[目的]我們既往研究發(fā)現(xiàn)外周血血小板計數(shù)與甲狀腺未分化癌(anaplastic thyroid carcinoma,ATC)預(yù)后呈負(fù)相關(guān),因此推測血小板可能參與了 ATC的進(jìn)展。血小板已被報道跟多種腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān),我們推測血小板可能參與了促進(jìn)ATC侵襲轉(zhuǎn)移的過程。本研究擬探索血小板與ATC侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)性并進(jìn)一步探討其機(jī)制。[方法]體外分離健康成年人外周血血小板;Transwell侵襲和遷移實驗檢測血小板對甲狀腺未分化癌細(xì)胞株侵襲和遷移能力的影響;動物實驗進(jìn)一步驗證血小板對甲狀腺未分化癌侵襲轉(zhuǎn)移的影響;Transwell侵襲和遷移實驗檢測ATC細(xì)胞與血小板共培養(yǎng)后的細(xì)胞上清對ATC細(xì)胞侵襲遷移能力的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測凝血酶刺激血小板后血小板活化情況;人細(xì)胞因子抗體芯片檢測單純甲狀腺未分化癌細(xì)胞組、與血小板共培養(yǎng)組及單純活化血小板組之間差異較明顯的細(xì)胞因子;Transwell實驗進(jìn)一步驗證芯片篩選出的差異較明顯的細(xì)胞因子是否促進(jìn)ATC細(xì)胞侵襲遷移;Real-time PCR及Western blot技術(shù)分別檢測基因CCL3的受體CCR1、CCR5的mRNA及蛋白表達(dá)水平;siRNA技術(shù)分別下調(diào)CCR1和CCR5在甲狀腺未分化癌細(xì)胞株中的表達(dá),Western blot檢測CCR1和CCR5的敲低效果,Transwell實驗分別檢測敲低CCR1和CCR5后對CCL3促進(jìn)甲狀腺未分化癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響;分子克隆技術(shù)構(gòu)建靶向過表達(dá)人CCR5質(zhì)粒pMSCV-CCR5;逆轉(zhuǎn)錄病毒方法建立穩(wěn)定內(nèi)源性過表達(dá)CCR5基因的甲狀腺未分化癌細(xì)胞株;Real-time PCR及Western blot技術(shù)分別檢測靶基因CCR5的mRNA及蛋白表達(dá)水平變化后,Transwell侵襲和遷移實驗檢測其侵襲和遷移能力變化;Western blot檢測相關(guān)通路分子水平變化。[結(jié)果]體內(nèi)外實驗均證實血小板促進(jìn)ATC侵襲和遷移;Transwell實驗發(fā)現(xiàn)ATC細(xì)胞株與血小板共培養(yǎng)后的細(xì)胞上清明顯增加其侵襲遷移能力;流式細(xì)胞術(shù)證實凝血酶能體外激活血小板;人細(xì)胞因子抗體芯片篩選出差異明顯的細(xì)胞因子CCL3,并且侵襲和遷移實驗證實CCL3能促進(jìn)ATC侵襲轉(zhuǎn)移;Transwell實驗和siRNA技術(shù)發(fā)現(xiàn)CCL3是通過CCL3-CCR5軸參與血小板促ATC侵襲轉(zhuǎn)移過程;成功構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)CCR5的甲狀腺未分化癌細(xì)胞株;Transwell實驗證實過表達(dá)CCR5可促進(jìn)CCL3對ATC細(xì)胞的侵襲和遷移能力。Western blot發(fā)現(xiàn)CCL3-CCR5軸通過激活NF-κB信號通路上調(diào)MMP-1蛋白的表達(dá)進(jìn)而參與血小板促ATC侵襲轉(zhuǎn)移過程。[結(jié)論]血小板能促進(jìn)ATC侵襲和轉(zhuǎn)移,活化的血小板分泌的CCL3通過與其受體CCR5相互結(jié)合發(fā)揮作用,并進(jìn)一步激活NF-κB信號通路上調(diào)MMP1蛋白的表達(dá)從而參與血小板促ATC侵襲轉(zhuǎn)移過程。本研究結(jié)果為探索和治療ATC轉(zhuǎn)移提供了新思路、新方向。
【學(xué)位單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R736.1
【部分圖文】：

?昆明醫(yī)科大學(xué)２０１８屆碩士研宄生學(xué)位論文???結(jié)果??１、體外實驗發(fā)現(xiàn)血小板能顯著促進(jìn)ＡＴＣ細(xì)胞侵襲遷移??Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ方法檢測血小板對ＡＴＣ細(xì)胞株（ＡＲＯ、ＳＷ５７９）侵襲遷移的影響，??結(jié)果發(fā)現(xiàn)血小板能促進(jìn)ＡＴＣ細(xì)胞的遷移和侵襲（圖１Ａ和圖１Ｂ）（注：血小板單??獨行ｔｍｎｓｗｅｌｌ實驗不會粘附于小室膜）??ＰＩ?Ｔ：ＡＲＯ?＇－ｉ??

一??？關(guān)盡？??圖２?（Ａ）肺組織Ｈ－Ｅ染色病理檢查比較血小板處理的ＡＲＯ細(xì)胞移植組與單純ＡＲＯ細(xì)胞移??植組肺微轉(zhuǎn)移灶數(shù)量；（Ｂ）肺組織Ｈ－Ｅ染色病理檢查比較血小板處理的ＳＷ５７９細(xì)胞移植組??與單純ＳＷ５７９細(xì)胞移植組肺微轉(zhuǎn)移灶數(shù)量。??３、ＡＴＣ細(xì)胞與血小板共培養(yǎng)后的細(xì)胞上清能促進(jìn)ＡＴＣ細(xì)胞侵襲遷移能力??ＡＲＯ細(xì)胞和血小板數(shù)目以１：４００于１２孔板中分別共培養(yǎng)２４ｈ和４８ｈ，分別??標(biāo)記共培養(yǎng)２４ｈ的細(xì)胞上清為ｃｅｌｌ?ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ－１和共培養(yǎng)４８ｈ的細(xì)胞上清為ｃｅｌｌ??ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ－２，利用ｔｒａｎｓｗｅｌｌ方法檢測與血小板共培養(yǎng)后的細(xì)胞上清對ＡＲＯ細(xì)??胞侵襲遷移的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與血小板共培養(yǎng)的細(xì)胞上清能促進(jìn)ＡＴＣ細(xì)胞的遷??移和侵襲能力，且在一定時間內(nèi)隨著共培養(yǎng)時間的增加，其對ＡＴＣ細(xì)胞侵襲遷??移的作用也增強(qiáng)，結(jié)果見圖３。??ｉ?ｔ＇ｌｌ?ＨＭＪＵＴＩＩｉｌｔｉｔｎｌ??

圖２?（Ａ）肺組織Ｈ－Ｅ染色病理檢查比較血小板處理的ＡＲＯ細(xì)胞移植組與單純ＡＲＯ細(xì)胞移??植組肺微轉(zhuǎn)移灶數(shù)量；（Ｂ）肺組織Ｈ－Ｅ染色病理檢查比較血小板處理的ＳＷ５７９細(xì)胞移植組??與單純ＳＷ５７９細(xì)胞移植組肺微轉(zhuǎn)移灶數(shù)量。??３、ＡＴＣ細(xì)胞與血小板共培養(yǎng)后的細(xì)胞上清能促進(jìn)ＡＴＣ細(xì)胞侵襲遷移能力??ＡＲＯ細(xì)胞和血小板數(shù)目以１：４００于１２孔板中分別共培養(yǎng)２４ｈ和４８ｈ，分別??標(biāo)記共培養(yǎng)２４ｈ的細(xì)胞上清為ｃｅｌｌ?ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ－１和共培養(yǎng)４８ｈ的細(xì)胞上清為ｃｅｌｌ??ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ－２，利用ｔｒａｎｓｗｅｌｌ方法檢測與血小板共培養(yǎng)后的細(xì)胞上清對ＡＲＯ細(xì)??胞侵襲遷移的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與血小板共培養(yǎng)的細(xì)胞上清能促進(jìn)ＡＴＣ細(xì)胞的遷??移和侵襲能力，且在一定時間內(nèi)隨著共培養(yǎng)時間的增加，其對ＡＴＣ細(xì)胞侵襲遷??移的作用也增強(qiáng)，結(jié)果見圖３。??ｉ?ｔ＇ｌｌ?ＨＭＪＵＴＩＩｉｌｔｉｔｎｌ??ｍｎｌｎｔｌ?丨?２?ｕＨｔ??Ｉ１?￣￣?—??？利ｙ，？?■＿?．１?ｒ－ｗ＾－＾．＾ｖｓＪ—?－?—?——ｉｔ—；－ｎｅ？?ＪＵｉ－?＊??Ｔ?？＊?－?，，?ｌ？，?？?？、?１?＾??＞？?＇，？＇，／■，“’’Ｌ．心ｖＷ?１?＝—麵?ｉ??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 曹玉珠;劉兆國;單云龍;孫麗華;劉玉萍;韋忠紅;祝娉婷;吳紅雁;王愛云;陳文星;鄭仕中;陸茵;;血小板介導(dǎo)腫瘤血行轉(zhuǎn)移的作用及其機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國藥理學(xué)通報;2015年02期

2 馬杰;王一堯;楊偉;關(guān)碩;曾常茜;高文斌;梁文波;;西黃丸抗腫瘤作用及其免疫清除功能的實驗研究[J];中國中藥雜志;2014年08期

3 張娜;婁晉寧;;血小板促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2009年03期

本文編號：2836558