發(fā)布時(shí)間：2020-10-18 03:14

　　 Pde4d基因位于小鼠13號(hào)染色體上,其編碼產(chǎn)物PDE4D(磷酸二酯酶4d)可以特異性降解c AMP,因而細(xì)胞的生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用。miR-1904定位于小鼠Pde4d第8內(nèi)含子內(nèi),是一種內(nèi)含子micro RNA。鑒于目前對(duì)miR-1904靶基因及功能研究較少,本論文以miR-1904為研究對(duì)象,分析了其在小鼠肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及與宿主基因Pde4d的靶向關(guān)系,并進(jìn)一步研究了miR-1904對(duì)Hepa1-6細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。首先本文鑒定了miR-1904與宿主基因Pde4d之間的靶向關(guān)系。首先在Hepa1-6細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-1904 mimics,外源性上調(diào)miR-1904,定量PCR和western blot檢測(cè)顯示Pde4d的m RNA和蛋白質(zhì)水平都出現(xiàn)了顯著性下調(diào);而轉(zhuǎn)染miR-1904 inhibitor后Pde4d表達(dá)出現(xiàn)顯著性上調(diào)。隨后雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)和挽救實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明Pde4d是miR-1904的靶基因。其次本文研究了miR-1904對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞生物學(xué)表型的影響。在小鼠肝癌細(xì)胞Hepa1-6中上調(diào)和抑制miR-1904的表達(dá),檢測(cè)到miR-1904抑制肝癌細(xì)胞的增殖、克隆形成、遷移和侵襲。細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了miR-1904是通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞凋亡而并非改變細(xì)胞周期來(lái)影響細(xì)胞增殖的。體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)表明過(guò)表達(dá)miR-1904的腫瘤無(wú)論是生長(zhǎng)速率還是腫瘤質(zhì)量都出現(xiàn)顯著性下降,說(shuō)明miR-1904具有腫瘤抑制子的功能。綜上所述,本研究驗(yàn)證了Pde4d是miR-1904的靶基因之一,miR-1904表達(dá)上調(diào)對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、克隆形成和體內(nèi)成瘤能力具有抑制作用,并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。說(shuō)明miR-1904可能作為抑癌miRNA在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中起到作用,為進(jìn)一步闡明miR-1904的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7
【部分圖文】：

第 1 章 緒 論題背景和研究目的及意義課題背景及來(lái)源e4d（磷酸二酯酶 4d）基因位于小鼠 13 號(hào)染色體長(zhǎng)臂上(如圖 1-1)，SC 瀏覽器得知，該基因共具有 17 個(gè)外顯子，基因長(zhǎng)度達(dá) 1.31Mb， EST 以及轉(zhuǎn)錄本。該基因的編碼產(chǎn)物 PDE4D 可以特異性降解第在細(xì)胞生命活動(dòng)中具有重要作用[1]。iR-1904 位于 Pde4d 第 8 內(nèi)含子，通過(guò)生物信息學(xué)網(wǎng)站檢索 miR-190僅在小鼠中存在[2]。越來(lái)越多的研究和實(shí)驗(yàn)表明，內(nèi)含子 miRNA 一主基因的功能，在生物體生長(zhǎng)發(fā)育等生命活動(dòng)中起到作用[3]。本研究iRNA 和宿主基因的一般規(guī)律，并通過(guò)檢索相關(guān)生物信息學(xué)網(wǎng)站04 的靶基因之一很可能是它的宿主基因 Pde4d。隨后本實(shí)驗(yàn)室黃治雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，確定了 miR-1904 與 Pde4d 的靶向關(guān)系[

癌細(xì)胞中作用的分子機(jī)制，對(duì)于理解肝癌的發(fā)病、發(fā)展和轉(zhuǎn)移機(jī)制以及未來(lái)的床治療具有重要意義。1.2 Pde4d 的研究進(jìn)展1.2.1 Pde4d 的表達(dá)調(diào)控Pde4d 在小鼠胚胎發(fā)育早期和中后期具有不同表達(dá)趨勢(shì)。在八細(xì)胞之前，Pde的表達(dá)逐漸降低。在小鼠 2 細(xì)胞時(shí)期表達(dá)量最高，隨后 Pde4d 的表達(dá)逐漸下降待發(fā)育至囊胚階段時(shí)，表達(dá)量最低。在小鼠胚胎胚胎發(fā)育 E9.5 天后，該基因隨胚胎發(fā)育表達(dá)逐漸升高。Pde4d 在 E9.5-E18.5 全胚胎中的表達(dá)水平如圖 1-2 所示從 E9.5 到 E15.5 天時(shí) Pde4d 表達(dá)逐漸升高，在 E15.5 天時(shí)，該基因的表達(dá)量最高發(fā)育至 E18.5 天，Pde4d 的表達(dá)量則稍有下降。對(duì) E15.5 天胚胎各組織器官進(jìn)行量 PCR，發(fā)現(xiàn)在 E15.5 胚胎各臟器中肝臟中表達(dá)量最高，推測(cè) Pde4d 可能在小肝臟中發(fā)揮作用[4]。a） b）

哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文行后續(xù)的加工過(guò)程中。EXP5 發(fā)揮其功能依賴與 RAN-GTP 相互作用形成結(jié)構(gòu)域個(gè)復(fù)合體內(nèi)部具有正電荷，Pre-miRNA 本身帶有負(fù)電荷，通過(guò)靜電作用相互，將 Pre-miRNA 從核孔復(fù)合體中運(yùn)送到細(xì)胞質(zhì)中。隨后核酸酶 Dicer re-miRNA 進(jìn)行切割，形成一個(gè)短的 dsRNA。經(jīng) Dicer 酶切割的 dsRNA 隨后結(jié)一個(gè)以Argonaute蛋白為核心的復(fù)合體上，該復(fù)合體迅速將miRNA過(guò)客鏈移除留下成熟的導(dǎo)向鏈。最后成熟導(dǎo)向鏈 RNA與 Argonaute 蛋白作用形成了復(fù)合物 RNA 誘導(dǎo)沉默復(fù)合物 miRISC ，也叫做 RISC 復(fù)合體[26]。隨后 RISC 復(fù)合體RNA 結(jié)合降解 mRNA，或占據(jù)空間位置抑制核糖體的結(jié)合，阻礙翻譯的進(jìn)行[27]
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2845720