目的:本研究旨在制備抗VEGF單克隆抗體賽伐珠單抗(Sev)修飾奧沙利鉑(OXA)脂質(zhì)體,以提高奧沙利鉑(OXA)對(duì)肝細(xì)胞癌(HCC)細(xì)胞的靶向性,達(dá)到高效、低毒的抗腫瘤作用,并通過(guò)體外細(xì)胞MTT和熒光標(biāo)記脂質(zhì)體培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)該免疫脂質(zhì)體對(duì)HCC細(xì)胞株的細(xì)胞增殖抑制作用和靶向性。方法:采用薄膜分散法、逆向蒸發(fā)法和逆向蒸發(fā)結(jié)合凍融法制備免疫脂質(zhì)體,根據(jù)脂質(zhì)體包封率高低,最終選擇逆向蒸發(fā)結(jié)合凍融法制備免疫脂質(zhì)體,并考察該方法制備出的免疫脂質(zhì)體的形態(tài)、粒徑、包封率、抗體偶聯(lián)率、抗體活性、體外釋藥率等性質(zhì)。以人HCC細(xì)胞株Bel7402和HepG2為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,采用MTT實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞攝取熒光標(biāo)記脂質(zhì)體實(shí)驗(yàn)觀察OXA免疫脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞的毒性及靶向能力。結(jié)果:成功制備OXA免疫脂質(zhì)體,包封率平均為15.91%,其平均粒徑為182.9nm,平均電位為-29.2mV。電鏡下觀察該免疫脂質(zhì)體的形態(tài)為類圓球形,抗體偶聯(lián)率為43.76%,活性保持為84.38%,96h后累計(jì)釋藥率為82.34%。MTT細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該脂質(zhì)體材料對(duì)Bel7402和HepG2細(xì)胞沒(méi)有明顯的毒性,OXA免疫脂質(zhì)體對(duì)HCC細(xì)胞Bel7402和HepG2的細(xì)胞毒性強(qiáng)于普通OXA脂質(zhì)體及游離OXA。激光共聚焦顯微鏡觀察到HCC細(xì)胞Bel7402和HepG2對(duì)OXA免疫脂質(zhì)體的攝取高于普通OXA脂質(zhì)體。初步判斷該OXA免疫脂質(zhì)體體外對(duì)HCC細(xì)胞具有一定的靶向性。結(jié)論:本研究成功制備出OXA免疫脂質(zhì)體,該免疫脂質(zhì)體粒徑分布均勻,且抗體活性保持在高水平。該OXA免疫脂質(zhì)體具有體外主動(dòng)靶向HCC細(xì)胞株Bel7402和HepG2的能力,且能抑制HCC細(xì)胞生長(zhǎng),值得進(jìn)一步深入研究。
【學(xué)位單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7
【部分圖文】：

介導(dǎo) HCC 治療（圖 1-1），具體作用為被動(dòng)靶載體本身可過(guò)增強(qiáng)及滯留效應(yīng)(Enhanced Permeability and Ret利用 Sev 的主動(dòng)靶向作用，實(shí)現(xiàn)藥物在腫瘤部位的蓄積，具低全身毒副作用。我們課題組的前期研究結(jié)果，本課題擬將長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體包覆 除率、延長(zhǎng)半衰期、維持血藥濃度并具有被動(dòng)靶向性，偶聯(lián) 本身具有抗腫瘤作用，最終制成的 OXA 免疫脂質(zhì)體會(huì)具有比

2.3.2 色譜條件按“2.2.1.2”色譜條件進(jìn)行高效液相色譜分析，得到的色譜峰型良好，因此確定本實(shí)驗(yàn)所需的色譜條件如下：色譜柱為 HypersiLODS 柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為甲醇:水=5:95（V/V），流速 1.00 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng) 250nm，柱溫 30℃，進(jìn)樣量 20 L。2.3.3 專屬性的考察按“2.2.1.2”上述色譜條件進(jìn)行液相色譜分析，可知雜質(zhì)峰與主成分峰分離良好，脂質(zhì)體的輔料對(duì)圖 2-1 OXA 紫外吸收峰

色譜條件進(jìn)行高效液相色譜分析，得到的色譜峰型良好，因?yàn)?HypersiLODS 柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為甲圖 2-1 OXA 紫外吸收峰

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1 呂洋洋;賽伐珠單抗偶聯(lián)奧沙利鉑脂質(zhì)體制備及對(duì)HCC細(xì)胞株體外靶向性的研究[D];東南大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2829168