目的：研究乳源六肽(PGPIPN)與抗癌藥物順鉑(DDP)聯(lián)合使用對人卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響,探究其可能的分子機(jī)制及其信號途徑,探索研發(fā)治療卵巢癌的新方法和新手段。方法：1.用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)原代卵巢癌細(xì)胞,并且用免疫熒光染色法鑒定原代細(xì)胞的純度：2.MTS實(shí)驗(yàn)法檢測并計(jì)算出DDP對人卵巢癌敏感細(xì)胞株SKOV3和耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP半數(shù)致死量(IC50)的數(shù)值,并得出SKOV3/DDP相對于SKOV3的耐藥指數(shù)(RI)；3.MTS實(shí)驗(yàn)法檢測不同濃度PGPIPN、DDP單獨(dú)用藥及聯(lián)合用藥對人卵巢癌細(xì)胞生長的增殖抑制的情況：4.用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期；5.克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測用藥后對細(xì)胞成瘤的影響；6.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測用藥后細(xì)胞遷移能力的影響,細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測用藥后對細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響,并用HE染色觀察PGPIPN、DDP單獨(dú)用藥及兩者聯(lián)合作用下卵巢癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變；7.RT-PCR法檢測Aktl、PI3K、MDR1和ERCC1基因水平表達(dá)改變；8.Western Blot法檢測pAKT、PI3K、P-gp和ERCC1蛋白水平表達(dá)的改變。結(jié)果：1.通過組織塊培養(yǎng)法成功培養(yǎng)出原代卵巢癌細(xì)胞細(xì)胞,經(jīng)鑒定其純度可達(dá)96.8%；2.MTS結(jié)果顯示DDP對SKOV3的24h、48h、72h的IC50值分別為10ug/ml、5.56 ug/ml、3.23 ug/ml,DDP對SKOV3/DDP的24h、48h、72h的IC50值分別為24.9 ug/ml、9.9 ug/ml、7.63 ug/m1,計(jì)算出SKOV3/DDP相對于SKOV3的24h、48h、72h耐藥指數(shù)為：2.49、1.78、2.36；3.MTS結(jié)果顯示與對照組相比,單獨(dú)DDP、PGPIPN用藥組和PGPIPN聯(lián)合DDP對卵巢癌都有抑制作用,而PGPIPN聯(lián)合DDP處理組抑制率顯著高于單獨(dú)用藥組,組間差異有意義(P0.05,P0.01),且呈劑量和時(shí)間依賴性；4.用藥48h后,PGPIPN、DDP單獨(dú)用藥和聯(lián)合用藥組都可以誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡,聯(lián)合用藥組隨著PGPIPN劑量的增加,與DDP組相比凋亡率逐漸增加,說明PGPIPN可以促進(jìn)DDP誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞的凋亡；5.通過細(xì)胞流式術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),PGPIPN和DDP都可將細(xì)胞阻滯在G2/M期,聯(lián)合用藥時(shí),可發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥后增強(qiáng)了兩種藥物的作用效果,G2/M期阻滯率較單獨(dú)用藥組都增高；6.克隆形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),用藥組與正常對照組相比,細(xì)胞克隆形成抑制率明顯增高,聯(lián)合用藥組與單獨(dú)DDP組相比,克隆抑制率明顯升高,且呈劑量依賴性,實(shí)驗(yàn)說明PGPIPN可以促進(jìn)DDP抑制卵巢癌細(xì)胞的克隆形成；7.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),用藥組的細(xì)胞遷移能力明顯比對照組降低,聯(lián)合用藥組與DDP單獨(dú)用藥組相比,細(xì)胞遷移能力隨著PGPIPN濃度的增加而降低(P0.05,P0.01)；8.細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨著聯(lián)合用藥中PGPIPN濃度的增加,穿過小室的細(xì)胞數(shù)逐漸減少,說明PGPIPN可以促進(jìn)DDP對細(xì)胞侵襲能力的抑制；HE染色后觀察細(xì)胞形態(tài),可見PGPIPN處理形態(tài)變化不明顯,細(xì)胞數(shù)減少。DDP處理的細(xì)胞固縮,極性減弱,細(xì)胞數(shù)變少。PGPIPN+DDP組改變更明顯,核染色加深,極性減弱,細(xì)胞數(shù)變少；9.PCR結(jié)果顯示,用藥后Aktl、PI3K、ERCC1和MDR1基因水平水平顯著下降,聯(lián)合用藥和單獨(dú)DDP組相比,隨著PGPIPN濃度的增高,Aktl、PI3K、ERCC1和MDR1基因水平表達(dá)水平下降的越明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01)；10.Western Blot結(jié)果顯示,用藥后pAKT、PI3K、ERCC1和P-gp蛋白表達(dá)水平顯著下降,聯(lián)合用藥和單獨(dú)DDP組相比,隨著PGPIPN濃度的增高,pAKT、PI3K和P-gp蛋白表達(dá)水平下降的越明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01)結(jié)論：1.原代卵巢癌細(xì)胞培養(yǎng)成功,其純度可供下一步實(shí)驗(yàn)；2.PGPIPN可以加強(qiáng)DDP對卵巢癌增殖抑制的作用；3.PGPIPN可以促進(jìn)DDP誘導(dǎo)卵巢癌的凋亡；4. PGPIPN聯(lián)合DDP對卵巢癌的周期主要影響在G2/M期；5. PGPGIPN可以加強(qiáng)DDP抑制卵巢癌的侵襲和遷移的能力：6.PGPIPN可以增強(qiáng)DDP對細(xì)胞克隆形成抑制的能力；7. PGPIPN聯(lián)合DDP用藥后,細(xì)胞極性減弱,細(xì)胞變圓,細(xì)胞數(shù)變少；8.PGPIPN聯(lián)合DDP用藥后Akt1、PI3K、ERCC1和VDR1基因水平及蛋白表達(dá)量下降,說明PGPIPN提高卵巢癌細(xì)胞對DDP的敏感性與PI3K/AKT通路相關(guān),同時(shí)也可以降低耐藥基因的表達(dá)。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：R737.31
【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述 腫瘤耐順鉑機(jī)制的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)

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1 ;發(fā)現(xiàn)休眠卵巢癌細(xì)胞存活機(jī)制[J];生命世界;2009年02期

2 尹雅潔;盛修貴;王興武;高楠;王菲;鄧祥云;;葡萄糖對卵巢癌細(xì)胞生長增殖影響體外研究[J];中華腫瘤防治雜志;2017年10期

3 ;美發(fā)現(xiàn)休眠卵巢癌細(xì)胞存活機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2009年04期

4 余志英,周霞平,杜靜,張金超,羅軍,柯瑋琳;紫杉醇誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡及基因調(diào)控的研究[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年03期

5 余志英,杜靜,張金超,李麗文,初虹,柯瑋琳;紫杉醇對卵巢癌細(xì)胞端粒酶活性影響的研究[J];實(shí)用腫瘤學(xué)雜志;2005年02期

6 張?zhí)N莉 ,徐剛 ,任鐵力;熱休克反應(yīng)對卵巢癌細(xì)胞凋亡影響的研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2002年10期

7 劉淑娟,辛?xí)匝?多腫瘤抑制基因?qū)β殉舶┘?xì)胞周期的影響[J];西北國防醫(yī)學(xué)雜志;2001年02期

8 連紅梅;姜麗華;;右美托咪定對卵巢癌細(xì)胞相關(guān)生物學(xué)行為的影響[J];實(shí)用藥物與臨床;2018年04期

9 李嫣;湯小晗;盧美松;;表皮生長因子受體信號通路對卵巢癌細(xì)胞自噬的調(diào)控[J];國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2017年02期

10 張晶晶;王波;;卵巢癌細(xì)胞與腹膜間皮細(xì)胞相互作用對卵巢癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)及侵襲的影響[J];實(shí)用婦產(chǎn)科雜志;2006年04期

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2 龍啟芳;腫瘤干細(xì)胞靶向殺傷病毒表達(dá)系統(tǒng)對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)性狀影響的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2017年

3 劉嬌陽;Claudin-6對卵巢癌細(xì)胞SKOV3生物學(xué)行為影響的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

4 袁犁;miR-124通過靶向PDCD6抑制卵巢癌細(xì)胞及誘導(dǎo)凋亡機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號：2844778