發(fā)布時間：2020-10-08 19:45

　　 目的:探討吡非尼酮在腫瘤相關成纖維細胞(CAFs)誘導的HT29結腸癌細胞系侵襲、遷移、增殖、上皮-間質轉化(EMT)中的作用及機制。方法:利用共培養(yǎng)小室將CAFs與HT29共培養(yǎng)后CCK-8測定HT29增殖效率;Real time-PCR和Western blot檢測HT29結腸癌細胞系E-cadherin和Vimentin轉錄及蛋白表達水平;Transwell實驗檢測HT29結腸癌細胞的遷移和侵襲能力。ELISA技術檢測CAFs細胞上清液中細胞因子的表達。結果:吡非尼酮抑制CAFs對HT29增殖促進作用(P0.05);CAFs條件培養(yǎng)基培養(yǎng)HT29后,Vimentin表達水平顯著升高(P0.05),E-cadherin顯著降低(P0.05);吡非尼酮處理CAFs的條件培養(yǎng)基對HT29細胞中兩種蛋白無明顯影響;Transwell實驗表明CAFs與HT29共培養(yǎng)后,其侵襲和遷移能力明顯增強(P0.05);ELISA結果提示CAFs分泌TGF-β1功能受吡非尼酮抑制且存在劑量關系。結論:吡非尼酮通過抑制CAFs分泌TGF-β1抑制CAFs誘導HT29結腸癌細胞系侵襲、遷移、增殖、上皮-間質轉化。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗材料
        1.1.1 材料
        1.1.2 主要試劑
    1.2 研究方法
        1.2.1 篩選藥物濃度
        1.2.2 細胞培養(yǎng)
        1.2.3 CCK8實驗
        1.2.4 Transwell實驗
            1.2.4.1 Transwell侵襲實驗:
            1.2.4.2 Transwell遷移實驗:
        1.2.5 ELISA
        1.2.6 RT-PCR及Western blot檢測HT29細胞
    1.3 統(tǒng)計學方法
2 結果
    2.1 藥物濃度篩選結果
    2.2 CCK8實驗檢測增殖作用
    2.3 Transwell實驗
        2.3.1 Transwll侵襲實驗
        2.3.2 Transwell遷移實驗
    2.4 ELISA實驗檢測PFD對CAFs分泌TGF-β1、IL-6因子的作用
    2.5 RT-PCR及Western
3 討論

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