目的:本文明確SOD3蛋白在胃癌細(xì)胞增殖中的作用及機制,為闡明胃癌發(fā)病的分子機制提供依據(jù)。方法:1、將pCDNA3.1-SOD3真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染胃癌MGC803細(xì)胞(pCDNA3.1為載體對照),G418篩選后,建立SOD3穩(wěn)定高表達(dá)的MGC803細(xì)胞系,即MGC803-SOD3細(xì)胞(MGC803-pCDNA3.1為載體對照細(xì)胞),通過免疫熒光與Western-blot檢測MGC803-SOD3細(xì)胞中SOD3的表達(dá)。2、采用細(xì)胞生長曲線、平皿克隆與軟瓊脂集落形成實驗、流式細(xì)胞儀觀察SOD3高表達(dá)對MGC803細(xì)胞生長與增殖的影響。3、Western-blot檢測MGC803-SOD3細(xì)胞中JAK3、STAT3及其磷酸化蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.細(xì)胞生長曲線結(jié)果顯示,SOD3高表達(dá)后,MGC803-SOD3細(xì)胞的生長較對照組MGC803與MGC803-pCDNA3.1細(xì)胞明顯減慢(P0.01);2、平皿克隆結(jié)果顯示,MGC803、MGC803-pCDNA3.1與MGC803-SOD3細(xì)胞的克隆數(shù)分別為262.32±29.34、250.43±27.26和86.52±12.43(個)。結(jié)果說明SOD3高表達(dá)后,MGC803細(xì)胞增殖能力降低,形成克隆數(shù)較對照組MGC803與MGC803-pCDNA3.1細(xì)胞明顯減少,克隆體積變小(P0.01);3、軟瓊脂集落結(jié)果顯示,MGC803、MGC803-pCDNA3.1與MGC803-SOD3細(xì)胞的集落分別為326.42±35.24、314.13±32.25和128.21±21.42(個),結(jié)果同樣說明SOD3高表達(dá)后,MGC803細(xì)胞增殖能力也降低,形成集落數(shù)較對照組MGC803與MGC803-pCDNA3.1細(xì)胞明顯減少,集落體積也變小(P0.01);4、流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示,MGC803、MGC803-pCDNA3.1與MGC803-SOD3細(xì)胞S期比例分別為46.26±2.38、42.34±2.45和31.26±2.34,G1期比例分別為46.12±2.52、8.22±2.64和61.73±3.12,細(xì)胞增殖指數(shù)分別為53.88、51.77和38.27;結(jié)果說明SOD3高表達(dá)后,MGC803細(xì)胞中S期比例降低,G1期比例增加,且細(xì)胞增殖指數(shù)降低(P0.01);同時,MGC803、MGC803-pCDNA3.1與MGC803-SOD3細(xì)胞的凋亡率分別為9.67±1.24、10.02±1.32和28.95±3.26,結(jié)果說明SOD3高表達(dá)后,MGC803細(xì)胞的凋亡率增加(P0.01)。5、Western-blot結(jié)果顯示:MGC803-SOD3細(xì)胞中JAK3、STAT3蛋白表達(dá)無明顯差異,但兩蛋白的磷酸化水平較對照組MGC803、與MGC803-pCDNA3.1細(xì)胞降低(P0.01)。結(jié)論:SOD3降低細(xì)胞生長增殖能力,促進(jìn)MGC803細(xì)胞凋亡,可能與其抑制JAK3-STAT3通路活化有關(guān)。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.2
【部分圖文】：

圖 3-1 MGC803-SOD3 細(xì)胞中 SOD3 蛋白表達(dá)的鑒定03-pcDNA3.1 和 MGC803-SOD3 細(xì)胞的克隆圖（×10）。光觀察 MGC803-SOD3 細(xì)胞中 SOD3 蛋白的表達(dá)（×40）。n-blot 檢測 MGC803-SOD3 細(xì)胞中 SOD3 蛋白的表達(dá)。白表達(dá)的灰度分析直方圖。*與MGC803和MGC803-pcDNA3.1細(xì)胞3 高表達(dá)對 MGC803 細(xì)胞生長的影響態(tài)良好的 MGC803、MGC803-pcDNA3.1 和 MGC803-SOD3 細(xì)孔板中，每天對三組細(xì)胞采用 MTT 法檢測每孔細(xì)胞的吸光度值，連續(xù)檢測 7 天，將檢測結(jié)果連接成的細(xì)胞生長曲線。細(xì)胞，MGC803-SOD3 細(xì)胞的生長速度較 MGC803 和 MGC803減慢（如圖 3-2，P<0.01）。結(jié)果說明 SOD3 高表達(dá)后 MGC

圖 3-2 MGC803、MGC803-pcDNA3.1 和 MGC803-SOD3 細(xì)胞的生長曲線*與 MGC803 和 MGC803-pcDNA3.1 細(xì)胞比較，P<0.01。D3 高表達(dá)對 MGC803 細(xì)胞克隆形成的影響態(tài)良好的MGC803、MGC803-pcDNA3.1和MGC803-SOD3細(xì)胞每組均設(shè)3個平行孔，觀察SOD3高表達(dá)對MGC803克隆形成的 數(shù) 及 克 隆 形 成 率 。 結(jié) 果 顯 示 ， MGC803 、 MGC803-pcD-SOD3細(xì)胞克隆數(shù)分別為262.32±29.34、250.43±27.26和86MGC803-SOD3細(xì)胞形成的克隆體積小，克隆數(shù)目少，其克隆GC803和MGC803-pcDNA3.1細(xì)胞（如圖3-3和表3-1，P<0.01）3高表達(dá)后MGC803細(xì)胞的增殖能力降低。

MGC803-SOD3細(xì)胞克隆數(shù)分別為262.32±29.34、250.43±27.26和86.52±12.43（個），MGC803-SOD3細(xì)胞形成的克隆體積小，克隆數(shù)目少，其克隆形成率明顯低于MGC803和MGC803-pcDNA3.1細(xì)胞（如圖3-3和表3-1，P<0.01）。結(jié)果說明，SOD3高表達(dá)后MGC803細(xì)胞的增殖能力降低。AMGC803細(xì)胞MGC803-pcDNA3.1 細(xì)胞Days****相對吸光值
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本文編號：2838261