彌漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤(NHL)中最常見類型,占全部NHL患者的30%-40%。具有高度異質(zhì)性,不同亞型具有不同臨床特征、遺傳學(xué)改變和治療反應(yīng)。R-CHOP為基礎(chǔ)的聯(lián)合治療方案是目前DLBCL的標準方案,使得患者的5年生存期達到60%-70%,約30%-50%的患者會因藥物抵抗或疾病迅速復(fù)發(fā)而死亡。因此,該病目前仍是不可治愈的惡性疾病。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個涉及多基因表達異常及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控異常的復(fù)雜過程,然而任何生物反應(yīng)的改變均伴隨著能量的變化,因而能量代謝異常在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用也越來越受到研究者的重視,目前認為代謝改變是腫瘤的一個新特征,癌細胞通過代謝改變維持其高增殖率。PPA1為無機焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase,PPase)的家族成員之一,通過水解無機焦磷酸鹽(PPi)為2分子的正磷酸鹽(Pi),同時釋放能量,還可以使H~+從胞質(zhì)泵入膜內(nèi),起到質(zhì)子泵的作用。同時在特定條件下可作為能量供體和ATP替代物,在細胞生長發(fā)育中也具有重要作用。目前關(guān)于PPA1與腫瘤的相關(guān)研究提示其在多種實體腫瘤中高表達,這與PPA1能夠滿足惡性腫瘤快速生長、異常分化過程中能量供給需求增加相關(guān)。然而PPA1在血液腫瘤尤其是高度異質(zhì)性的DLBCL中的作用尚未見報道。本課題旨在探討PPA1在彌漫性大B細胞淋巴瘤的表達及其表達與臨床特征之間的相關(guān)性,并通過體內(nèi)外實驗探討PPA1對彌漫性大B細胞淋巴瘤細胞增殖及凋亡的影響及可能機制,為PPA1能否成為彌漫性大B細胞淋巴瘤新的檢測指標用于早期診斷、預(yù)后判斷及治療靶點的選擇。我們首先采用免疫組化的方法檢測了65例DLBCL患者和20例反應(yīng)性淋巴結(jié)增生的患者中PPA1的表達情況。結(jié)果顯示PPA1在DLBCL患者的表達明顯高于對照組(p0.05),其高表達與患者B癥狀和IPI評分相關(guān)(p0.05)。接著,分別采用Real-time PCR和Western blot法檢測了PPA1在DLBCL細胞系及正常人永生B淋巴細胞中的表達,結(jié)果顯示,與對照組相比,PPA1在大部分DLBCL細胞系中高表達(p0.05),PPA1蛋白水平在DLBCL中均明顯增高(p0.05)。然后,我們采用RNA干擾技術(shù)研究了PPA1基因沉默后對DLBCL細胞系增殖和凋亡的影響。結(jié)果顯示沉默PPA1后DLBCL細胞增殖能力減低,凋亡明顯增加(p0.05)。進一步的機制探討中我們發(fā)現(xiàn)沉默PPA1后DLBCL中P53和P21表達量明顯增加,可能機制為通過調(diào)節(jié)JNK-P53通路來影響細胞增殖。同時發(fā)現(xiàn)沉默PPA1后caspase3剪切體表達量明顯增加,提示PPA1可能通過下調(diào)caspase3剪切體進而抑制細胞調(diào)亡過程的�？傊�,本研究揭示PPA1在DLBCL發(fā)生發(fā)展中具有重要意義,為其成為新的靶標用于疾病早期診斷、預(yù)后分層及治療提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R733.1
【部分圖文】：

圖 4.1 PPA1 不同表達情況及在 DLBCL 組織中的分布Figure 4.1 Different expression of PPA1 and distribution in DLBCL organization2 PPA1 在彌漫性大 B 細胞淋巴瘤細胞系中的表達為了進一步在細胞水平驗證 PPA1 在 DLBCL 中的表達情況，分別采用Real-time PCR 和 Western blot 方法檢測對照組細胞：人正常 B 細胞永生化細胞系HMy2.CIR 和 DLBCL 細胞系：OCI-Lyl9、SU-DHL-4、VAL、SU-DHL-2 和 SU-DHL-8中PPA1的表達情況。其中DLBCL細胞系包括ABC亞型（SU-DHL-2和SU-DHL-8）和 GCB 亞型（OCI-Lyl9、SU-DHL-4 和 VAL）。2.1 Real-time PCR 檢測 PPA1 在彌漫性大 B 細胞淋巴瘤細胞系中的表達PPA1 的 mRNA 表達量是相對于 GAPDH 的相對表達量，PPA1 在不同 DLBCL

在細胞水平驗證 PPA1 在 DLBCL 中的表達 Western blot 方法檢測對照組細胞：人正常 BCL 細胞系：OCI-Lyl9、SU-DHL-4、VAL、SU-D況。其中DLBCL細胞系包括ABC亞型（SU-DI-Lyl9、SU-DHL-4 和 VAL）。CR 檢測 PPA1 在彌漫性大 B 細胞淋巴A 表達量是相對于 GAPDH 的相對表達量，P況以均數(shù)±標準差（ x ±x）表示，結(jié)果顯示：A 在 DLBCL 中都有表達，在部分細胞系中表情況如圖 4.2。

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文2.2 Western blot 檢測 PPA1 在彌漫性大 B 細胞淋巴瘤細胞系中的表達分別收集 HMy2.CIR 和 DLBCL 各細胞系全蛋白質(zhì)，采用 Western blot 檢測PPA1 的表達，PPA1 的表達是其與β-actin 的相對表達量，結(jié)果顯示，PPA1 蛋白表達水平在 DLBCL 中明顯高于 HMy2.CIR（P<0.05）。其在 HMy2.CIR 和 DLBCL各細胞系中的表達情況如圖 4.3 所示。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Zhitao Ying;Xuejuan Wang;Yuqin Song;Wen Zheng;Xiaopei Wang;Yan Xie;Ningjing Lin;Meifeng Tu;Lingyan Ping;Weiping Liu;Lijuan Deng;Chen Zhang;Zhi Yang;Jun Zhu;;Prognostic value of interim ~(18)F-FDG PET/CT in diffuse large B-cell lymphoma[J];Chinese Journal of Cancer Research;2013年01期

本文編號：2818586