GSTM2在胰腺癌化療耐藥中的機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間：2020-09-18 20:26

　　谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GSTs)不僅有細(xì)胞保護(hù)作用,而且參與抗癌藥物耐藥性的產(chǎn)生。但是,GST同工酶在胰腺癌化療耐藥中的作用仍不清楚。本研究將檢測(cè)GSTM2基因在經(jīng)吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞株及接受新輔助化療的胰腺癌患者癌組織中的表達(dá)。并通過siRNA及shRNA沉默GSTM2基因,分別轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞及注入裸鼠胰腺構(gòu)建原位移植瘤模型后用吉西他濱處理,從體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)兩個(gè)層面觀察在胰腺癌中沉默GSTM2對(duì)吉西他濱敏感性的影響。最后分析GSTM2在胰腺癌患者中的表達(dá)及與臨床預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果表明吉西他濱處理可以增加胰腺癌細(xì)胞株及胰腺癌組織中GSTM2的表達(dá)。沉默GSTM2可使經(jīng)吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞的凋亡增加、活力降低,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明在裸鼠胰腺原位移植瘤模型中利用shRNA誘導(dǎo)GSTM2沉默,能增強(qiáng)吉西他濱化療的藥物敏感性。研究還發(fā)現(xiàn),GSTM2在胰腺癌組織中的表達(dá)低于正常胰腺組織,而GSTM2的高表達(dá)則與胰腺癌患者生存率高、預(yù)后好呈顯著相關(guān)。綜上所述,GSTM2能使接受吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性并存活,故吉西他濱也能增加胰腺癌細(xì)胞株中GSTM2的表達(dá),GSTM2在胰腺癌中的沉默有益于增強(qiáng)吉西他濱的化療效果,胰腺癌患者中GSTM2的高表達(dá)與總體生存期顯著相關(guān)。因此,GSTM2有潛力成為優(yōu)化胰腺癌化療方案選擇和預(yù)測(cè)胰腺癌預(yù)后的生物標(biāo)志物。一、GSTM2在經(jīng)吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞株及接受新輔助化療的胰腺癌患者癌組織中的表達(dá)研究目的:分析吉西他濱處理胰腺癌細(xì)胞及癌組織對(duì)GSTM2表達(dá)的影響。材料和方法:利用qRT-PCR和western blot檢測(cè)吉西他濱處理前后GSTM2在胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況。收集接受吉西他濱新輔助化療后手術(shù)和僅接受外科手術(shù)的胰腺癌患者的癌組織標(biāo)本,進(jìn)行免疫組化染色,比較兩組中GSTM2表達(dá)水平的差異。結(jié)果:GSTM2在經(jīng)吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)水平明顯高于未經(jīng)吉西他濱處理的對(duì)照組;在接受吉西他濱化療的胰腺癌患者組織中的表達(dá)水平明顯高于僅接受外科手術(shù)的患者。結(jié)論:吉西他濱能使胰腺癌細(xì)胞和胰腺癌組織中的GSTM2表達(dá)水平上升,初步證實(shí)GSTM2參與胰腺癌吉西他濱化療耐藥性產(chǎn)生。二、沉默GSTM2對(duì)胰腺癌化療敏感性影響的體外實(shí)驗(yàn)研究研究目的:檢測(cè)siGSTM2對(duì)吉西他濱處理胰腺癌細(xì)胞株的化療敏感性的影響。材料和方法:運(yùn)用siRNA技術(shù)沉默BXPC-3、Panc-1、L3.6pl和MPanc96四種胰腺癌細(xì)胞株中的GSTM2基因,利用qRT-PCR和western blot檢測(cè)沉默效果。再用吉西他濱處理上述細(xì)胞株,通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)癌細(xì)胞的凋亡水平,應(yīng)用MTT分析法檢測(cè)細(xì)胞活力。結(jié)果:qRT-PCR和western blot檢測(cè)結(jié)果示siRNA轉(zhuǎn)染4種胰腺癌細(xì)胞株成功,沉默GSTM2效率高,均在60%以上。經(jīng)吉西他濱處理后,siGSTM2組與siControl組相比癌細(xì)胞凋亡率明顯更高、活力顯著降低。結(jié)論:siGSTM2能在胰腺癌細(xì)胞株中高效沉默GSTM2基因。沉默GSTM2能增強(qiáng)胰腺癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱的敏感性。三、沉默GSTM2對(duì)胰腺癌化療敏感性影響的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究研究目的:檢測(cè)shGSTM2對(duì)裸鼠胰腺原位移植瘤行吉西他濱化療敏感性的影響。材料和方法:用shGSTM2對(duì)胰腺癌細(xì)胞株Mpanc96進(jìn)行轉(zhuǎn)染,行qRT-PCR和western blot檢測(cè)評(píng)估沉默效果。將證實(shí)已被shRNA成功轉(zhuǎn)染的Mpanc96細(xì)胞株原位注入裸鼠胰腺,構(gòu)建裸鼠胰腺原位轉(zhuǎn)移瘤模型。用IVIS成像系統(tǒng)予以生物熒光成像明確成瘤效果。用吉西他濱處理胰腺癌原位瘤后,用Living Image軟件程序進(jìn)行定量分析瘤體體積變化。結(jié)果:shRNA轉(zhuǎn)染Mpanc96成功且沉默GSTM2效果佳。生物熒光成像可見裸鼠胰腺位置有熒光信號(hào),移植瘤成瘤,建模成功。shGSTM2+吉西他濱組裸鼠瘤體體積最小。結(jié)論:沉默GSTM2能在體內(nèi)增強(qiáng)胰腺癌吉西他濱化療的敏感性。四、GSTM2在胰腺癌患者中的表達(dá)與臨床預(yù)后相關(guān)性的研究研究目的:分析GSTM2在胰腺癌患者中的表達(dá)及與臨床預(yù)后的相關(guān)性。材料和方法:收集于我院確診胰腺癌的50例手術(shù)患者的癌組織標(biāo)本,以癌旁組織及正常人的胰腺組織樣本作為對(duì)照,檢測(cè)GSTM2的mRNA表達(dá)水平的差異。根據(jù)GSTM2的平均蛋白表達(dá)量將胰腺癌樣本分為GSTM2低表達(dá)組和GSTM2高表達(dá)組,分析兩組生存期的差異。結(jié)果:GSTM2在胰腺癌患者胰腺組織樣本中的表達(dá)顯著低于癌旁組織及正常人的胰腺組織樣本。GSTM2低表達(dá)組的胰腺癌患者較高表達(dá)組患者的總體生存率低,預(yù)后差。結(jié)論:GSTM2在正常人中的表達(dá)高于胰腺癌患者,且GSTM2高表達(dá)與胰腺癌患者生存率高、預(yù)后好呈顯著相關(guān)�？偨Y(jié)上述研究,可得出結(jié)論如下:1、吉西他濱可以增加胰腺癌中GSTM2的表達(dá)。2、沉默GSTM2可使經(jīng)吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞凋亡增加、活力降低。3、沉默GSTM2能使接受吉西他濱化療的裸鼠胰腺原位移植瘤體積縮小,在體內(nèi)增強(qiáng)吉西他濱化療的敏感性。4、GSTM2在正常人中的表達(dá)高于胰腺癌患者,且GSTM2高表達(dá)與胰腺癌患者生存率高、預(yù)后好呈顯著相關(guān)。5、GSTM2有潛力作為生物標(biāo)志物篩選對(duì)吉西他濱高敏感的胰腺癌患病人群行精準(zhǔn)治療,同時(shí)預(yù)測(cè)胰腺癌的預(yù)后。
【學(xué)位單位】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.9
【部分圖文】：

吉西他濱,表達(dá)水平

（一）吉西他濱處理前后GSTM2在胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況1、qRT-PCR 結(jié)果如圖1-1所示，在經(jīng)5μmol/L吉西他濱處理過的L3.6pl, Panc-1, MPanc96, BXPC-3,SU86.86 和 Hs766T 胰腺癌細(xì)胞株中，GSTM2 的 mRNA 表達(dá)水平顯著高于未經(jīng)吉西他濱處理的對(duì)照組（“+”代表經(jīng)吉西他濱處理，“－”代表未經(jīng)吉西他濱處理，#P < 0.05，*P < 0.01）。2、Western blot 結(jié)果為進(jìn)一步明確 GSTM2 在蛋白質(zhì)水平的表達(dá)結(jié)果，進(jìn)行了免疫印跡檢測(cè)。結(jié)果如圖 1-2 條帶所示，經(jīng)吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞株組 GSTM2 的蛋白表達(dá)水平高于未經(jīng)處理組（“+”代表經(jīng)吉西他濱處理，“－”代表未經(jīng)吉西他濱處理）。綜合上述結(jié)果

吉西他濱,碩士學(xué)位論文,表達(dá)水平