目的:探討高爾基體蛋白3(GOLPH3)在肝細(xì)胞癌(HCC)中的功能及作用機(jī)制,并探討GOLPH3與HCC患者臨床特征及中醫(yī)證型的相關(guān)性,以期為肝細(xì)胞癌患者提供新的治療策略。方法:1.采用免疫組織化學(xué)法、蛋白質(zhì)印跡法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)HCC臨床標(biāo)本和HCC細(xì)胞株MHCC97L、MHCC97H中GOLPH3的mRNA及蛋白的表達(dá)水平,并采用卡方檢驗(yàn)分析GOLPH3的蛋白表達(dá)水平與HCC患者臨床特征的相關(guān)性。2.采用SiRNA沉默HCC細(xì)胞株MHCC97L、MHCC97H的GOLPH3基因來研究GOLPH3的功能:通過MTT法分析細(xì)胞增殖;Annexin V-FITC/PI染色和hoechst 33342染色檢測(cè)凋亡細(xì)胞,并檢測(cè)細(xì)胞半胱天冬酶3/7活性,三者結(jié)合研究GOLPH3對(duì)HCC細(xì)胞株MHCC97L、MHCC97H凋亡的影響。3.使用慢病毒轉(zhuǎn)染的方法,構(gòu)建并篩選GOLPH3穩(wěn)定低表達(dá)的MHCC97L、MHCC97H細(xì)胞,建立GOLPH3穩(wěn)定低表達(dá)的MHCC97L、MHCC97H皮下移植瘤模型來研究GOLPH3在體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)中的作用。4.采用免疫印跡和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)GOLHP3在mTOR信號(hào)通路中的作用。5.采用mTOR信號(hào)通路的激活劑MHY1485驗(yàn)證GOLHP3在mTOR信號(hào)通路中的作用。6.運(yùn)用Fisher精確檢驗(yàn)分析HCC中醫(yī)證型與GOLPH3表達(dá)及患者臨床特征的相關(guān)性。結(jié)果:1.HCC臨床標(biāo)本和HCC細(xì)胞株MHCC97L、MHCC97H中GOLPH3 mRNA和蛋白表達(dá)水平與正常對(duì)照組相比顯著上調(diào)(P0.05)。卡方檢驗(yàn)結(jié)果表明在HCC患者中GOLPH3的表達(dá)水平與血清AFP水平顯著相關(guān)(P=0.006);GOLPH3的表達(dá)水平與性別、年齡、HBsAg、腫瘤大小、血管侵襲和肝硬化之間沒有明顯的相關(guān)性(P0.05)。2.SiRNA沉默MHCC97L、MHCC97H細(xì)胞中GOLPH3的表達(dá)均能使細(xì)胞增殖受到抑制并且促進(jìn)細(xì)胞凋亡。3.慢病毒敲低GOLPH3表達(dá)導(dǎo)致MHCC97L、MHCC97H皮下移植瘤生長(zhǎng)受限。4.HCC臨床標(biāo)本癌組織中mTOR信號(hào)通路相關(guān)的關(guān)鍵蛋白mTOR,AKT和S6K1(p70核糖體蛋白S6激酶)磷酸化水平明顯高于正常肝組織(P0.05)。體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,抑制MHCC97L、MHCC97H中GOLPH3的mRNA和蛋白的表達(dá)水平后,mTOR、AKT和S6K1蛋白的磷酸化水平與正常對(duì)照組相比顯著降低(P0.05)。5.mTOR激活劑MHY1485可以部分抵消因GOLPH3沉默所引起的MHCC97L、MHCC97H細(xì)胞的凋亡。6.Fisher精確檢驗(yàn)分析結(jié)果表明HCC中醫(yī)證型與HCC臨床標(biāo)本中GOLPH3蛋白表達(dá)水平無明顯的相關(guān)性(P0.05),與HCC患者臨床特征之間亦無明顯的相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論:本研究表明,GOLPH3可能通過激活mTOR信號(hào)通路促進(jìn)肝癌的發(fā)生,GOLPH3可能是一種潛在的HCC生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn),為以GOLPH3為HCC生物標(biāo)志物的診療策略及以GOLPH3為治療靶點(diǎn)的藥物開發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7
【部分圖文】：

解曲線及擴(kuò)增曲線，運(yùn)用 2-ΔΔCT 進(jìn)行。結(jié)果表示為平均值 標(biāo)準(zhǔn)偏差GOLPH3 蛋白表達(dá)與患者臨床變量之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果肝癌患者中的表達(dá)情況研究表達(dá)是否與HCC相關(guān)，我們首先對(duì)60例QPCR 結(jié)果顯示，HCC 組織中 GOLPH3 m有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P <0.01），結(jié)床標(biāo)本中 GOLPH3 mRNA 相對(duì)表達(dá)量（Normal 1.19 0.72 織組；Cancer：HCC 組織組。與對(duì)照組相

（10*40 倍）圖 1-2 HCC 臨床標(biāo)本中 GOLPH3 蛋白表達(dá)量二、GOLPH3 的表達(dá)與患者臨床特征的相關(guān)性分析通過前面的研究發(fā)現(xiàn)在大多數(shù) HCC 患者中 GOLPH3 過度表達(dá)，那么 GOLPH3 的過

結(jié)果表示為平均值 標(biāo)準(zhǔn)偏差（驗(yàn)分析 GOLPH3 蛋白表達(dá)與患者臨床變量之 <0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果胞株中的表達(dá)情況研究們發(fā)現(xiàn) GOLPH3 在大多數(shù)肝細(xì)胞性肝癌患者中肝癌中的作用，我們首先驗(yàn)證了GOLPH3在肝、MHCC97H 中及正常肝組織中的表達(dá)情況。 Bel-7402、QGY-7703、MHCC97L、MHCC97H 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P <0.05）。結(jié)果詳見癌細(xì)胞株中 GOLPH3 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量（ l Bel-7402 QGY-7703 MHCC90.25 1.84 0.11**2.88 0.49**2.11 P <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：2822874