研究背景和目的：結(jié)直腸癌(colorectal cancer)是我國最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,在西方國家發(fā)病率和死亡率居腫瘤的第三位。近幾年,我國的結(jié)直腸癌的發(fā)病率呈明顯上升趨勢。結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展是多因素、多步驟、多基因參與的復(fù)雜過程,發(fā)病早期,經(jīng)過手術(shù)治療90%的病人可被治愈,然而臨床上約40%-50%的結(jié)直腸癌患者在確診時已出現(xiàn)了微轉(zhuǎn)移。結(jié)直腸癌的局部轉(zhuǎn)移一般早于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,約60%-80%的患者在術(shù)后2年內(nèi)出現(xiàn)局部轉(zhuǎn)移,轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的重要原因。結(jié)直腸癌嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和壽命,同時也給患者和社會帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前,盡管對其已有了大量的研究與報道,但是迄今為止,結(jié)直腸癌的形成及轉(zhuǎn)移的分子基礎(chǔ)和機制尚不完全清楚。結(jié)直腸癌的發(fā)生是在多種致瘤因素的作用下,腸粘膜上皮細(xì)胞在基因水平失去了對其生長的正常調(diào)控,導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂,腸粘膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)無限增殖,最終導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移是一個多步驟、多階段、多基因參與的復(fù)雜過程,包括癌細(xì)胞從腫瘤的原發(fā)部位逃脫,進(jìn)入周圍的基質(zhì),進(jìn)而進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng),粘附在內(nèi)皮細(xì)胞壁的腫瘤細(xì)胞向血管外遷移,在遠(yuǎn)處浸潤、血管增生最終形成新的轉(zhuǎn)移灶。該過程伴有多個基因的突變,其中包括眾多癌基因的激活。目前已報道有數(shù)百種基因參與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移過程,而且數(shù)目仍在繼續(xù)增加。鑒于此,深入研究結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展的分子機制,在眾多的因素中尋找有效、敏感的、特異的結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移分子標(biāo)志物,從而對結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移進(jìn)行預(yù)警、診斷、干預(yù)以及預(yù)后判斷具有重要的臨床價值和社會效益。LIM激酶1(LIM Kinase 1,LIMK-1)基因是我們前期通過表達(dá)譜芯片篩選出來的一個在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中表達(dá)上調(diào)的基因。LIMK-1基因位于人類染色體7q11.23,含有39499個堿基,具有16個外顯子,該基因產(chǎn)生信使mRNA,可編碼全長LIMK-1蛋白。LIMK-1公認(rèn)的作用是磷酸化ADF/cofilin的第3位絲氨酸(Ser3)而使其失活,繼而抑制F-actin形成G-acting,抑制Cofilin的引起的肌動蛋白解聚作用,參與肌動蛋白細(xì)胞骨架的重組,激動蛋白的聚合可形成偽足結(jié)構(gòu),從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的運動和遷移,驅(qū)動腫瘤細(xì)胞遷移。近年來研究發(fā)現(xiàn),LIMK-1蛋白不但在細(xì)胞骨架重組調(diào)控方面起著重要作用,還能夠介導(dǎo)膜結(jié)構(gòu)中的肌動蛋白動態(tài)組裝和拆卸,如板狀偽足和絲狀偽足的形成,被認(rèn)為是細(xì)胞運動的基礎(chǔ),引起細(xì)胞的遷移和入侵。研究報道LIMK-1在乳腺癌和前列腺癌等多種惡性腫瘤中高表達(dá),并和腫瘤發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。然而,LIMK-1在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及分子機制亦知之甚少。本課題擬檢測LIMK-1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)情況,分析其表達(dá)與相關(guān)臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系;通過體內(nèi)外實驗,研究LIMK-1在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中的作用和相關(guān)的分子機制。方法：1.組織基因芯片分析LIMK-1為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌中的差異表達(dá)基因；2.免疫組織化學(xué)(IHC)、免疫印跡(western blot)和免疫熒光(immunofluorescence)檢測結(jié)直腸癌石蠟樣本和新鮮組織樣本中LIMK-1的表達(dá),并分析LIMK-1的表達(dá)定位與腫瘤分期、轉(zhuǎn)移和臨床預(yù)后等相關(guān)臨床病理參數(shù)的關(guān)系；3.引入核定位、核輸出信號,構(gòu)建LIMK-1胞漿、胞核亞細(xì)胞定位表達(dá)載體,合成siRNA干擾LIMK-1的表達(dá),通過瞬時轉(zhuǎn)染結(jié)直腸癌細(xì)胞株,在體外利用CCK8、transwell、劃痕實驗等分別檢測瞬時過表達(dá)及干擾LIMK-1對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖及遷移能力的影響；4.建立LIMK-1胞漿、胞核亞細(xì)胞定位穩(wěn)定過表達(dá)的結(jié)直腸癌細(xì)胞株,在體外通過CCK8、transwell實驗檢測細(xì)胞的增殖及遷移能力；在體內(nèi)通過裸鼠皮下成瘤實驗檢測細(xì)胞的生長能力,裸鼠尾靜脈注射實驗檢測細(xì)胞的肺定植能力；5.利用western blot檢測LIMK-1瞬時過表達(dá)后信號通路的激活情況、EMT標(biāo)志物表達(dá)的變化；6.利用帶HA抗體的Agroase篩選LIMK1相互作用的蛋白,質(zhì)譜鑒定差異條帶,利用免疫共沉淀技術(shù)(Co-immunoprecipitation)及免疫熒光驗證候選蛋白與LIMK-1的相互作用。結(jié)果：1.LIMK-1E結(jié)直腸癌組織及細(xì)胞中表達(dá)水平的檢測1)基因芯片分析淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌LIMK-1的表達(dá)我們分別對八例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌樣本進(jìn)行基因芯片檢測,分析芯片結(jié)果從中選取了結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中表達(dá)具有2倍差異(p0.05)的LIMK-1作為后續(xù)候選基因。查閱文獻(xiàn),LIMK-1在結(jié)直腸癌中未見報道。2) 結(jié)直腸癌組織中LIMK-1的表達(dá)IHC實驗表明LIMK-1陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中,正常結(jié)直腸組織中LIMK-1蛋白表達(dá)水平低于相配對的腫瘤組織,LIMK-1蛋白在結(jié)直腸癌組織細(xì)胞漿過表達(dá)率17.7%(27/152)高于正常結(jié)直腸組織細(xì)胞漿過表達(dá)率0%(0/78)(p=0.000)；結(jié)直腸癌組織細(xì)胞核過表達(dá)率57.9%(88/152)高于正常結(jié)直腸組織細(xì)胞核過表達(dá)率17.9%(14/78) (p=0.000);western blot實驗結(jié)果也顯示正常結(jié)直腸組織中的LIMK-1蛋白表達(dá)水平低于相配對的腫瘤組織(p=0.0151)；組織免疫熒光結(jié)果顯示LIMK-1蛋白在正常組織中的表達(dá)水平較低,主要表達(dá)于組織的細(xì)胞漿;在癌組織中表達(dá)水平較高,主要表達(dá)于細(xì)胞漿與細(xì)胞核中。3)結(jié)直腸癌細(xì)胞系中LIMK-1在的表達(dá)western blot結(jié)果顯示人結(jié)直腸癌細(xì)胞株中LIMK-1蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶來源的LOVO、SW620及肝轉(zhuǎn)移亞系M5中高表達(dá),在轉(zhuǎn)移潛能相對低的HCT116、 LS174T、SW480和HT29細(xì)胞系中表達(dá)相對較低；免疫熒光結(jié)果顯示,在轉(zhuǎn)移潛能相對低的HCT116、LS174T、SW480和HT29細(xì)胞系中表達(dá)相對較低,主要定位于細(xì)胞漿,在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶來源的LOVO、SW620細(xì)胞系中表達(dá)相對較高,陽性定位于細(xì)胞漿及細(xì)胞核。4) LIMK-1的表達(dá)和臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系LIMK-1的表達(dá)水平與年齡組、性別腫瘤大小和腫瘤分化沒有顯著差異(P0.05);LIMK-1的表達(dá)與結(jié)直腸癌TNM分期相關(guān),其中隨著結(jié)直腸癌細(xì)胞浸潤深度(T)增加LIMK-1的表達(dá)無顯著差異(P0.05),但隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N)發(fā)生,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(N1+N2)胞漿內(nèi)LIMK-1過表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(NO)胞漿內(nèi)過表達(dá)率(P=0.007),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(N1+N2)胞核內(nèi)LIMK-1過表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(NO組)胞核內(nèi)過表達(dá)率(P=0.000),并且隨著遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(M)發(fā)生,遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組(M1)胞漿內(nèi)LIMK-1過表達(dá)率高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組(M0)胞漿內(nèi)過表達(dá)率(P=0.029),遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組(M1組)胞核內(nèi)LIMK-1過表達(dá)率高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組(M0)胞核內(nèi)過表達(dá)率(P0.05)；復(fù)發(fā)組LIMK-1胞漿過表達(dá)率高于未復(fù)發(fā)組胞漿內(nèi)過表達(dá)率(P=0.049),復(fù)發(fā)組LIMK-1胞核過表達(dá)率高于未復(fù)發(fā)組胞核內(nèi)過表達(dá)率(P=0.000)。5) LIMK-1的表達(dá)水平與患者臨床預(yù)后的相關(guān)分析Kaplan-Meier法生存分析結(jié)果顯示,LIMK-1胞漿、胞核內(nèi)過表達(dá)的結(jié)直腸癌患者總體生存率顯著低于低表達(dá)組,統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異(Log-Rank,P0.05); LIMK-1胞漿、胞核內(nèi)過表達(dá)的T3+T4和NO分期結(jié)直腸癌患者的總體生存率顯著低于低表達(dá)組,統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異(Log-Rank,P0.05)。6)影響CRC患者預(yù)后的單因素與多因素分析單因素分析提示LIMK-1胞漿、胞核過表達(dá)與結(jié)直腸癌預(yù)后的相關(guān),然而,目前逐步回歸分析的研究結(jié)果表明,LIMK-1的胞漿、胞核過表達(dá)并不能作為預(yù)測患者不良預(yù)后的獨立指標(biāo)(p0.05)。2.LIMK-1的不同亞細(xì)胞定位對結(jié)直腸癌生物學(xué)特性的影響1)LIMK-1瞬時過表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖和侵襲的影響① LIMK-1瞬時過表達(dá)效果驗證我們引入核定位、核輸出信號,合成構(gòu)建了LIMK-1胞漿、胞核亞細(xì)胞定位表達(dá)載體(HA-NLS-LIMK1、HA-NES-LIMK-1、HA-LIMK1)及空白對照組載體(HA),瞬時轉(zhuǎn)染內(nèi)源性低表達(dá)LIMK-1的SW480、HCT116細(xì)胞,western blot檢測HA-LIMK1融合蛋白表達(dá)。結(jié)果表明轉(zhuǎn)染HA-LIMK-1、 HA-NES-LIMK-1、HA-NLS-LIMK-1細(xì)胞能表達(dá)HA-LIMK1融合蛋白。②LIMK-1瞬時過表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖能力的影響CCK8實驗結(jié)果顯示,在SW480和HCT116細(xì)胞中,瞬時過表達(dá)LIMK-1的細(xì)胞(HA-LIMK1、HA-NLS-LIMK1、HA-NES-LIMKl)與對照組(HA)相比的生長速度顯著上升,組別和時間存在交互效應(yīng),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(SW480, F=33.025, p0.001; HCT116, F=55.276, p0.001)。結(jié)果表明,LIMK-1的瞬時過表達(dá)在體外能夠促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖。③ LIMK-1瞬時過表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移能力的影響Transwell細(xì)胞遷移實驗結(jié)果顯示,在SW480和HCT116細(xì)胞中,瞬時過表達(dá)LIMK-1的細(xì)胞株(HA-LIMK1、HA-NLS-LIMK1、HA-NES-LIMKl)與對照組(HA)相比遷移細(xì)胞的數(shù)量明顯增多(P=0.000)；劃痕實驗結(jié)果顯示,瞬時過表達(dá)LIMK-1的細(xì)胞株(HA-LIMK1、HA-NLS-LIMK1、HA-NES-LIMK1)與對照組(HA)相比遷移率明顯增加(P=0.000)。上述實驗結(jié)果表明,LIMK-1的過表達(dá)在體外能夠增強結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲遷移能力。2) LIMK-1瞬時沉默對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖和侵襲的影響①LIMK-1瞬時沉默效率驗證將陰性對照末端用帶綠色熒光的熒光標(biāo)記物進(jìn)行轉(zhuǎn)染效率評價結(jié)果顯示：siRNA oligo的轉(zhuǎn)染效率可達(dá)90%,具有較高的轉(zhuǎn)染效率,便于達(dá)到較好的基因沉默效果；將siRNA-377,siRNA-391,siRNA-1782片段分別轉(zhuǎn)染內(nèi)源性高表達(dá)LIMK-1的SW620細(xì)胞,western blot結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染siRNA-377,siRNA-391兩個干擾片段的細(xì)胞LIMK-1蛋白的表達(dá)水平明顯下降,表明該兩個干擾片段可以成功敲低LIMK-1的表達(dá)。② LIMK-1瞬時沉默對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖能力的影響CCK8實驗結(jié)果顯示：在SW620細(xì)胞中,LIMK-1干擾組(siRNA-377、 siRNA-391)的生長速度顯著慢于對照組(NC),組別與時間存在交互效應(yīng),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=22.827,p0.001)。結(jié)果表明,LIMK-1的沉默在體外能夠抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖。③ LIMK-1瞬時沉默對結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移能力的影響Transwell細(xì)胞遷移實驗結(jié)果顯示：在SW620細(xì)胞中,LIMK-1瞬時干擾組(siRNA-377、siRNA-391)遷移細(xì)胞的數(shù)量顯著少于對照組(NC)(P=0.001)。結(jié)果表明,LIMK-1的沉默在體外能夠抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移。3) LIMK-1穩(wěn)定過表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖和侵襲的影響①穩(wěn)定過表達(dá)LIMK-1細(xì)胞株SW480的構(gòu)建與鑒定將HA空載體和HA-LIMK1、HA-NLS-LIMK1、HA-NES-LIMK1重組表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞,G418加壓篩選挑取抗性單克隆擴(kuò)大培養(yǎng),western blot檢測結(jié)果表明已成功構(gòu)建LIMK-1穩(wěn)定過表達(dá)細(xì)胞,分別命名為SW480/HA、 SW480/HA-LIMK1、SW480/HA-NLS-LIMK1、SW480/HA-NES-LIMK1;免疫熒光檢測結(jié)果顯示SW480/HA-LIMK1的外源性LIMK-1定位于細(xì)胞漿與細(xì)胞核內(nèi),SW480/HA-NLS-LIMK1的外源性LIMK1定位于細(xì)胞核內(nèi),SW480/HA-NES-LIMK1的外源性LIMK-1定位于細(xì)胞漿內(nèi),免疫熒光實驗結(jié)果表明LIMK-1穩(wěn)定過表達(dá)的細(xì)胞株構(gòu)建成功,NLS核定位信號能夠?qū)IMK-1定位于細(xì)胞核,NES核輸出信號能夠?qū)IMK-1定位于細(xì)胞漿中。② LIMK-1穩(wěn)定過表達(dá)體外實驗CCK8實驗結(jié)果顯示,與對照組(SW480/HA)相比穩(wěn)定過表達(dá)LIMK-1的細(xì)胞株(SW480/HA-LIMK1、SW480/HA-NLS-LIMK1、 SW480/HA-NES-LIMK1)生長速度顯著上升,組別和時間存在交互效應(yīng),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=47.904,P0.001),實驗結(jié)果表明LIMK-1在胞漿、胞核亞細(xì)胞定位穩(wěn)定過表達(dá)在體外均能夠促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖；Transwell細(xì)胞遷移實驗結(jié)果顯示,穩(wěn)定過表達(dá)LIMK-1的細(xì)胞株(SW480/HA-LIMK1、 SW480/HA-NLS-LIMK1、SW480/HA-NES-LIMK1)與對照組(SW480/HA)相比遷移細(xì)胞的數(shù)量明顯增多(P=0.000),實驗結(jié)果表明LIMK-1在胞漿、胞核亞細(xì)胞定位穩(wěn)定過表達(dá)在體外均能夠促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移。③ LIMK-1穩(wěn)定過表達(dá)體內(nèi)實驗裸鼠皮下成瘤實驗結(jié)果顯示,與對照組(SW480/HA)相比穩(wěn)定過表達(dá)LIMK-1的細(xì)胞株(SW480/HA-LIMK1、SW480/HA-NLS-LIMK1、 SW480/HA-NES-LIMK1)腫瘤生長速度較快,腫瘤重量較重(P=0.005),體積較大(P=0.017),同時, Ki67的陽性率(80.97%、74.08%、80.61%)顯著高于對照組SW480/HA (39.54%) (p=0.000),皮下成瘤實驗表明胞漿、胞核亞細(xì)胞定位穩(wěn)定過表達(dá)LIMK-1均能促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞體內(nèi)生長和增殖；裸鼠尾靜脈注射實驗結(jié)果表明,穩(wěn)定過表達(dá)LIMK-1的細(xì)胞株(SW480/HA-LIMK1, SW480/HA-NLS-LIMK1、SW480/HA-NES-LIMK1)與對照組(SW480/HA)相比腫瘤細(xì)胞肺定植能力明顯增強,肺臟腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目明顯增多(p=0.009),尾靜脈注射實驗表明胞漿、胞核亞細(xì)胞定位穩(wěn)定過表達(dá)LIMK-1均能促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞體內(nèi)肺定植能力。3.LIMK-1調(diào)控結(jié)直腸癌增殖轉(zhuǎn)移的分子機制1) LIMK-1過表達(dá)后AKT信號通路蛋白p-PTEN、p-AKT(473)、p-AKT(308)和AKT表達(dá)的影響western blotting檢測SW480、HCT116兩種結(jié)直腸癌細(xì)胞,瞬時轉(zhuǎn)染HA、HA-LIMK1、HA-NLS-LIMK1、HA-NES-LIMK1四個質(zhì)粒后,p-PTEN、p-AKT (473)、p-AKT(308)、AKT的表達(dá)。結(jié)果顯示：SW480和HCT116細(xì)胞HA-LIMK1、HA-NLS-LIMK1、HA-NES-LIMK1三個處理組p-PTEN的表達(dá)較HA對照組表達(dá)低,HA-LIMK1、HA-NLS-LIMK1、HA-NES-LIMK1三個處理組p-AKT (473)、p-AKT(308)的表達(dá)較HA對照組高,AKT總蛋白量在4種處理細(xì)胞間無顯著差異,結(jié)果表明細(xì)胞漿與細(xì)胞核內(nèi)的LIMK-1均可以調(diào)控AKT信號通路的活性。2) LIMK-1后對CRC細(xì)胞EMT相關(guān)分子標(biāo)志物表達(dá)的影響western blot檢測SW480、HCT116兩種結(jié)直腸癌細(xì)胞,瞬時轉(zhuǎn)染HA、HA-LIMK1、HA-NLS-LIMK1、HA-NES-LIMK1四個質(zhì)粒后,EMT相關(guān)分子標(biāo)志物的變化。結(jié)果顯示：SW480和HCT116細(xì)胞HA-LIMK1、HA-NLS-LIMK1、 HA-NES-LIMK1三個處理組上皮標(biāo)志物(E-cadherin、β-catenin)的表達(dá)較HA對照組表達(dá)量低;HA-LIMK1、HA-NLS-LIMK1、HA-NES-LIMK1三個處理組間葉標(biāo)志物(N-cadherin、Fibronectin)的表達(dá)較HA對照組表達(dá)量高。以上結(jié)果表明,細(xì)胞漿與細(xì)胞核中的LIMK-1均可誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生EMT轉(zhuǎn)化。3) LIMK-1相互作用蛋白的篩選采用帶HA標(biāo)簽抗體的Agarose親和帶HA標(biāo)簽的LIMK-1融合蛋白,結(jié)合的總蛋白經(jīng)SDS-PAGE電泳分離。實驗組為SW480/HA-NES-LIMK1、 SW480/HA-NLS-LIMK1、SW480/HA-LIMK1,對照組為SW480/HA。經(jīng)SDS-PAGE電泳分離,質(zhì)譜兼容銀染后可見清晰蛋白條帶,分析得到多條差異蛋白條帶,初步篩選鑒定為MYH9(myosin-9,肌球蛋白重鏈9)、ACTN4(alpha-actinin4,細(xì)胞輔助動力蛋白)、DBN1(Drebrin)。4) LIMK-1與MYH9, ACTN4的直接結(jié)合檢測利用Co-IP檢測LIMK-1與MYH9、ACTN4的直接結(jié)合作用,結(jié)果顯示：LIMK-1與MYH9、ACTN4存在直接結(jié)合。5) LIMK-1與MYH9、ACTN4的共定位檢測利用免疫熒光顯微鏡檢測SW480/HA-LIMK-1細(xì)胞中LIMK-1和ACTN4、 MYH9的共定位情況,結(jié)果顯示LIMK-1與ACTN4、MYH9存在共定位。結(jié)論：結(jié)直腸癌組織中LIMK-1胞漿與胞核內(nèi)的表達(dá)水平均顯著上調(diào),胞漿、胞核內(nèi)的LIMK-1具有增強結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力。LIMK-1在胞漿、胞核內(nèi)的過表達(dá)水平與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(M)和預(yù)后等臨床病理參數(shù)之間呈正相關(guān)關(guān)系。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R735.34
【部分圖文】：

檢測了邋１５２例結(jié)直腸癌石蠟標(biāo)本組織和７８例配對的癌旁組織中ＬＩＭＫ－１的表達(dá)，逡逑ＬＩＭＫ－１陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，呈棟紅色或黃褐色。結(jié)果顯逡逑示正常結(jié)直腸姐織ＬＩＭＫ－１蛋白表達(dá)水平低于相配對的腫瘤組織（圖１－２）；我逡逑們的阻Ｃ分析顯示，ＬＩＭＫ－１蛋白結(jié)直腸癌組織細(xì)胞漿陽性率６７．１％邋（１０２／１５２）逡逑高于正常結(jié)直腦組織細(xì)胞漿陽性率１０．３％邋（８／７８），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義逡逑（ｐ＝０．０００），并且中度陽性和強陽性作為過表達(dá)或高表達(dá)，結(jié)直腸癌癌組織逡逑細(xì)胞漿過表達(dá)率１７．７％（２７／１５２）高于正常結(jié)直腸組織細(xì)胞漿過表達(dá)率０％（０／７８），逡逑差異具有統(tǒng)計學(xué)（Ｐ＝0．000）；結(jié)直腸癌癌組織細(xì)胞核陽性率９２．８％邋（１４１＾５２）逡逑與正常結(jié)直腸組織細(xì)胞核陽性率８５．９％邋（６７／７８）無顯著差異（ｐ＝０．０９４），但在逡逑結(jié)直腸癌癌組織中細(xì)胞核過表達(dá)率５７．９％邋（８８／１５２）高于正常結(jié)直腸組織細(xì)胞逡逑核過表達(dá)率１７．９％邋（１４／７８），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ｐ＝０．０００）。（表１－１）。逡逑Ｎｏｒｍａｌ邐Ｔｕｍｏｕｒ邐Ｎｏｒｍａｌ邐Ｔｕｍｏｕｒ逡逑［網(wǎng)妽＾廠‘．‘Ｖ邋媒知p哄澹荊煎義仙杳浚謾で蒬趮

本文編號：2820813