研究背景肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全世界范圍內(nèi)死亡率占第三位的惡性腫瘤,預(yù)后極差,主要原因之一是其容易侵犯臨近的門靜脈系統(tǒng)而形成門靜脈癌栓(portal vein tumor thrombus,PVTT)。肝癌門靜脈癌栓已成為制約肝癌預(yù)后的最大瓶頸問題。血小板(platelet,PLT)作為近年來腫瘤相關(guān)研究的熱點(diǎn),其在肝癌發(fā)生中的作用被逐漸認(rèn)識(shí),幾乎參與了諸如肝臟炎癥的損傷與修復(fù)、肝纖維化直至肝癌等慢性肝臟疾病的各個(gè)過程。但是,血小板與門靜脈癌栓形成這一特殊的肝癌轉(zhuǎn)移方式之間的關(guān)系尚未見報(bào)道。分析血小板在肝癌門靜脈癌栓形成過程中的作用,不僅能為癌栓的形成機(jī)制做以新的闡釋,更能為其治療開辟新的思路。研究目的通過回顧性分析術(shù)前伴有不同血小板計(jì)數(shù)的肝癌門靜脈癌栓患者的預(yù)后,建立血小板與門靜脈癌栓之間的初步聯(lián)系。進(jìn)一步通過分析門靜脈癌栓患者血小板活化情況及癌栓組織特異表達(dá)的基因譜,探討血小板在肝癌門靜脈癌栓形成中的重要作用,從而為肝癌門靜脈癌栓的治療尋找新的治療靶點(diǎn)和方法。研究方法一、術(shù)前血小板計(jì)數(shù)與肝癌門靜脈癌栓患者預(yù)后關(guān)系的分析以肝癌伴門靜脈癌栓患者為研究對(duì)象,結(jié)合術(shù)前臨床資料數(shù)據(jù)及預(yù)后生存狀況,以術(shù)前血小板計(jì)數(shù)的高低將病人分為三組:血小板減少組(PLT100×109/L)、正常組(100×109/L≤PLT≤300×109/L)和升高組(PLT300×109/L)�；仡櫺苑治龌颊叩念A(yù)后,以確定術(shù)前血小板計(jì)數(shù)對(duì)肝癌門靜脈癌栓患者預(yù)后的影響。二、肝癌伴門靜脈癌栓患者血小板活性檢測(cè)分離提取肝癌伴和不伴門靜脈癌栓患者的洗滌血小板,通過分析血小板的聚集能力差異,探討肝癌門靜脈癌栓患者的血小板活化狀態(tài)改變情況。并進(jìn)一步用血小板活化相關(guān)分子通過流式細(xì)胞技術(shù)加以驗(yàn)證。三、癌栓組織特異性m RNA表達(dá)譜分析取三例肝癌伴門靜脈癌栓患者的配對(duì)新鮮組織樣本,包括癌旁組織(pritumoral tumor,PT)、肝癌原發(fā)灶組織(parenchyma tumor,T)和門靜脈癌栓組織(portal vein tumor thrombosis,PVTT/P),行基因芯片檢測(cè)。分別分析不同病人間的個(gè)體化差異和各組織間的特異性表達(dá)差異。通過Metascape(http://metascape.org)分析差異基因參與的生物學(xué)功能及相關(guān)信號(hào)通路,并最終確定目的基因。四、目的基因誘導(dǎo)栓塊形成促進(jìn)肝癌門靜脈癌栓發(fā)生的作用機(jī)制研究通過擴(kuò)大樣本量,確定目的基因在不同組織中的表達(dá)。進(jìn)一步用不同肝癌細(xì)胞系與血小板共培養(yǎng),建立體外“癌栓”形成模型,并結(jié)合細(xì)胞系的成栓能力及目的基因的表達(dá)水平確定體外研究的工具細(xì)胞系。再通過該模型對(duì)目的基因在門靜脈癌栓形成中的機(jī)制做探討。研究結(jié)果第一部分:門靜脈癌栓患者血小板降低的的伴發(fā)比例較高(20.9%)。不同血小板計(jì)數(shù)患者之間的臨床病理特征不同,肝硬化伴發(fā)率(p0.001)、腫瘤大小(p0.001)以及腫瘤是否存在包膜(p=0.032)差異明顯。門靜脈癌栓患者伴有血小板計(jì)數(shù)減少者的無瘤生存期RFS(recurrence free survival)和總體生存期OS(overall survival)均優(yōu)于血小板計(jì)數(shù)正常組(p均小于0.001)和升高組(p=0.008和0.046),但血小板計(jì)數(shù)正常組和升高組之間無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.578和0.877)。進(jìn)一步通過傾向性匹配評(píng)分(PSM)排除各組間的病歷資料差異的影響并作亞組分層,結(jié)果表明:II型門靜脈癌栓患者中血小板減少組的患者的無瘤生存期明顯優(yōu)于血小板正常組(p=0.011),但I(xiàn)型癌栓和III型癌栓病人的不同血小板計(jì)數(shù)組之間無明顯差別(p=0.154和0.142)。I型和II型癌栓中血小板減少組的患者的總體生存期的分析均優(yōu)于血小板正常組(p=0.021和0.029),但I(xiàn)II型癌栓患者的兩組間仍無差異(p=0.451)。多因素風(fēng)險(xiǎn)回歸分析結(jié)果表明血小板計(jì)數(shù)是肝癌門靜脈癌栓患者預(yù)后相關(guān)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,包括無瘤生存期(hazard ratio[HR]0.602,95%CI 0.444-0.836,p=0.001)和總體生存期(HR 0.582,95%CI 0.415-0.816,p=0.002)。第二部分:通過分析肝癌伴和不伴門靜脈癌栓患者的洗滌血小板,結(jié)果表明肝癌伴門靜脈癌栓患者的血小板聚集能力增強(qiáng),血小板活化的比例增加。通過對(duì)肝癌伴門靜脈癌栓患者配對(duì)的不同組織(癌栓組織、原發(fā)灶組織和癌旁組織)行基因芯片檢測(cè)發(fā)現(xiàn),病人之間存在交大的個(gè)體化差異;進(jìn)一步匯總分析三例病人均有差異的基因顯示:三種組織各自具有其獨(dú)特的基因表達(dá)譜。將差異基因在基因功能網(wǎng)站進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),癌栓組織中特異表達(dá)的基因在細(xì)胞溶解、一元羧酸酸代謝、胰島素樣生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)、小分子代謝以及有機(jī)羥基化合物運(yùn)輸?shù)壬飳W(xué)功能上富集明顯,且部分差異基因還與整合素信號(hào)通路和HNF3B信號(hào)通路等腫瘤相關(guān)的信號(hào)通路密切相關(guān)。進(jìn)一步根據(jù)差異基因的表達(dá)水平及其生物學(xué)功能,最終將干細(xì)胞因子(SCF/KITLG)作為目的基因重點(diǎn)進(jìn)行后續(xù)的機(jī)制研究。第三部分:通過擴(kuò)大樣本檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),目的基因KITLG在肝癌門靜脈癌栓組織中表達(dá)明顯高于肝癌原發(fā)灶組織和癌旁組織,此外,KITLG的受體基因c-KIT表達(dá)水平與其相一致,在門靜脈癌栓組織中表達(dá)升高。進(jìn)一步檢測(cè)肝癌相關(guān)的干細(xì)胞標(biāo)志物發(fā)現(xiàn),Ep CAM、CD44、CD90和CD133在門靜脈癌栓組織和肝癌原發(fā)灶組織中的表達(dá)均比癌旁組織高,除CD133在門靜脈癌栓組織中與肝癌原發(fā)灶中表達(dá)水平相似外,Ep CAM、CD44和CD90的表達(dá)水平在癌栓組織中最高。不同肝癌細(xì)胞系中KITLG的表達(dá)水平不一樣,來源與肝癌門靜脈癌栓的細(xì)胞系CSQT-2中KITLG的表達(dá)水平最高。通過將CSQT-2與血小板共培養(yǎng)建立體外“癌栓”模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,細(xì)胞系中KITLG的表達(dá)水平與成栓能力有關(guān),KITLG是肝癌門靜脈癌栓形成中的重要分子。結(jié)論1、血小板計(jì)數(shù)是肝癌門靜脈癌栓患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。伴血小板計(jì)數(shù)減少的肝癌門靜脈癌栓患者預(yù)后相對(duì)較好;2、肝癌門靜脈癌栓患者血小板活化增強(qiáng);3、門靜脈癌栓組織、肝癌原發(fā)灶組織和癌旁組織的基因表達(dá)存在差異,各有自身特異的基因表達(dá)譜;4、KITLG在肝癌門靜脈癌栓組織中高表達(dá),促進(jìn)癌栓腫瘤細(xì)胞干性的維持,并可在體外誘導(dǎo)栓塊形成而促進(jìn)癌栓的發(fā)生。本課題創(chuàng)新點(diǎn)及潛在應(yīng)用價(jià)值確定了血小板計(jì)數(shù)與肝癌門靜脈癌栓的預(yù)后關(guān)系,為肝癌門靜脈癌栓的臨床治療提供指導(dǎo)。通過基因芯片分析明確了癌栓組織特異性基因表達(dá)譜,并分析其分子功能及相關(guān)信號(hào)通路,為癌栓形成機(jī)制的相關(guān)研究提供數(shù)據(jù)支持和參考;進(jìn)一步分析明確KITLG通過誘導(dǎo)栓塊形成促進(jìn)肝癌門靜脈癌栓發(fā)生的機(jī)制,為抗血小板治療在肝癌門靜脈癌栓的應(yīng)用提供有力證據(jù)。
【學(xué)位單位】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7
【部分圖文】：

學(xué)位論文錄患者 694例，血小板正常者 527 例（75.9%），血小板小板升高者 22例（3.2%），血小板減少的伴發(fā)率遠(yuǎn)高于據(jù)研究的入組標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)（表 1-1），最終共有 555 分析流程見圖 1-1。在剔除的 139例患者中：IV型癌栓患療者 43 例，合并有膽管癌栓和/或門靜脈癌栓者 34例，數(shù)。入組的 555 例患者中血小板正常者 426 例（76.7%），.2%），血小板升高者 17例（3.1%），詳細(xì)臨床資料見表

圖 1-2：所有入組病人中不同血小板計(jì)數(shù)組之間的 Kaplan-Meier生存分析。A：累積無瘤生存期，不同血小板計(jì)數(shù)組患者的累積無瘤生存期存在明顯差異（p<0.001）；B：累積總體生存期，不同血小板計(jì)數(shù)組患者間的累積無瘤生存期存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p=0.001）三組伴有不同血小板計(jì)數(shù)的癌栓患者的中位無瘤生存期（RFS）總體生存期（OS）分別為：血小板正常組患者的中位 RFS 和 OS 分別為 1.87個(gè)月（95% CI（confidence interval，可信區(qū)間）, 1.672 – 2.068 月）和 8.77個(gè)月（95% CI, 7.902 –9.638 月）；血小板減少組癌栓患者的中位 RFS 和 OS 分別為 3.1 個(gè)月 （95 % CI，1.369 – 4.831 月）和 16.57 個(gè)月 ( 95% CI, 12.770 – 20.370 月)；血小板升高患者的中位 RFS 和 OS 則分別為 1.47個(gè)月（95% CI, 1.282 -1.658）和 9.7 個(gè)月（ 95% CI,7.051 -12.349 月）。進(jìn)一步做 Kaplan-Meier 生存分析結(jié)果顯示，三組病人之間的無瘤生存期和總體生存期存在明顯差別，其 log-rank-χ 2 分別為 22.814 和 15.020，p值分別< 0.001 和 0.046（圖 1-2）。分別對(duì)比兩組間的差異顯示，伴有血小板計(jì)數(shù)減少的癌栓患者無論是無瘤生存期和總體生存期均比血小板計(jì)數(shù)正常組和升高組的患者長(zhǎng)（圖 1-3A 和 B，圖 1-3C

- 16 -圖 1-3：不同血小板計(jì)數(shù)組的癌栓患者 Kaplan-Meier生存分析。A和 B分別為血小板減少組和血小板升高組之間的累積無瘤生存期（RFS）和總體生存期 OS）；C和 D分別為血小板正常組和血小板升高組之間的 RFS 和 OS；E和 F 分別為血小板正常組和血小板升高組之間的 RFS 和 OS。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;國(guó)內(nèi)首個(gè)肝癌門靜脈癌栓多學(xué)科診治方案達(dá)成專家共識(shí)[J];腫瘤防治研究;2016年01期

2 ;“第二屆上海國(guó)際肝癌門靜脈癌栓高峰論壇”會(huì)議通知[J];中國(guó)微創(chuàng)外科雜志;2015年07期

3 ;“第二屆上海國(guó)際肝癌門靜脈癌栓高峰論壇”會(huì)議通知[J];中國(guó)微創(chuàng)外科雜志;2015年08期

4 ;“第二屆上海國(guó)際肝癌門靜脈癌栓高峰論壇”會(huì)議通知[J];中國(guó)微創(chuàng)外科雜志;2015年09期

5 胡建新;楊穎;;磁共振門靜脈成像對(duì)肝癌門靜脈癌栓的影像學(xué)分型及優(yōu)勢(shì)[J];醫(yī)學(xué)研究與教育;2011年02期

6 樊嘉;周儉;吳志全;余耀;湯釗猷;邱雙健;曾昭沖;劉銀坤;鄭起;肖永勝;黃曉武;史穎弘;孫琦蠻;孫健;王曉穎;;肝癌門靜脈癌栓形成機(jī)制及防治研究[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2006年06期

7 李國(guó)華,劉元水,李荔,張欽;超聲介入治療肝癌門靜脈癌栓[J];山東醫(yī)藥;2004年21期

8 李玉蘭;李學(xué)禮;劉蜻蜻;;超聲在肝癌門靜脈癌栓診斷中的價(jià)值[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2013年02期

9 陸東東;肝癌門靜脈癌栓臨床研究進(jìn)展[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;1999年03期

10 胡建新;劉秀頎;李海月;馬艷萍;董國(guó)華;李德民;;磁共振門靜脈成像對(duì)肝癌門靜脈癌栓的診斷價(jià)值與臨床應(yīng)用[J];河北醫(yī)藥;2015年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 程玉強(qiáng);血小板在肝癌門靜脈癌栓形成中的作用機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

2 龔高全;肝癌門靜脈癌栓經(jīng)脾胃底食管曲張靜脈栓塞和門靜脈支架治療的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

3 邱繼剛;肝癌門靜脈癌栓相關(guān)小分子蛋白標(biāo)記物的研究及S100A11的功能驗(yàn)證[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 胡華生;來源于肝癌門靜脈癌栓的肝癌細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

2 何勇勇;鞘氨醇激酶1對(duì)肝癌門靜脈癌栓患者預(yù)后影響的研究[D];蘇州大學(xué);2012年

3 楊鑫;~(125)I粒子聯(lián)合高強(qiáng)度聚焦超聲治療肝癌門靜脈癌栓的臨床價(jià)值[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

4 王濤;來源于肝癌門靜脈癌栓細(xì)胞系（CSQT-2）的建立及其生物學(xué)特性研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 王成剛;肝癌門靜脈癌栓的金屬內(nèi)支架置入聯(lián)合外照射治療的初步研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

6 薛捷;肝癌形成過程中對(duì)門靜脈微侵襲的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

7 魏緒勇;伴門靜脈癌栓肝癌的蛋白組學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2851098