背景肝癌是惡性程度最高的腫瘤之一,也是人類第三大致死性惡性腫瘤。盡管治療肝癌的手段不斷的進(jìn)步,然而由于肝癌的易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移肝癌的治療效果并不理想。大量的研究表明,上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)在肝癌發(fā)生和發(fā)展中起到重要的作用。ELF3是上皮轉(zhuǎn)錄因子家族中的成員之一,在多個病理生理過程中起到重要的作用,包括癌癥和免疫系統(tǒng)紊亂。最近研究表明,ELF3在癌癥細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移和侵襲過程中有重要作用。然而目前,ELF3在肝癌中是否起到促進(jìn)作用目前未可知。微小RNA(miRNA)是由20-24個核酸組成的非編碼RNA。眾多研究表明miRNA在腫瘤的進(jìn)展過程中起到重要的作用。ZEB1作為EMT中最為關(guān)鍵的分子之一,其在多個腫瘤中表現(xiàn)為抑制E-cadheim蛋白促進(jìn)EMT發(fā)展的作用。目的ELF3是ETS轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員,且在多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和侵襲中有重要的作用。然而,ELF3在肝癌中的作用卻不清楚。因此,本次研究目的主要探究ELF3在肝癌中的表達(dá)情況及其在肝癌轉(zhuǎn)移和侵襲的機制。方法用qPCR、Western Blot、免疫組化方法研究ELF3在肝癌的表達(dá)情況。研究ELF3的表達(dá)與患者臨床病理資料,分析ELF3與患者臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性。通過病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建ELF3的過表達(dá)及敲減的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株。通過CCK-8、克隆形成、Transwell細(xì)胞遷移和侵襲實驗以及裸鼠皮下成瘤和裸鼠體內(nèi)脾臟注射-肝轉(zhuǎn)移模型研究ELF3對肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲的影響。通過Western Blot及qPCR實驗檢測高表達(dá)及敲減ELF3細(xì)胞的EMT標(biāo)志物。運用CHIP及Luciferase啟動子實驗研究ELF3調(diào)控E-cadherin的機制。最后用脾臟肝轉(zhuǎn)移動物模型驗證ELF3對肝癌的轉(zhuǎn)移侵襲的作用。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)ELF3在肝癌中表達(dá)明顯升高。對106例肝癌組織進(jìn)行免疫組化分析,并結(jié)合肝癌患者的臨床病理特征我們發(fā)現(xiàn),ELF3的高表達(dá)與患者的肝癌腫瘤大小密切相關(guān)(p=0.048)。Kaplan-Meier生存分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),ELF3高表達(dá)的肝癌患者有著較差的總生存期和無瘤生存期。COX多因素分析發(fā)現(xiàn),ELF3為肝癌患者總生存期和無瘤生存期的獨立危險因素。通過對ELF3蛋白的敲減和過表達(dá),我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)過表達(dá)ELF3后,肝癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲能力增強。相反,敲減ELF3蛋白后,肝癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲能力明顯減弱。CHIP實驗及Luciferase啟動子實驗結(jié)果表明,ELF3可以直接靶向調(diào)控miR-141-3p。裸鼠體內(nèi)脾臟注射-肝轉(zhuǎn)移模型結(jié)果表明,敲減ELF3蛋白的MHCC-LM3細(xì)胞組裸鼠體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲要明顯差于對照細(xì)胞組裸鼠。結(jié)論我們第一次發(fā)現(xiàn),ELF3在肝癌組織和肝癌細(xì)胞中高表達(dá)。ELF3可以增強肝癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲的能力。ELF3通過靶向抑制miR-141-3P來促進(jìn)ZEB1的表達(dá),抑制E-cadherin的表達(dá),從而促進(jìn)肝癌的轉(zhuǎn)移和侵襲能力。ELF3有潛力成為肝癌的預(yù)后和治療靶點。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7
【部分圖文】：

邐正文結(jié)果逡逑圖１．１邋ＥＬＦ３在肝癌組織中的表達(dá)。Ａ．邋ｑＰＣＲ檢測正常肝組織和肝癌組織中ＥＬＦ３逡逑的ｍＲＮＡ水平的表達(dá)情況。Ｂ．Ｗｅｓｔｅｍ邋ｂｌｏｔ檢測正常肝組織與肝癌組織中的ＥＬＦ３逡逑中的蛋白水平的表達(dá)。Ｃ．免疫俎化染色檢測ＥＬＦ３表達(dá)，肝癌組織（Ｔ）與其癌旁逡逑組織（ＡＮＴ）中ＥＬＢ表達(dá)的典型圖片（放大１００倍標(biāo)尺為２００叫１，放大４００倍標(biāo)逡逑尺為邋５０ｐｊｎ）。Ｄ．邋Ｒｏｅｓｓｌｅｒ邋ｌｉｖｅｒ邋及邋Ｒｏｅｓｓｌｅｒ邋ｌｉｖｅｒ２邋數(shù)據(jù)中邋ＥＬＦ３邋ｍＲＮＡ邋在肝正常組織逡逑及肝癌中的表達(dá)情況。（＊，邋ｐ＜0．0５；邋＊＊，邋ｐ＜０．０１，邋＊＊＊，邋ｐ＜０．００１）逡逑為了進(jìn)一步檢測ＥＬＦ３在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)的情況，我們用Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ及逡逑ｑＰＣＲ檢測ＭＨＣＣ－ＬＭ３、Ｈｕｈ７、Ｈｅｐ３Ｂ、ＨｅｐＧ２四株肝癌細(xì)胞中的ＥＬＦ３的表徶逡逑情況。結(jié)果顯示ＭＨＣＣ－ＬＭ３中蛋白ＥＬＦ３表達(dá)最高，而Ｈｕｈ７細(xì)胞ＥＬＦ３表徶最逡逑低，且表達(dá)具有明顯差異（圖１．２）。逡逑５８－，邋一逡逑？邋＾逡逑ａｆｉ－邐＾逡逑？邐Ｏ邐＼邋Ｓｊ逡逑灥邋４．邋ＮＳ邐／邋／邋／邋＾逡逑’邐ＥＬＦ３邋｜邐？邋４２ＫＤ逡逑１邐＿＿邋丨了邋｜邐［邐１邐ＧＡＰＤＨ邐＾邐３７邋ＫＤ逡逑ｉｒ０逡逑Ｈｕｔｉ７邋ＨｅｐＧ２邋Ｈｅｐ３Ｂ邋ＭＨＣＣ－ＬＭ３逡逑圖１．２邋ＥＬＦ３在四株肝癌細(xì)胞株中的表徶情況。ＱＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢測肝癌細(xì)逡逑胞株中ＥＬＦ３的表達(dá)情況。（＊＊＊

生存分析結(jié)果顯示，ＥＬＦ３高表達(dá)的肝癌患者術(shù)后總的５年生存期要低于ＥＬＦ３低逡逑表徶的肝癌患者（ｐ＝0．0１３），同樣的，ＥＬＦ３高表達(dá)的肝癌患者術(shù)后的無瘤生存期逡逑要低于ＥＬＦ３低表達(dá)的肝癌患者（ｐ＝０．０３３）（圖２Ａ）。我們又對所有的病理分期Ｉ逡逑４３逡逑

對照細(xì)胞Ｈｕｈ７－ｃｏｎｔｒｏｌ的德定轉(zhuǎn)染株。逡逑提�。龋酰瑁罚牛蹋疲臣�(xì)胞反Ｈｕｈ７－ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞ＲＮＡ及蛋白分別行ｑＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ逡逑Ｂｌｏｔ實驗驗證。如圖２．１所示，Ｈｕｈ７－ＥＬＦ３細(xì)胞的ＥＬＦ３在ｍＲＮＡ水平及蛋白水逡逑平都明顯高于Ｈｕｈ７－ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞，ＥＬＦ３過表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建成功。逡逑在邋Ｓ１００１逡逑＿７邋備建邋｜：２：邐＾—逡逑／邋／邋Ｂ逡逑ＥＬＦ３逡逑ＧＡＰＤＨ邐３７邋ＫＤ邐邐逡逑Ｈ邋ｕｈ７－ＥＬＦ邋３邐Ｈ邋ｕｈ邋７邋－ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑圖２．１經(jīng)ｑＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢測，ＥＬＦ３過表達(dá)細(xì)胞株分別在ｍＲＮＡ和蛋白水逡逑平明顯高于對照細(xì)胞。（＊＊＊，ｐ＜０．００１）逡逑４５逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Minal Garg;;Epithelial-mesenchymal transition-activating transcription factors-multifunctional regulators in cancer[J];World Journal of Stem Cells;2013年04期

本文編號：2831386