目的:探討病毒巨噬細胞炎性蛋白ⅡN端肽(NT21MP)通過miR-155-3p逆轉(zhuǎn)人乳腺癌細胞紫杉醇耐藥的分子機制。方法:1.使用梯度濃度法構(gòu)建人乳腺癌細胞MCF-7紫杉醇耐藥株MCF-7/PR;2.qRT-PCR檢測NT21MP對miR-155-3p的調(diào)控以及miR-155-3p在人乳腺癌細胞系MCF-7和紫杉醇耐藥細胞株MCF-7/PR中不同的表達水平;3.生物信息學軟件預測并使用雙熒光素酶報告載體驗證miR-155-3p的靶基因MYD88;4.構(gòu)建并篩選穩(wěn)定的靶基因干擾片段以及過表達載體;5.qRT-PCR和Western Blot檢測miR-155-3p、靶基因MYD88對凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax、Bak-1、Caspase-3表達影響;6.劃痕實驗、transwell趨化實驗、流式細胞術(shù)分別檢測miR-155-3p、靶基因MYD88對細胞的遷移、侵襲、周期和凋亡的影響;7.構(gòu)建人乳腺癌體內(nèi)模型,研究乳腺癌細胞MCF-7以及MCF-7/PR的成瘤性以及miR-155-3p對腫瘤成長的影響;8.qRT-PCR和Western Blot檢測NT21MP聯(lián)合miR-155-3p mimics、MYD88干擾片段對乳腺癌耐藥株MCF-7/PR內(nèi)凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax、Bak-1、Caspase-3的作用;9.劃痕實驗、transwell趨化實驗、流式細胞術(shù)檢測NT21MP聯(lián)合miR-155-3p mimics、MYD88干擾片段對乳腺癌耐藥株MCF-7/PR遷移、侵襲、周期和凋亡的影響。結(jié)果:1.NT21MP可上調(diào)miR-155-3p的表達(P0.05);2.相比于MCF-7細胞,miR-155-3p在MCF-7/PR呈低水平表達(P0.05);3.生物信息學軟件預測MYD88為miR-155-3p潛在的靶基因并通過qRT-PCR、Western Blot和雙熒光素酶報告基因驗證;4.miR-155-3p可抑制乳腺癌細胞的的生長,上調(diào)促凋亡基因Bax、Bak-1和Caspase-3而下調(diào)抗凋亡基因Bcl-2的表達,抑制細胞的遷移和侵襲能力(P0.05),而其靶基因MYD88則作用相反,促進乳腺癌細胞的增殖,增加細胞S期比例,增強細胞遷移和侵襲能力(P0.05);5.相比于單一因素處理,NT21MP聯(lián)合miR-155-3p mimics在調(diào)控MCF-7/PR凋亡和侵襲方面顯示出協(xié)同作用(P0.05),而在細胞遷移方面顯示為部分疊加(P0.05);7.相對于NT21MP或者si-MYD88單獨處理組,NT21MP聯(lián)合si-MYD88在促進MCF-7/PR細胞凋亡和抑制侵襲能力中表現(xiàn)為協(xié)同效應(P0.05),抑制細胞遷移效果部分疊加(P0.05)。結(jié)論:NT21MP可通過上調(diào)miR-155-3p而下調(diào)MYD88的表達,逆轉(zhuǎn)乳腺癌細胞紫杉醇耐藥,增加乳腺癌細胞對紫杉醇的敏感性,發(fā)揮抗乳腺癌作用。
【學位單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

實驗結(jié)果第一部分：miR-155-3p 調(diào)控人乳腺癌細胞紫杉醇耐藥機制研究1. miR-155-3p 靶基因的篩選及鑒定1.1 miR-155-3p 靶基因的篩選使 用 miRNA 靶 基 因 預 測 軟 件 TargetScan ， miRanda ， miRTarBase 預 測miR-155-3p 的靶基因，選定 MAPK14、DNAJB1、IRAK3、SIRT1、MYD88 共五個基因作為 miR-155-3p 潛在的靶基因（圖 1）

8 的 3'-UTR 區(qū)促進其降解，導致 MYD88-3'-UTR WT-miR-155-3p 組熒光性顯著降低（P<0.05），而在 MYD88-3'-UTR MUT-miR-155-3p 組卻未化（P>0.05），表明靶基因 3'-UTR 與 miRNAs 結(jié)合位點的突變，導致 miR接靶向互補靶基因 mRNA3'-UTR 區(qū)域，阻斷了 miRNAs 直接對靶基因的 4）。

利用生物信息學軟件確定 miR-155-3p 與 MYD88 互補序列（圖3），構(gòu)建含 MYD88 3'-UTR 的熒光素酶報告載體，熒光素酶活性實驗結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染 miR-155-3p mimics 使 miR-155-3p 在 MCF-7 細胞內(nèi)過度表達，結(jié)合于靶基因

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 高嘉悅;;乳腺癌的治療現(xiàn)狀及展望[J];中國新通信;2019年02期

2 劉倩;金紅艷;何為;葛四平;田勇;趙能剛;;乳腺癌組織微小RNA-218-5p的表達及其臨床意義[J];臨床腫瘤學雜志;2018年12期

3 郭奕陽;朱彩虹;郭秀娟;;人表皮生長因子受體2陽性乳腺癌與抗人表皮生長因子受體2新型藥物[J];河北醫(yī)科大學學報;2018年01期

4 閆東;;人表皮生長因子受體3在人表皮生長因子受體2陽性乳腺癌組織中的表達[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;2017年06期

5 張青;甘淋;;乳腺癌生物標志物的研究進展[J];生命的化學;2018年01期

6 張斌;梁愛玲;劉勇軍;;外泌體在乳腺癌中耐藥機制的研究進展[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2018年02期

7 張國強;劉增艷;王曉紅;楊振林;;血清微小RNA-409-3p表達在乳腺癌早期診斷中的價值[J];江蘇醫(yī)藥;2018年04期

8 王晨飛;胡浩霖;呂建鑫;張亞男;;乳腺癌侵襲相關(guān)分子的研究熱點[J];東南大學學報(醫(yī)學版);2018年04期

9 童彤;;草莓能抑制乳腺癌擴散[J];中國果業(yè)信息;2017年05期

10 陳暢;黃欣;茅楓;周易冬;林燕;孫強;;乳腺癌眼部轉(zhuǎn)移的診治現(xiàn)狀[J];中華乳腺病雜志(電子版);2018年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 錢明;黃劍浜;肖楊;鄭海榮;;利用高頻超聲刺激探究乳腺癌細胞侵襲性[A];2016年全國聲學學術(shù)會議論文集[C];2016年

2 楊永長;黃文芳;劉華;肖代雯;姜偉;;乳腺癌細胞核差異蛋白篩選[A];中華醫(yī)學會第七次全國中青年檢驗醫(yī)學學術(shù)會議論文匯編[C];2012年

3 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細胞的生長及誘導凋亡的機制研究[A];2000全國腫瘤學術(shù)大會論文集[C];2000年

4 白霞;傅建新;丁凱陽;王兆鉞;阮長耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細胞中的表達研究[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

5 戴建建;章靜茹;陳峰;馬道新;紀春巖;;EGFR抑制劑對乳腺癌細胞生物學活性的影響[A];中華醫(yī)學會血液學分會第十三屆全國血栓與止血學術(shù)會議暨“血栓栓塞性疾�。ㄑㄅc止血）基礎(chǔ)與臨床研究進展”論文摘要匯編及學習班講義[C];2011年

6 李俊;繆蘇宇;李曉敏;束永前;王水;殷詠梅;;腫瘤壞死因子-α對乳腺癌細胞CD44表達的調(diào)控以及影響細胞遷徙的機制探討[A];2010’全國腫瘤分子標志及應用學術(shù)研討會暨第五屆中國中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

7 ;不同分子量肝素對乳腺癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響(英文)[A];第十一屆全國青年藥學工作者最新科研成果交流會論文集[C];2012年

8 汲振余;李懿;范丹丹;;膜骨架蛋白4.1N負調(diào)控乳腺癌細胞的粘附、遷移及侵襲[A];2013醫(yī)學前沿論壇暨第十三屆全國腫瘤藥理與化療學術(shù)會議論文集[C];2013年

9 趙麗;曹英林;;降鈣素體外抑制乳腺癌細胞的作用[A];中國免疫學會第四屆學術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

10 趙麗;曹英林;;降鈣素體外抑制乳腺癌細胞的作用[A];中國免疫學會第四屆學術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 記者 閆潔;我學者發(fā)現(xiàn)乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移新機制[N];中國科學報;2012年

2 記者 張夢然;轉(zhuǎn)移乳腺癌細胞休眠不死之謎破解[N];科技日報;2018年

3 本報記者 劉霞;大數(shù)據(jù)算法在諸多領(lǐng)域“弄潮”[N];科技日報;2017年

4 南方日報記者 嚴慧芳 通訊員 宋莉萍;長期喝蜂王漿會致癌？[N];南方日報;2017年

5 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細胞生長的分子[N];科技日報;2010年

6 ;專家發(fā)現(xiàn)抑制DNA修補可殺死乳腺癌細胞[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導報;2005年

7 記者 毛磊;乳腺癌干細胞被美專家發(fā)現(xiàn)[N];新華每日電訊;2003年

8 記者 宋心德;圓白菜、胡蘿卜能防乳腺癌[N];新華每日電訊;2004年

9 余志平;肥胖致癌的“罪魁禍首”[N];中國醫(yī)藥報;2001年

10 張中橋;VEGF對乳腺癌的生長起重要作用[N];中國醫(yī)藥報;2002年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 王旭;PTBP1對乳腺癌細胞生長和侵襲轉(zhuǎn)移的影響[D];中國醫(yī)科大學;2018年

2 劉佩佩;AIF1L基因?qū)DAMB231乳腺癌細胞遷移侵襲的影響及機制研究[D];中國醫(yī)科大學;2018年

3 張揚;沉默LncRNA-ATB靶向miR-141-3p抑制乳腺癌的轉(zhuǎn)移和侵襲[D];中國醫(yī)科大學;2018年

4 蔡琳琳;柴桂龍牡湯改善Luminal型乳腺癌患者生活質(zhì)量及對MCF-7細胞株影響的研究[D];中國中醫(yī)科學院;2018年

5 趙建華;MRI動態(tài)增強聯(lián)合鉬靶在乳腺癌早期診治臨床路徑中的價值研究[D];南方醫(yī)科大學;2017年

6 李俊堂;miR-568抑制乳腺癌細胞體內(nèi)外轉(zhuǎn)移機制的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2014年

7 張懿敏;葡萄糖對乳腺癌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激及增殖轉(zhuǎn)移能力的影響及其調(diào)節(jié)機制[D];武漢大學;2015年

8 周云;長鏈非編碼基因HOTAIR對乳腺癌放射抵抗性的調(diào)控及機制[D];南京醫(yī)科大學;2016年

9 燕小梅;乳腺癌中巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅳ的表達、檢測及影響因素的研究[D];大連醫(yī)科大學;2016年

10 陳津;間充質(zhì)干細胞誘導ErbB2/ErbB3共表達乳腺癌細胞紫杉醇耐藥及機制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2018年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 曾藝秀;基于熒光相關(guān)光譜技術(shù)的乳腺癌細胞膜微區(qū)特性研究[D];福建師范大學;2015年

2 張瑞;新型透明質(zhì)酸基因傳遞載體的優(yōu)化及其介導的乳腺癌靶向基因沉默[D];鄭州大學;2018年

3 劉美佳;三種內(nèi)酯類化合物對乳腺癌細胞MCF-7的抑制作用及機制研究[D];遼寧大學;2018年

4 陳婉;阿霉素及其納米載藥系統(tǒng)在敏感及耐藥乳腺癌中的抗癌作用及機制研究[D];浙江大學;2016年

5 田由甲;丙戊酸增加乳腺癌細胞對硫酸羥脲敏感性及其分子機制的研究[D];山東大學;2018年

6 張杰;沒藥水提物對HER-2陽性乳腺癌細胞增殖、遷移、侵襲的影響及作用機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2016年

7 冷冰晶;人源乳腺癌小鼠異種移植模型建立的研究[D];蘇州大學;2018年

8 李菲;三陰性乳腺癌常規(guī)超聲及聲觸診組織成像定量剪切波彈性成像特征[D];山東大學;2018年

9 譙鳳;~(18)F-FETNIM micro PET/CT評價馬藺子素對裸鼠MDA-MB231乳腺癌放射增敏作用的實驗研究[D];安徽醫(yī)科大學;2018年

10 趙婭雯;乳腺癌超聲彈性成像評分研究[D];廣西醫(yī)科大學;2017年

本文編號：2820316