DAP1(死亡相關(guān)蛋白1)是進(jìn)化上高度保守的蛋白,分子量為15kD,先前的研究表明,DAP1在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要的作用,并且DAP1 一度被認(rèn)為是衡量腫瘤患者預(yù)后水平的標(biāo)準(zhǔn)之一。但DAP1對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控及其分子機(jī)制尚不清楚,因此我們的目的是探究DAP1在肺癌細(xì)胞凋亡中的作用及調(diào)控的分子機(jī)制。這將為臨床上肺癌的治療提供理論依據(jù)和新的治療靶點(diǎn),并且為其他癌癥的治療提供很好的借鑒作用。首先,當(dāng)我們用doxorubicin和pemetrexed等化療藥物誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡時(shí),發(fā)現(xiàn)DAP1的蛋白水平受化療藥物誘導(dǎo),并且呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴(lài)效應(yīng)。當(dāng)我們敲低DAP1后,蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果均表明,doxorubicin和pemetrexed誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡減弱;而過(guò)表達(dá)DAP1會(huì)增強(qiáng)這兩種藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,這說(shuō)明DAP1能促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡。由于很多化療藥物可以通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,我們通過(guò)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激感受器蛋白的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)DAP1可以明顯調(diào)控EIF2AK3,當(dāng)敲低DDAP1后可以明顯下調(diào)EIF2AK3-DDIT3信號(hào)通路;過(guò)表達(dá)DDAP1后則可以顯著增強(qiáng)EIF2AK3-DDIT3信號(hào)通路,這說(shuō)明DAP1可以通過(guò)EIF2AK3促進(jìn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。為了探究DAP1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激之間是否相關(guān),我們檢測(cè)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白EIF2AK3、DDIT3以及凋亡相關(guān)蛋白TNFRSF10B、CASP8、CASP3和PARP-1,發(fā)現(xiàn)DAP1可以同時(shí)誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和細(xì)胞凋亡;過(guò)表達(dá)DAP1的同時(shí)敲低EIF2AK3,發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)DAP1對(duì)細(xì)胞凋亡無(wú)明顯效應(yīng)。以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,DAP1可以通過(guò)EIF2AK3-DDIT3誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,而DDIT3通過(guò)TNFRSF10B介導(dǎo)外源性細(xì)胞凋亡。隨后,我們通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)DAP1與SETDB1存在相互作用,并且DAP1對(duì)EIF2AK3的調(diào)控依賴(lài)于SETDB1。RT-PCR和EIF2AK3啟動(dòng)子活性分析表明,DAP1對(duì)EIF2AK3的調(diào)控主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平。綜上所述,我們提出DAP1調(diào)控肺癌細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制:即DAP1與組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SETDB1結(jié)合,促進(jìn)組蛋白H3K4三甲基化,增強(qiáng)EIF2AK3轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而通過(guò)EIF2AK3-DDIT3誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng),而DDIT3通過(guò)促進(jìn)死亡受體TNFRSF10B的轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)外源性細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R734.2
【部分圖文】：

細(xì)胞內(nèi)源和外源性凋亡信號(hào)通路模式圖

圖２邋ＵＰＲ信號(hào)通路模式圖逡逑ＥＲ邋ｓｔｒｅｓｓ介導(dǎo)的信號(hào)通路可以景多響細(xì)胞的命運(yùn)、癌癥進(jìn)展以及腫瘤抑制，逡逑如何根據(jù)這些信號(hào)通路的特點(diǎn)尋找有效的靶點(diǎn)進(jìn)行介入治療是目前生物學(xué)上比逡逑

DAPl抑制自噬

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3 辛翌}

本文編號(hào)：2829581