此外膜型IL-1α還能促進(jìn)CD8+T和NK細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ,并能提高CTL的殺傷活性。結(jié)論：我們的研究證明了膜型IL-1α可以通過(guò)活化T細(xì)胞和NK細(xì)胞來(lái)發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。這可能是膜型IL-1α通過(guò)與T細(xì)胞、NK細(xì)胞表面的IL-1R相作用從而促進(jìn)了T和NK細(xì)胞的活化。我們將對(duì)這一問(wèn)題進(jìn)行研究。方法：構(gòu)建hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系(對(duì)照和膜型IL-1 α),并建立三種小鼠肝癌模型(皮下腫瘤模型,原位肝癌模型和DEN誘導(dǎo)肝癌模型)。體外實(shí)驗(yàn)中,使用激光共聚焦和western blot來(lái)確定是否表達(dá)膜型IL-lα。CCK-8、Ki67和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)研究膜型IL-1α對(duì)hepal-6生物學(xué)功能的影響。在皮下腫瘤模型和原位肝癌模型中,將hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞注射到小鼠體內(nèi)使其成瘤。在DEN誘導(dǎo)肝癌模型,通過(guò)高壓水流動(dòng)力學(xué)基因注射方法將微環(huán)質(zhì)粒注射到小鼠體內(nèi)從而研究膜型IL-1α對(duì)小鼠自發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)荷瘤小鼠體內(nèi)免疫細(xì)胞亞群的情況。胞內(nèi)染色確定CD4+T、CD8+T和NK細(xì)胞表達(dá)TNF-a和IFN-γ的情況。使用非放射性細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠CTL的殺傷活性,并使用CBA試劑盒檢測(cè)小鼠血清中細(xì)胞因子的表達(dá)水平。結(jié)果：成功構(gòu)建了表達(dá)膜型IL-1α的hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。體外實(shí)驗(yàn)中,膜型的IL-1α?xí)龠M(jìn)腫瘤細(xì)胞自身的增殖。而在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,三個(gè)肝癌模型中的膜型IL-1α均能有效抑制肝癌的發(fā)生發(fā)展。進(jìn)一步的研究表明膜型IL-1α?xí)约?xì)胞接觸的方式促進(jìn)T細(xì)胞的活化。膜型IL-1α增加了腫瘤微環(huán)境中的NK. DC和巨噬細(xì)胞。此外膜型IL-1α還能促進(jìn)CD8+T和NK細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ,并能提高CTL的殺傷活性。結(jié)論：我們的研究證明了膜型IL-1α可以通過(guò)活化T細(xì)胞和NK細(xì)胞來(lái)發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。這可能是膜型IL-1α通過(guò)與T細(xì)胞、NK細(xì)胞表面的IL-1R相作用從而促進(jìn)了T和NK細(xì)胞的活化。第三部分 分泌型的IL-1α在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制研究目的：IL-1α是促炎癥細(xì)胞因子,能刺激與炎癥相關(guān)的基因表達(dá)。IL-1α在細(xì)胞惡變過(guò)程中可能發(fā)揮重要功能。IL-1α可以被calpain酶切成分泌型的IL-1α。分泌型的IL-1α可以被壞死細(xì)胞被動(dòng)釋放,也可以主動(dòng)分泌到細(xì)胞外。分泌型IL-1α與炎癥和腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。腫瘤細(xì)胞分泌的IL-1α和全身性注射分泌型IL-1α蛋白在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用還不清楚,所以我們將對(duì)這一問(wèn)題進(jìn)行研究。方法：構(gòu)建hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系(對(duì)照和分泌型IL-1α),并使用了兩種小鼠肝癌模型(皮下腫瘤模型和原位肝癌模型)。體外實(shí)驗(yàn)中,使用激光共聚焦、western blot和ELISA檢測(cè)分泌型IL-1α的表達(dá)。CCK-8、Ki67和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)研究分泌型IL-la對(duì)hepal-6生物學(xué)功能的影響。在皮下腫瘤模型和原位肝癌模型中,將hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞注射到小鼠體內(nèi)來(lái)研究腫瘤分泌的IL-1α對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的作用。在原位肝癌模型中,將hepal-6細(xì)胞通過(guò)高壓水流動(dòng)力學(xué)的方法注射到小鼠體內(nèi),再給小鼠腹腔注射分泌型IL-1α重組蛋白來(lái)研究全身性分泌型IL-1α對(duì)肝癌發(fā)展的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)荷瘤小鼠體內(nèi)免疫細(xì)胞亞群的情況。使用非放射性細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠CTL的殺傷活性,并使用CBA試劑盒檢測(cè)小鼠血清中細(xì)胞因子的表達(dá)水平。結(jié)果：成功構(gòu)建了分泌IL-1α的hepal-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。體外實(shí)驗(yàn)中,分泌型IL-1α對(duì)腫瘤細(xì)胞自身生物學(xué)功能幾乎無(wú)影響。腫瘤分泌的IL-1α?xí)龠M(jìn)肝癌的生長(zhǎng)。進(jìn)一步的研究表明腫瘤分泌的IL-1α?xí)种芓和NK細(xì)胞的活化,還會(huì)減弱CTL的殺傷活性。腫瘤分泌的IL-1α還會(huì)降低腫瘤微環(huán)境中DC和中性粒細(xì)胞的數(shù)量。腫瘤分泌的IL-la會(huì)增加MDSC的數(shù)量,而MDSC剔除后會(huì)明顯抑制腫瘤的生長(zhǎng)。相反的是,全身性注射分泌型IL-1α蛋白會(huì)抑制腫瘤的生長(zhǎng)。分泌型IL-1α蛋白能促進(jìn)T細(xì)胞的活化,增強(qiáng)CTL的殺傷活性。結(jié)論：我們的研究證明了腫瘤細(xì)胞分泌的IL-1α和全身性注射分泌型IL-1α蛋白在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用是不同的。腫瘤細(xì)胞分泌的IL-1α通過(guò)募集MDSC來(lái)抑制T細(xì)胞的活化從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。而全身性注射分泌型IL-1α蛋白則通過(guò)活化T細(xì)胞來(lái)發(fā)揮抗腫瘤作用。因此分泌型IL-1α的功能取決于它的來(lái)源和作用環(huán)境。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R735.7
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 膜型和分泌型的IL-1α在急性肝損傷中的作用
    1 引言
    2 材料與方法
    3 結(jié)果
    4 討論
第二部分 膜型的IL-1α在肝細(xì)胞肝癌中的作用及機(jī)制的研究
    1 引言
    2 材料與方法
    3 結(jié)果
    4 討論
第三部分 分泌型的IL-1α在肝細(xì)胞肝癌中的作用及機(jī)制的研究
    1 引言
    2 材料與方法
    3 結(jié)果
    4 討論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文
本課題所受資助
附錄 中英文縮略語(yǔ)對(duì)照表
致謝

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Wojciech Blonski;David S Kotlyar;Kimberly A Forde;;Non-viral causes of hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2010年29期

本文編號(hào)：2851147