目的:1)探討核受體的表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌預(yù)后間關(guān)系。2)探索核受體在腎癌對(duì)舒尼替尼耐藥的調(diào)控作用及其相關(guān)的信號(hào)通路。方法:1)利用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中腎透明細(xì)胞癌患者臨床資料分析核受體的表達(dá)水平和腎透明細(xì)胞癌患者的臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。2)利用GEO數(shù)據(jù)庫(kù)資料中經(jīng)過(guò)舒尼替尼治療和未經(jīng)治療的透明細(xì)胞腎癌中核受體的表達(dá)差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,篩選與舒尼替尼耐藥相關(guān)的核受體,并qPCR和western blot檢測(cè)方法,在細(xì)胞系和動(dòng)物水平上進(jìn)一步篩選和驗(yàn)證對(duì)舒尼替尼耐藥相關(guān)的核受體。3)應(yīng)用以慢病毒為載體的過(guò)表達(dá)和低表達(dá)技術(shù)觀察不同表達(dá)水平的候選基因PPARα調(diào)控透明細(xì)胞腎癌對(duì)舒尼替尼耐藥的作用機(jī)制并進(jìn)一步探索與其調(diào)控作用相關(guān)的信號(hào)通路的生物學(xué)功能。結(jié)果:1)臨床病理特征中年齡,腫瘤大小,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期等因素以及AR,NR0B1,NR1D2,NR1I2,NR3C2,NR5A1,NR6A1,PPARα,THRB等九個(gè)核受體的不同表達(dá)水平的生存預(yù)后具有顯著差異性(P0.05)。2)GEO(GSE65615)數(shù)據(jù)庫(kù)核受體mRNA表達(dá)水平的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和RT-PCR和Western Blot檢測(cè)方法和免疫組化驗(yàn)證結(jié)果顯示PPARα與腎癌對(duì)舒尼替尼的耐藥相關(guān)。CCK8檢測(cè)細(xì)胞活性和半數(shù)抑制率濃度(IC50),結(jié)果顯示下調(diào)PPARα的表達(dá),抑制舒尼替尼耐藥的腎癌細(xì)胞株786-0,Caki-1和A-498體外的增殖能力、半數(shù)抑制率濃度下降以及抑制在裸鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)能力。3)RT-PCR和Western Blot結(jié)果顯示,舒尼替尼耐藥的腎癌細(xì)胞株786-0,Caki-1和A-498中過(guò)表達(dá)PPARα通過(guò)IKK的磷酸化激活NF-κB信號(hào)通路,組織標(biāo)本中驗(yàn)證了PPARα的表達(dá)與NF-κBP65呈正相關(guān)。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,上調(diào)PPARα的表達(dá)和抑制NF-κB信號(hào)通路,降低舒尼替尼耐藥的腎癌細(xì)胞株的增殖和降低藥物半抑制率濃度。提示PPARα通過(guò)NF-κB信號(hào)通路調(diào)控腎癌對(duì)舒尼替尼的耐藥作用機(jī)制。結(jié)論:本課題的研究通過(guò)分析TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中腎癌核受體基因表達(dá)的生物學(xué)信息,篩選具有臨床預(yù)后價(jià)值的核受體標(biāo)記物,年齡,腫瘤大小,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期等臨床特征以及AR,NR0B1,NR1D2,NR1I2,NR3C2,NR5A1,NR6A1,PPARα,THRB等核受體是腎透明細(xì)胞癌獨(dú)立的預(yù)后因素。體外實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),PPARα在腎透明細(xì)胞癌對(duì)舒尼替尼的耐藥中發(fā)揮著調(diào)控功能,其敲低表達(dá)可以使腎癌細(xì)胞活性下降和耐藥細(xì)胞對(duì)舒尼替的藥物敏感性提高。進(jìn)一步的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)初步闡明了PPARα可能通過(guò)NF-κB信號(hào)通路協(xié)同調(diào)控腎癌對(duì)舒尼替尼的耐藥作用機(jī)制。本研究結(jié)果加深了我們對(duì)核受體在腎透明細(xì)胞癌中的生物學(xué)功能的認(rèn)識(shí),而且很可能為今后對(duì)靶向藥物耐藥的腎癌的治療提供一個(gè)新的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.11
【部分圖文】：

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【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2823606