目的:觀察沉默轉(zhuǎn)錄因子FoxM1基因?qū)κ彻荀[癌ECA-109細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響,以及FoxM1基因的表達(dá)量下調(diào)后對食管鱗癌ECA-109細(xì)胞遷移能力的影響,探討FoxM1基因在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用機(jī)制。方法:FoxM1干擾載體轉(zhuǎn)染食管鱗癌ECA-109細(xì)胞,觀察各組細(xì)胞的熒光表達(dá)情況以及轉(zhuǎn)染效率,轉(zhuǎn)染48h后采用RT-PCR、Western-blot方法檢測目的基因FoxM1、上皮標(biāo)志物E-cadherin和間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin的mRNA以及蛋白表達(dá)情況,并且選擇干擾效果最強(qiáng)組進(jìn)行正式實驗。通過脂質(zhì)體lipofectamine2000介導(dǎo)FoxM1-shRNA和NC-shRNA轉(zhuǎn)染食管鱗癌ECA-109細(xì)胞,分成三組:即(未轉(zhuǎn)染的食管鱗癌ECA-109細(xì)胞正常組)、(NC-shRNA陰性對照組)、(FoxM1-shRNA),并采用RT-PCR及Western-blot檢測每組細(xì)胞FoxM1和上皮間質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá)情況。用劃痕實驗檢測FoxM1的表達(dá)量下調(diào)后對食管鱗癌ECA-109細(xì)胞的遷移能力的影響。結(jié)果:1.篩選FoxM1-shRNA對食管鱗癌ECA-109細(xì)胞的干擾效率Western-blot和RT-PCR結(jié)果顯示兩組陽性干擾載體shRNA1、shRNA2,與對照組和陰性對照組NC-shRNA比較,shRNA2的干擾效率顯著高于其他三組(p0.01),因此,選取shRNA2干擾質(zhì)粒進(jìn)行后續(xù)正式實驗。2.FoxM1-shRNA轉(zhuǎn)染食管鱗癌ECA-109細(xì)胞后FoxM1對上皮間質(zhì)標(biāo)志物E-cadherin、Vimentin表達(dá)的影響Western-blot和RT-PCR結(jié)果顯示,與對照組及空載體轉(zhuǎn)染組比較,shRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞內(nèi)FoxM1表達(dá)降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);Western-blot結(jié)果顯示,與對照組及空載體轉(zhuǎn)染組比較,shRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞內(nèi)Vimentin蛋白的表達(dá)降低,E-cadherin蛋白表達(dá)增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。3.FoxM1基因表達(dá)下調(diào)后對食管鱗癌ECA-109細(xì)胞的遷移能力的影響劃痕實驗結(jié)果顯示,24小時后對照組以及轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的陰性對照組細(xì)胞劃痕兩側(cè)的細(xì)胞向裸露區(qū)域遷移的趨勢較明顯,48小時后對照組以及轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的陰性對照組細(xì)胞裸露的中間區(qū)域基本長滿細(xì)胞。而shRNA干擾組細(xì)胞的劃痕仍明顯可見。結(jié)論:1.沉默F(xiàn)oxM1可以誘導(dǎo)食管鱗癌ECA-109細(xì)胞由間質(zhì)表型向正常上皮表型細(xì)胞轉(zhuǎn)化。2.Fox M1基因表達(dá)下調(diào)后降低了食管鱗癌ECA-109細(xì)胞的遷移能力。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：R735.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2824280