癌癥是世界范圍內(nèi)的主要公共健康問題。近年來(lái)隨著腫瘤新藥、藥物伴隨診斷和多種新型療法的開發(fā),腫瘤治療取得了一系列突破性的進(jìn)展,過去十年間主要發(fā)達(dá)國(guó)家的癌癥死亡率在穩(wěn)步下降。溶瘤病毒療法作為一種新型的腫瘤免疫治療手段,已經(jīng)成為未來(lái)最具有潛力和應(yīng)用前景的惡性腫瘤新型治療手段之一。近年來(lái)已開展的溶瘤病毒相關(guān)臨床試驗(yàn)超過60個(gè),美國(guó)Amgen公司的溶瘤病毒T-VEC于2015年獲批上市銷售,成為首個(gè)美國(guó)FDA批準(zhǔn)的用于晚期腫瘤治療的病毒療法。盡管溶瘤病毒在臨床試驗(yàn)中展示出良好的安全性和抗腫瘤活性,但由于腫瘤的復(fù)雜性導(dǎo)致溶瘤病毒療法對(duì)不同類型腫瘤以及對(duì)同一類型腫瘤的不同患者之間的治療效果存在較大差異。這種臨床應(yīng)答差異促使我們對(duì)溶瘤病毒選擇性殺傷機(jī)制進(jìn)行研究以期鑒別在其中發(fā)揮關(guān)鍵作用的宿主限制因子,從而有助于指導(dǎo)溶瘤病毒未來(lái)的臨床應(yīng)用,或是開發(fā)新的治療藥物解除宿主因子的限制從而進(jìn)一步增強(qiáng)溶瘤病毒療效。通過對(duì)實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的溶瘤病毒oHSV-1進(jìn)行溶瘤研究發(fā)現(xiàn),病毒敏感型HeLa細(xì)胞中存在少量能夠抵抗oHSV-1殺傷的細(xì)胞,通過病毒反復(fù)感染剩余細(xì)胞的方式將這部分病毒抵抗型細(xì)胞富集,命名為HeLa-R細(xì)胞。為探究HeLa-R細(xì)胞抵抗溶瘤病毒殺傷的分子機(jī)制,首先我們利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序RNA-Seq技術(shù)對(duì)HeLa和HeLa-R細(xì)胞的基因表達(dá)水平進(jìn)行比較,篩選出差異表達(dá)基因共448個(gè),其中HeLa-R細(xì)胞中上調(diào)表達(dá)基因197個(gè),下調(diào)表達(dá)基因251個(gè)。接著我們進(jìn)一步對(duì)448個(gè)基因進(jìn)行GO功能注釋及KEGG富集分析,發(fā)現(xiàn)差異基因GO功能注釋主要富集在生物進(jìn)程和細(xì)胞組分方面。KEGG富集分析顯示富集最顯著的是細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用,此外細(xì)胞基質(zhì)粘連、癌癥相關(guān)信號(hào)通路等多個(gè)生物學(xué)進(jìn)程均被富集。隨后我們分別從HeLa-R顯著上調(diào)基因和富集信號(hào)通路兩個(gè)方面對(duì)RNA-Seq結(jié)果進(jìn)行分析驗(yàn)證。我們利用RNA干擾技術(shù)沉默HeLa-R細(xì)胞中22個(gè)顯著上調(diào)基因,通過顯微觀察、結(jié)晶紫染色和WST-1細(xì)胞活力檢測(cè)法分析是否下調(diào)這些基因的表達(dá)會(huì)促進(jìn)oHSV-1對(duì)HeLa-R細(xì)胞的殺傷能力。經(jīng)過多次驗(yàn)證我們發(fā)現(xiàn)CREB3L1,CXCL1和OLR1三個(gè)基因在HeLa-R細(xì)胞抵抗溶瘤病毒殺傷中起重要作用,其中CXCL1在多株病毒抵抗型細(xì)胞中均高表達(dá)且下調(diào)其表達(dá)后溶瘤病毒對(duì)它們的殺傷能力增強(qiáng)。此外,我們針對(duì)部分KEGG富集信號(hào)通路中關(guān)鍵信號(hào)分子選擇對(duì)應(yīng)的抑制劑來(lái)驗(yàn)證相關(guān)信號(hào)通路是否在HeLa-R細(xì)胞抵抗oHSV-1殺傷中發(fā)揮作用,研究結(jié)果表明MEK1/2抑制劑U0126(MAPK信號(hào)通路)及CDK4/6抑制劑Palbociclib(Cell cycle信號(hào)通路)能夠提高溶瘤病毒oHSV-1對(duì)HeLa-R細(xì)胞的殺傷作用。本研究利用RNA-Seq技術(shù)篩選宿主細(xì)胞中限制溶瘤病毒復(fù)制殺傷的因子,發(fā)現(xiàn)CREB3L1,CXCL1和OLR1三個(gè)在病毒抵抗型細(xì)胞中發(fā)揮抗病毒作用的基因,并對(duì)其抗病毒機(jī)制進(jìn)行了初步研究,研究結(jié)果將為溶瘤病毒oHSV-1臨床治療提供伴藥診斷指導(dǎo),為提高病毒溶瘤活性提供了潛在的分子靶標(biāo)。
【學(xué)位單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R730.5
【部分圖文】：

毒類型??中存在將近１００萬(wàn)的脊椎動(dòng)物病毒，其中約有３２萬(wàn)能夠感染然而并不是所有病毒都適用于腫瘤治療。表１－１對(duì)多種可作為毒及其特點(diǎn)進(jìn)行了總結(jié)。??表１－ｌａ?ＤＮＡ病毒特性［６］??Ｔａｂｌｅ?１－ｌａ?Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ?ｏｆ?ｓｅｌｅｃｔ?ＤＮＡ?ｖｉｒｕｓｅｓ１６１??Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ?Ｖａｃｃｉｎｉａ?ｖｉｒｕｓ?Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ?Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ?Ｈｉ??來(lái)｜＃??Ｉ?ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?１?Ｉ?Ｉ??７０－９０?ｎｍ?７０－１００?ｎｍ?２００?ｎｍ?１８－２８?ｎｍ??ｌｔｉｍｏｒｅ?ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ｃｒｏｕｐ?ｌ：ｄｓＤＮＡ?Ｃｒｏｕｐ?Ｉ：?ｄｓＤＮＡ?Ｃｒｏｕｐ?Ｉ：?ｄｓＤＮＡ?Ｃｒｏｕｐ?ＩＩ：?ｓｓＤＮＡ??ｍｉｌｙＡｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ?Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ?Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ?Ｐａｒｖｏｖｉｒｌｄａｅ??

圖.即.吶歸晰.峭面

通過提高病毒感染復(fù)數(shù)（ＭＯＩ）以期１００％殺傷腫瘤細(xì)胞，以ＭＯＩ＝５的病毒??劑量感染三種腫瘤細(xì)胞系：Ｈ１２９９、ＭＣＦ７及ＨｅＬａ，顯微鏡觀察并記錄感染后第??０天、２天、５天及１５天后溶瘤病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷情況（圖３－２）。結(jié)果顯??示病毒處理后第２天，三種腫瘤細(xì)胞均僅殘余少于１％的腫瘤細(xì)胞；病毒處理后??第５天，ＨｅＬａ細(xì)胞可觀察到未被殺死的少量腫瘤細(xì)胞開始增殖，而Ｈ１２９９和??ＭＣＦ７細(xì)胞在病毒處理后殘余的少量細(xì)胞未發(fā)生增殖；病毒處理后第１５天，ＨｅＬａ??細(xì)胞匯合度由第５天的約５％以下增長(zhǎng)至約７０％，而Ｈ１２９９和ＭＣＦ７無(wú)細(xì)胞存??活。由此推測(cè)，ＨｅＬａ細(xì)胞中可能存在少數(shù)能夠抵抗溶瘤病毒殺傷的細(xì)胞亞型。??０?ｄａｙ?２?ｄａｙ?５?ｄａｙ?１５?ｄａｙ??Ｈ?■■■■??＿Ｅ?…??■■■■??圖３－２腫瘤細(xì)胞感染ｏＨＳＶ－ｌ后生長(zhǎng)情況觀察??Ｆｉｇ．３－２?Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ?ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃａｎｃｅｒ?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ?ｗｉｔｈ?ｏＨＳＶ－１??３２??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 ;Anti-tumor effect of oncolytic herpes simplex virus G47delta on human nasopharyngeal carcinoma[J];癌癥;2011年12期

2 夏忠軍,常建華,張力,姜文奇,管忠震,劉基巍,張陽(yáng),胡曉樺,吳國(guó)華,王華慶,陳正常,陳建超,周清華,陸建偉,樊青霞,黃建瑾,鄭曉;基因工程腺病毒(H101)瘤內(nèi)注射聯(lián)合化療治療頭頸部及食管鱗癌的Ⅲ期臨床研究[J];癌癥;2004年12期

本文編號(hào)：2838672