第一部分陽和湯對陽虛證乳腺癌的抑制作用目的:觀察陽和湯對4T1乳腺癌細(xì)胞及小鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法:1.體外實驗:制備陽和湯含藥血清,采用陽和湯含藥血清干預(yù)4T1乳腺癌細(xì)胞,繪制細(xì)胞生存曲線,觀察陽和湯對4T1乳腺癌細(xì)胞的抑制作用。2.體內(nèi)實驗:采用腺嘌呤灌胃法復(fù)制陽虛證小鼠模型,并進(jìn)行模型評價,皮下接種法復(fù)制陽虛證乳腺癌荷瘤小鼠模型,采用陽和湯及化療藥物環(huán)磷酰胺分組(空白組、陽虛組、單純荷瘤組、陽虛荷瘤組、陽和湯+單純荷瘤組、陽和湯+陽虛荷瘤組、陽和湯+CTX+陽虛荷瘤組)進(jìn)行干預(yù),干預(yù)完成后觀察各組小鼠脾重、瘤重及抑瘤率。結(jié)果:1.陽和湯含藥血清對4T1乳腺癌細(xì)胞有明顯的的抑制作用且呈時間依賴性;2.陽虛造模完成以后,小鼠出現(xiàn)蜷縮不動、畏寒肢冷、精神萎靡、大便清稀等陽虛表現(xiàn),T3、T4、ACTH值明顯下降,造模成功;3.三個治療組脾重小于模型組(P0.05),陽和湯+CTX+陽虛荷瘤組脾重小于另外兩個治療組(P0.05)。與陽虛荷瘤組比較,陽和湯+陽虛荷瘤組瘤重僅為其瘤重的1/2(P0.05),且抑瘤率為52.87%,高于陽和湯+單純荷瘤組的37.58%。結(jié)論:陽和湯對4T1乳腺癌細(xì)胞及陽虛證小鼠皮下移植瘤都表現(xiàn)出良好的抑制作用。第二部分陽和湯抗陽虛證乳腺癌的相關(guān)機制目的:探討陽和湯抗陽虛證乳腺癌的相關(guān)機制方法:1.陽和湯含藥血清干預(yù)4T1乳腺癌細(xì)胞72小時后,收集細(xì)胞上清液,ELISA檢測VEGF、PGE2;2.將70只BABL/c小鼠分為7組,每組10只,分別為空白組、陽虛組、單純荷瘤組、陽虛荷瘤組、陽和湯+單純荷瘤組、陽和湯+陽虛荷瘤組、陽和湯+CTX+陽虛荷瘤組,陽和湯及化療藥物環(huán)磷酰胺分組進(jìn)行干預(yù)后,流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾臟中MDSC、NKT細(xì)胞及T細(xì)胞亞群的含量,RT-PCR檢測脾臟中i NOS、ARG-1的表達(dá),二氫乙錠熒光探針(DHE)檢測ROS表達(dá),Western bolt檢測STAT1、p-STAT1、STAT3、p-STAT3的表達(dá);采外周血ELISA法檢測IL-6、TGF-β、IFN-γ的表達(dá)。結(jié)果:1.MDSC、NKT細(xì)胞含量各治療組均低于陽虛荷瘤組(P0.01),治療組之間比較無意義(P0.05),治療組CD3+CD4+T細(xì)胞含量提升明顯(39.75%,42.84%,39.95%),與陽虛荷瘤組比較有意義(P0.01),CD3+CD8+T細(xì)胞含量變化不明顯(P0.05)。2.IFN-γ表達(dá)治療組明顯上調(diào),陽和湯+陽虛荷瘤組、陽和湯+CTX+陽虛荷瘤組是陽虛荷瘤組的2倍(P0.01),陽和湯+陽虛荷瘤組(993.06±59.93pg/ml)高于陽和湯+單純荷瘤組(820.93±138.24pg/ml)且有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),IL-6、TGF-β治療組均低于陽虛荷瘤組(P0.05或P0.01)。3.i NOS、ROS表達(dá)陽和湯+單純荷瘤組與陽虛荷瘤組比較無意義(P0.05),ARG-1三個治療組與陽虛荷瘤組比較有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。所有治療組之間比較無意義(P0.05)。4.p-STAT1/STAT1表達(dá)三個治療組上調(diào)明顯,與陽虛荷瘤組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05或P0.01)。陽和湯+陽虛荷瘤組(0.85±0.04)高于陽和湯+單純荷瘤組(0.54±0.05),有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。p-STAT3/STAT3表達(dá)三個治療組均下調(diào),與陽虛荷瘤組比較均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。治療組之間比較無意義(P0.05)。結(jié)論:1.陽和湯含藥血清能有效抑制4T1乳腺癌細(xì)胞的增殖。2.陽和湯通過抑制MDSC的生成和激活發(fā)揮抗腫瘤作用。主要機制為下調(diào)VEGF、PGE2、IL-6、TGF-β等細(xì)胞因子的表達(dá),從而使STAT3信號通路失活。同時也能下調(diào)MDSC下游產(chǎn)物i NOS、ARG-1、ROS的表達(dá),使MDSC失去免疫抑制功能。3.陽和湯通過上調(diào)IFN-γ的表達(dá)激活STAT1,增強機體免疫應(yīng)答能力,也能通過上調(diào)CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞的表達(dá),重塑免疫功能。
【學(xué)位單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

實驗結(jié)果表明，經(jīng)陽和湯含藥血清處理后的4T1乳腺癌細(xì)胞增殖受到明顯抑制，且呈時間依賴性，與空白組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。臨床等效劑量組與2倍等效劑量組之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1.1、圖1.1。表1.1 陽和湯對4T1乳腺癌腺癌細(xì)胞的抑制率（%） (x s)組別 24h 48h 72hNS 組 —— —— ——LYH 組 27.54 2.79* 30.11 2.51* 37.75 1.18*HYH 組 24.65 2.59* 28.30 2.37* 37.37 2.22*CTX 組 39.83 3.72* 45.07 4.83* 50.04 3.76*注：與 NS 組比較，*P＜0.05圖1.1 抑制率（%）注：與 NS 組比較，*P＜0.054 小結(jié)陽和湯含藥血清對 4T1 乳腺癌細(xì)胞存在明顯的抑制作用， 且呈時間依賴性。

組內(nèi)不同時間體重對比，差異無顯著性（P＞0.05）。陽虛組造模第21d、第28d與空白對照組同期比較，低于空白對照組，且有顯著差異（P＜0.05）。結(jié)果見表1.4 及圖1.2。

圖 1.3 各組小鼠脾重（g）：1.空白組；2.單純陽虛組；3.單純荷瘤組；4.陽虛荷瘤組；5.陽和湯+單純荷瘤組；6.和湯+陽虛荷瘤組；7. 陽和湯+CTX+陽虛荷瘤組。與空白組比較，▲P＜0.05；與陽虛荷瘤比較，*P＜0.05；與陽和湯+CTX+陽虛荷瘤組比較，#P＜0.05

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本文編號：2829213