研究背景和目的:放射治療(放療)是肺癌局部治療的有效手段,但放療抵抗常見,直接影響臨床療效。有文獻(xiàn)報道,long non-coding RNAs(Lnc RNAs)在放療抵抗中起到重要作用。本研究主要探討Lnc RNAs在肺癌放療抵抗中的潛在意義。方法:1、構(gòu)建放療抵抗肺癌亞系H460R、A549R。應(yīng)用梯度增加X射線劑量法對H460、A549細(xì)胞反復(fù)照射,歷時6個月,共照射10次,劑量分別為前3次4Gy,中4次6Gy,后3次8Gy,每次照射間隔為1-2周,累積劑量60Gy。照射完成后抵抗株命名為H460R、A549R。2、利用CCK-8法驗(yàn)證細(xì)胞的放療抵抗性。將H460、H460R與A549、A549R細(xì)胞鋪96孔板,培養(yǎng)12小時后,分別給予0Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy,12Gy,16Gy X線照射,培養(yǎng)48h后,加入CCK8檢測。3、放療對細(xì)胞表型的影響。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期特征。利用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證細(xì)胞的遷移能力。4、篩選出與放療抵抗相關(guān)的Lnc RNAs。應(yīng)用高通量測序,篩選出H460與H460R差異表達(dá)的Lnc RNA,再選出其中一個放療抵抗Lnc RNA MIR4453,做進(jìn)一步深入研究。5、MIR4453表達(dá)下調(diào)后對H460R細(xì)胞表型的影響。敲低H460R細(xì)胞的Lnc RNA MIR4453,檢測對H460R細(xì)胞放療敏感性、周期、凋亡及遷移能力的影響。結(jié)果:放療抵抗細(xì)胞株H460R、A549R與親本細(xì)胞株H460、A549相比,顯示出明顯的放射抵抗性。分別給予2Gy,4Gy,6Gy,8Gy,12Gy,16Gy X線照射,抵抗株較親本均具有更高的存活率。流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),細(xì)胞周期發(fā)生了相應(yīng)變化,H460R、A549R細(xì)胞的G0/G1期比例較H460、A549細(xì)胞減少,而S期、G2/M期比例明顯增加。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)顯示,放療增強(qiáng)H460R細(xì)胞的遷移能力。高通量測序檢測H460與H460R細(xì)胞,共有71個差異表達(dá)的Lnc RNA(上調(diào)36個,下調(diào)35個,p0.05)。選出其中一個放療抵抗Lnc RNA MIR4453,下調(diào)MIR4453后,能增加H460R細(xì)胞的放療敏感性,降低細(xì)胞的遷移能力,并對細(xì)胞周期、凋亡有一定影響。結(jié)論:1、梯度增加X射線劑量法,能成功構(gòu)建放療抵抗肺癌細(xì)胞株。2、放療抵抗肺癌細(xì)胞株的生物學(xué)特征有顯著改變。表現(xiàn)為細(xì)胞周期G0/G1期比例減少,S期、G2/M期比例增加,及遷移能力提高。再次給予不同劑量的X線照射,放療抵抗肺癌細(xì)胞株較親本細(xì)胞株生存率高。3、與親本細(xì)胞株H460比較,放療抵抗肺癌細(xì)胞株H460R的Lnc RNAs有顯著改變。4、Lnc RNA MIR4453是肺癌細(xì)胞放療抵抗相關(guān)Lnc RNA之一。其表達(dá)水平的改變,會影響肺癌細(xì)胞的放療敏感性及遷移能力。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R734.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周春燕;黃可可;任妹;劉劍榮;夏洪嬌;;探討LncRNA遺傳多態(tài)性及其與結(jié)直腸癌風(fēng)險和預(yù)后的相關(guān)性[J];中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2019年32期

2 楊湛;陳艾;胡良才;;LncRNA與新生兒缺氧缺血性腦病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];中國婦幼健康研究;2019年11期

3 楊思琦;姚頤;宋啟斌;;非小細(xì)胞肺癌中LncRNA表達(dá)的研究現(xiàn)狀[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報;2019年32期

4 桑園園;楊承健;韓志君;;LncRNA與心血管疾病的研究進(jìn)展[J];臨床與病理雜志;2016年10期

5 馬驤;歐陽堯明;景在平;周建;;lncRNA在血管疾病中的作用機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國普通外科雜志;2016年12期

6 劉慧;王德瑩;孫海珠;邱曉紅;;子宮內(nèi)膜異位癥中LncRNA的研究進(jìn)展[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2017年01期

7 陳偉;戴偉鋼;張常華;何裕隆;;LncRNA在胃癌中的表達(dá)及其預(yù)后價值[J];消化腫瘤雜志(電子版);2016年04期

8 顏晗;譚丹;謝攀;劉昭前;李曦;;多種lncRNA可影響黑色素瘤的發(fā)生和發(fā)展[J];中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2017年02期

9 汪翔;吳強(qiáng);李慶中;李維平;;LncRNA在惡性腦膠質(zhì)瘤中的研究進(jìn)展[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2017年01期

10 王祖森;沈h牖

本文編號：2822727