Pde4d基因位于小鼠13號染色體上,其編碼產(chǎn)物PDE4D(磷酸二酯酶4d)可以特異性降解c AMP,因而細胞的生命活動中發(fā)揮重要作用。miR-1904定位于小鼠Pde4d第8內(nèi)含子內(nèi),是一種內(nèi)含子micro RNA。鑒于目前對miR-1904靶基因及功能研究較少,本論文以miR-1904為研究對象,分析了其在小鼠肝癌細胞中的表達及與宿主基因Pde4d的靶向關系,并進一步研究了miR-1904對Hepa1-6細胞生物學行為的影響。首先本文鑒定了miR-1904與宿主基因Pde4d之間的靶向關系。首先在Hepa1-6細胞轉(zhuǎn)染miR-1904 mimics,外源性上調(diào)miR-1904,定量PCR和western blot檢測顯示Pde4d的m RNA和蛋白質(zhì)水平都出現(xiàn)了顯著性下調(diào);而轉(zhuǎn)染miR-1904 inhibitor后Pde4d表達出現(xiàn)顯著性上調(diào)。隨后雙熒光素酶報告實驗和挽救實驗進一步證明Pde4d是miR-1904的靶基因。其次本文研究了miR-1904對小鼠肝癌細胞生物學表型的影響。在小鼠肝癌細胞Hepa1-6中上調(diào)和抑制miR-1904的表達,檢測到miR-1904抑制肝癌細胞的增殖、克隆形成、遷移和侵襲。細胞周期和細胞凋亡實驗結(jié)果進一步證實了miR-1904是通過促進細胞凋亡而并非改變細胞周期來影響細胞增殖的。體內(nèi)成瘤實驗表明過表達miR-1904的腫瘤無論是生長速率還是腫瘤質(zhì)量都出現(xiàn)顯著性下降,說明miR-1904具有腫瘤抑制子的功能。綜上所述,本研究驗證了Pde4d是miR-1904的靶基因之一,miR-1904表達上調(diào)對小鼠肝癌細胞的增殖、遷移、侵襲、克隆形成和體內(nèi)成瘤能力具有抑制作用,并促進細胞凋亡。說明miR-1904可能作為抑癌miRNA在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中起到作用,為進一步闡明miR-1904的生物學功能奠定了基礎。
【學位單位】：哈爾濱工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7
【部分圖文】：

第 1 章 緒 論題背景和研究目的及意義課題背景及來源e4d（磷酸二酯酶 4d）基因位于小鼠 13 號染色體長臂上(如圖 1-1)，SC 瀏覽器得知，該基因共具有 17 個外顯子，基因長度達 1.31Mb， EST 以及轉(zhuǎn)錄本。該基因的編碼產(chǎn)物 PDE4D 可以特異性降解第在細胞生命活動中具有重要作用[1]。iR-1904 位于 Pde4d 第 8 內(nèi)含子，通過生物信息學網(wǎng)站檢索 miR-190僅在小鼠中存在[2]。越來越多的研究和實驗表明，內(nèi)含子 miRNA 一主基因的功能，在生物體生長發(fā)育等生命活動中起到作用[3]。本研究iRNA 和宿主基因的一般規(guī)律，并通過檢索相關生物信息學網(wǎng)站04 的靶基因之一很可能是它的宿主基因 Pde4d。隨后本實驗室黃治雙熒光素酶報告系統(tǒng)實驗，確定了 miR-1904 與 Pde4d 的靶向關系[

癌細胞中作用的分子機制，對于理解肝癌的發(fā)病、發(fā)展和轉(zhuǎn)移機制以及未來的床治療具有重要意義。1.2 Pde4d 的研究進展1.2.1 Pde4d 的表達調(diào)控Pde4d 在小鼠胚胎發(fā)育早期和中后期具有不同表達趨勢。在八細胞之前，Pde的表達逐漸降低。在小鼠 2 細胞時期表達量最高，隨后 Pde4d 的表達逐漸下降待發(fā)育至囊胚階段時，表達量最低。在小鼠胚胎胚胎發(fā)育 E9.5 天后，該基因隨胚胎發(fā)育表達逐漸升高。Pde4d 在 E9.5-E18.5 全胚胎中的表達水平如圖 1-2 所示從 E9.5 到 E15.5 天時 Pde4d 表達逐漸升高，在 E15.5 天時，該基因的表達量最高發(fā)育至 E18.5 天，Pde4d 的表達量則稍有下降。對 E15.5 天胚胎各組織器官進行量 PCR，發(fā)現(xiàn)在 E15.5 胚胎各臟器中肝臟中表達量最高，推測 Pde4d 可能在小肝臟中發(fā)揮作用[4]。a） b）

哈爾濱工業(yè)大學理學碩士學位論文行后續(xù)的加工過程中。EXP5 發(fā)揮其功能依賴與 RAN-GTP 相互作用形成結(jié)構域個復合體內(nèi)部具有正電荷，Pre-miRNA 本身帶有負電荷，通過靜電作用相互，將 Pre-miRNA 從核孔復合體中運送到細胞質(zhì)中。隨后核酸酶 Dicer re-miRNA 進行切割，形成一個短的 dsRNA。經(jīng) Dicer 酶切割的 dsRNA 隨后結(jié)一個以Argonaute蛋白為核心的復合體上，該復合體迅速將miRNA過客鏈移除留下成熟的導向鏈。最后成熟導向鏈 RNA與 Argonaute 蛋白作用形成了復合物 RNA 誘導沉默復合物 miRISC ，也叫做 RISC 復合體[26]。隨后 RISC 復合體RNA 結(jié)合降解 mRNA，或占據(jù)空間位置抑制核糖體的結(jié)合，阻礙翻譯的進行[27]
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本文編號：2845720