原發(fā)性肝癌位于我國癌癥死因的第二位,總體死亡率和發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢。早期肝癌診斷可以提高肝癌患者治療效果,改善預后,是提高肝癌患者生存率的重要手段,但是傳統(tǒng)的檢測方法無法有效及準確的對肝癌進行早期診斷。本論文提出基于表面等離子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)的早期肝癌標志物的聯(lián)合檢測方法,并選擇甲胎蛋白(Alpha Fetoprotein,AFP)與miRNA-125b作為聯(lián)合檢測標志物,提高診斷靈敏度與特異性,有望實現(xiàn)對肝癌的早期診斷,改善肝癌患者的存活率。本論文針對血清中AFP與miRNA-125b的聯(lián)合、特異性、高靈敏度濃度測量,主要完成了以下工作:首先,選用基于SPR的Biacore 3000檢測系統(tǒng),利用其微流體系統(tǒng)的四通道設計,通過單通道選通修飾與四通道串聯(lián)測量的有機結合,僅需單份微量患者血清樣品,便可以實現(xiàn)其中AFP與miRNA-125b的聯(lián)合定量檢測。同時,通過在四通道中選擇第一通道,將其設置為參考通道,消除背景光及其他環(huán)境因素的干擾。接著,選用CM5芯片,利用芯片表面的葡聚糖,通過共價鍵結合在芯片的金膜表面修飾AFP與miRNA-125b的生物探針,消除血清中復雜成分(例如,蛋白質、葡萄糖、激素等)的干擾,實現(xiàn)對AFP與miRNA-125b的特異性檢測。實驗中將與miRNA-125b堿基互補配對的DNA探針修飾在第二通道的傳感區(qū)域,將抗AFP單克隆抗體修飾在第三通道的傳感區(qū)域,實驗結果表明,實現(xiàn)了對AFP與miRNA-125b特異性檢測,但是這種直接檢測法的靈敏度不高,無法滿足血清中檢測要求。然后,分別采用雙抗夾心法和S9.6抗體增強法,提高AFP與miRNA-125b的SPR響應信號和檢測靈敏度,實現(xiàn)血清中AFP與miRNA-125b的低濃度檢測。實驗結果表明,雙抗夾心法能夠提高AFP的檢測靈敏度,可以實現(xiàn)臨床濃度范圍0-400ng/mL的精確檢測;S9.6抗體增強法能夠提高miRNA-125b的檢測靈敏度,最小檢測濃度可以達到200pM。最后,應用雙抗夾心法和S9.6抗體增強法修飾的CM5芯片對AFP(0-400ng/mL)與miRNA-125b(0-1000pM)進行了聯(lián)合檢測實驗,驗證了本論文提出的聯(lián)合檢測方法在早期肝癌診斷中的可行性。
【學位單位】：天津大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7;O646.9
【部分圖文】：

(a) (b)圖 2-2 (a) SensiQ 測量系統(tǒng)圖; (b) SensiQ Discovery 測量系統(tǒng)圖 與 SensiQ Discovery 是以 SPR 技術為基礎的半自動通道生物儀。如圖 2-2 所示，SensiQ 與 SensiQ Discovery 具有先進的光的微流控系統(tǒng)、多樣的芯片表面修飾、簡單方便的控制軟件件，是應用廣泛的生物分子相互作用檢測系統(tǒng)。SensiQ 與出現(xiàn)，使得科研機構獲得生物分子間相互作用的動力學和親。這些生物分子相互作用的檢測結果有助于開發(fā)藥物、研究細開發(fā)抗體篩選等。 與 SensiQ Discovery 內部應用的 Spreeta 光學傳感器，該傳感ann 棱鏡結構，測量結果具有較好的靈敏度和穩(wěn)定性。作為內ta 傳感器安裝方便，幾秒鐘即可輕松完成。此外，用戶可以多種化學修飾，用于研究不同生物分子之間的相互作用。在微個納升數(shù)量級的流通通道，將其中一個作為參考通道，用于

圖 2-3 SensiQ Pioneer 測量系統(tǒng)圖ensiQ Pioneer 的內部微流控系統(tǒng)，件，制作工藝精細和經(jīng)久耐用。在該液的情況，確保系統(tǒng)可以正常使用命。由于該系統(tǒng)具有全自動的三通方式，可以檢測多種生物分子之間通量和高靈敏度的需求。對于不現(xiàn)全自動配置具有不同濃度的待測動吸入緩沖液與待測樣品混合，產(chǎn)人為配置溶液帶來的誤差。該方法劑樣品以及傳感器消耗。

天津大學碩士學位論文性re 系列檢測系統(tǒng)的配套傳感芯，核酸，碳水化合物等各種配體的載玻片，金膜表面修飾了一層配體連接在芯片表面，實現(xiàn)對待一些有機溶劑中，芯片表面上面修飾上配體后，配體的穩(wěn)定時測量 AFP 和 miRNA-125b 的M5 芯片上，具有一層葡聚糖，定在金膜表面的不同區(qū)域，實
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本文編號：2840132