研究背景:急性T淋巴細(xì)胞白血病(Acute T cell leukemia,T-ALL)是一組起源于T系淋巴祖細(xì)胞的血液系統(tǒng)惡性腫瘤,多見于兒童及40歲以上成人。T-ALL患者通常白細(xì)胞高,易浸潤神經(jīng)系統(tǒng),并伴有縱隔腫塊。據(jù)統(tǒng)計(jì)約70%病人伴有Notch1基因的突變,突變Notch1基因參與T-ALL腫瘤細(xì)胞增殖、分化、代謝等多種細(xì)胞活動(dòng)。在我們的前期研究中,成功建立了Notch1轉(zhuǎn)基因斑馬魚,并且通過轉(zhuǎn)錄組測序,篩選出差異表達(dá)基因,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶CDK4、CDK6等基因高表達(dá)。因此本文旨在研究CDK4/6是否在Notch1高表達(dá)的T-ALL發(fā)病中起到一定作用?CDK4/6選擇性抑制劑Palbociclib,能否逆轉(zhuǎn)部分白血病細(xì)胞增殖。研究目的:應(yīng)用Notch1轉(zhuǎn)基因斑馬魚與T-ALL細(xì)胞株,探討Notch1高表達(dá)T-ALL發(fā)病中細(xì)胞增殖相關(guān)的體內(nèi)、外機(jī)制研究,并應(yīng)用細(xì)胞周期抑制劑進(jìn)行靶向藥物干預(yù)效價(jià)探索。研究方法:體內(nèi)實(shí)驗(yàn),分別選用Notch1轉(zhuǎn)基因斑馬魚系以及野生斑馬魚系作為實(shí)驗(yàn)組和對照組,對兩組進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序分析,遴選Notch1可能的靶基因;選用差異基因的抑制劑進(jìn)行活體干預(yù),RT-qPCR方法定量檢測基因表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn),分別選取高表達(dá)Notch1的T-ALL細(xì)胞株(A3、MOLT-4)與正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組和對照組,PCR方法用于檢測兩組細(xì)胞中Notch1信號相關(guān)基因的表達(dá);CCK8法檢測Palbociclib對上述細(xì)胞的增殖抑制率;細(xì)胞涂片觀察細(xì)胞的增殖及形態(tài);并利用流式細(xì)胞術(shù)分析兩組細(xì)胞在Palbociclib不同濃度時(shí)的細(xì)胞周期;及RT-qPCR檢測相關(guān)基因表達(dá)。研究結(jié)果:在Notch1轉(zhuǎn)基因斑馬魚中轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果提示CDK4/6高表達(dá),RT-qPCR檢測不同濃度Palbociclib(0、50、100nM)處理后的斑馬魚標(biāo)本,上述基因表達(dá)被抑制。常規(guī)PCR檢測在T-ALL細(xì)胞株同樣高表達(dá)CDK4/6、Myc、Notch1等基因。細(xì)胞周期分析,Palbociclib處理前,A3、MLOT-4的(S+G2)期分別為(55.93±1.18)%及(58.17±2.40)%,高于對照組(48.93±1.85)%);藥物處理后,兩組細(xì)胞均呈濃度依賴的(S+G2)期下降(P0.05);細(xì)胞血檢查發(fā)現(xiàn),100nM濃度時(shí),T-ALL細(xì)胞株的(S+G2)期細(xì)胞接近對照組(P0.05)。RT-qPCR結(jié)果提示,相比0nM濃度,CDK4/6在50、100nM濃度時(shí)表達(dá)下降,并與濃度呈正相關(guān),而Myc、Notch1基因在50nM時(shí)無差異,Myc基因在100nM時(shí)表達(dá)下調(diào),而Notch1基因在100nM時(shí)表達(dá)上調(diào)(P0.05)。研究結(jié)論:在Notch1轉(zhuǎn)基因斑馬魚和Notch1高表達(dá)的T-ALL細(xì)胞株高表達(dá)CDK4/6、Myc等基因,Palbociclib不僅可以通過抑制CDK4/6使腫瘤細(xì)胞阻滯在G1期,使增殖受抑,并且可以抑制T-ALL下游基因Myc的表達(dá)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖,可以對抗部分Notch1對腫瘤細(xì)胞的促進(jìn)增殖作用。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R733.71
【部分圖文】：

圖 2-1. 陰性對照斑與 Notch1馬魚；Figure2-1. Heatmap of theNotch12.5.2 RT-qPCR 定量檢測 Notch1為了驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組測序的RT-qPCR 結(jié)果顯示（圖 2-2Notch1、Myc 等 Notch1 信號通路相關(guān)基因CDK6 等基因（P < 0.05）。轉(zhuǎn)基因斑馬魚差異基因群聚類圖。F: fli1 對照組斑N: Notch1 轉(zhuǎn)基因斑馬魚。difference genes between negative control grouptransgenic zebrafish.轉(zhuǎn)基因斑馬魚相關(guān)基因表達(dá)Notch1 轉(zhuǎn)基因斑馬魚與 Tg 斑馬魚存在的差異基因，2），相比對照組斑馬魚系，Notch1 轉(zhuǎn)基因斑馬魚信號通路相關(guān)基因（P < 0.05），以及細(xì)胞周期相關(guān)基因and轉(zhuǎn)基因斑馬魚高表達(dá)細(xì)胞周期相關(guān)基因 CDK

2-2. Notch1 轉(zhuǎn)基因斑馬魚相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平照組，NOTCH1: Notch1，Notch1 轉(zhuǎn)基因斑馬魚基因igure2-2．Transcri周期選擇性抑制劑otch1 轉(zhuǎn)基因斑馬魚胚胎經(jīng)不同濃度（iclib 處理 72h 后，應(yīng)用表明，Palbociclib 將 80μM (1/2 LC50)A。Tg: (fli1:EGFP)斑馬魚轉(zhuǎn)基因斑馬魚；RT-qPCR 結(jié)果提示，相比對轉(zhuǎn)基因斑馬魚高表達(dá) Notch1、Myc、CDK4、CDK6。（兩組組間比較采用配對 t 檢驗(yàn)，* P<0.0；**P < 0.01）Transcriptional levels of the genes in Notch1 transgeneic fPalbociclib 藥物作用斑馬魚胚胎經(jīng)不同濃度（50、100、 200、 400后，應(yīng)用顯微鏡觀測并記錄其生存狀況，斑馬魚的半數(shù)致死濃度 LC50 是 162.8 ±8.16μM（見Palbociclib 作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的最大濃度。、斑馬魚實(shí)驗(yàn)的最大濃度。

Palbociclib 在斑馬魚的半數(shù)致死量 LC50 A. Palbociclib 處理 72h 時(shí)的生存狀況，并記錄得出的統(tǒng)計(jì)數(shù)字。（藍(lán)色代表生存死）。B.利用 graphad 將 A 的數(shù)據(jù)處理后計(jì)算得到 LC50 的圖示，Notch1 轉(zhuǎn)基因斑馬魚的 LC50=（162.8±8.16）μM。-3. Maximum non-lethal concentration and LC50 determinatPalbociclib.lib 處理后的基因表達(dá)水平改變結(jié)果顯示（圖 2-4）， Palbociclib 應(yīng)用可以顯著下調(diào) 的關(guān)鍵基因（CDK4、CDK6）,并隨 Palbociclib 濃度 2-4A）。而對于 Notch1 信號通路的基因，相比 0μM,其otch1、Myc 的轉(zhuǎn)錄水平均沒有明顯改變（P > 0.05）；8下降（P < 0.05），然而 Notch1 相比對照濃度反而輕微上
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郭冬梅;李斑斑;李純璞;滕清良;;Notch信號通路參與急性移植物抗宿主病的研究進(jìn)展[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2017年01期

2 冷冬;王建章;宋保強(qiáng);;燒傷創(chuàng)面內(nèi)Notch信號因子變化臨床研究[J];臨床軍醫(yī)雜志;2017年04期

3 付超;李勇;李立峰;肖婷婷;馬翔宇;張碧;;雌激素缺乏對骨關(guān)節(jié)炎中Notch信號的影響[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2017年04期

4 馮亮;向明;劉輝;王偉青;楚曉;;NOTCH信號在胸骨后甲狀腺腫中的表達(dá)及其作用的研究[J];中國地方病防治雜志;2016年12期

5 季施燕;徐正府;黃華;鄂群;周國雄;;Notch受體在胃癌的表達(dá)及意義[J];江蘇醫(yī)藥;2016年01期

6 高增法;吳永娜;李汛;;Notch信號通路與肝癌的研究進(jìn)展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2016年04期

7 Xu Yanli;Zhu Feiye;Xu Shan;Liu Luming;;Anti-tumor effect of the extract from Qingyihuaji formula on pancreatic cancer by down-regulating Notch-4 and Jagged-1[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2015年01期

8 張聃;詹新立;;Notch信號通路在骨肉瘤研究中的新進(jìn)展[J];臨床骨科雜志;2015年05期

9 常錦超;;Knuckles & Notch:藝術(shù)書狂熱分子[J];藝術(shù)與設(shè)計(jì);2017年08期

10 彭功玲;田野;逯翀;郭輝;趙向旺;郭雅文;王龍強(qiáng);杜秋麗;劉春萍;;Effects of Notch-1 Down-regulation on Malignant Behaviors of Breast Cancer Stem Cells[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2014年02期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王亞君;Notch信號通路在胸腺基質(zhì)細(xì)胞向脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程中的作用及機(jī)制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2019年

2 鄭廷金;成人T細(xì)胞白血病中Notch1信號通路的激活機(jī)制與功能研究[D];華僑大學(xué);2019年

3 杜中波;肝細(xì)胞粘附分子（HepaCAM）通過下調(diào)Notch信號通路抑制去勢抵抗性前列腺癌的惡性生物學(xué)行為[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

4 海龍;Notch1通路在各分子亞型GBM的表達(dá)及對NF-κB(p65)調(diào)控機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2018年

5 歐超;miR-130b通過抑制Notch-Dll1表達(dá)促進(jìn)肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2017年

6 王東;Notch及其介導(dǎo)的信號通路在乳腺腫瘤干細(xì)胞以及純化三陰性乳腺腫瘤干細(xì)胞中的作用研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2018年

7 徐藝桐;KIAA0247通過Notch通路抑制非小細(xì)胞肺癌增殖，轉(zhuǎn)移和侵襲的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

8 高娜;芪燈明目膠囊有效成分對高糖條件下Dll4/Notch-VEGF信號通路的調(diào)控作用及其抗血管生成機(jī)制的研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2018年

9 徐沛然;HIF-1與Notch信號通路在胰腺癌變中相互調(diào)控機(jī)制的探究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年

10 李雙娣;基于Notch-Dell4信號通路探討宣痹通瘀膠囊保護(hù)心肌損傷及干預(yù)血管新生作用機(jī)制的研究[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李香;細(xì)胞增殖在Notch1高表達(dá)急性T淋巴細(xì)胞白血病中的作用研究[D];上海交通大學(xué);2018年

2 鄧健;降鈣素基因相關(guān)肽調(diào)控Notch信號通路對早產(chǎn)鼠高氧肺損傷的保護(hù)作用機(jī)制研究[D];南華大學(xué);2019年

3 杜若洋;趨化因子受體7（CCR7）通過Notch1信號傳導(dǎo)促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2019年

4 張雪麗;Notch1信號通路介導(dǎo)SASH1基因抑制乳腺癌的轉(zhuǎn)移[D];華北理工大學(xué);2019年

5 王一超;Notch4、DLL4和KAI1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與血管生成擬態(tài)的關(guān)系[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2019年

6 楊亞;大鼠正畸牙移動(dòng)過程中Notch1信號通路參與牙槽骨吸收改建的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2019年

7 周阿香;Notch3在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義[D];鄭州大學(xué);2019年

8 徐靜雅;丹參酮ⅡA配伍DAPT對腎纖維化過程中Notch1/Jagged1信號通路的干預(yù)作用[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

9 古麗給娜.吐爾遜;慢性房顫犬竇房結(jié)脂肪墊Notch-1表達(dá)變化[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2019年

10 敖登高娃;LncRNA HOTAIR與Notch通路在舌癌遷移侵襲變化中的相關(guān)性研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號：2836497