研究背景經(jīng)導(dǎo)管動脈化療栓塞術(shù)(TACE)是原發(fā)性肝癌的主要治療方法之一,由于術(shù)中栓塞劑阻塞及化療藥物等作用,可造成肝臟局部缺血缺氧,致缺血區(qū)中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、肝臟庫弗氏細(xì)胞等大量聚集引起炎癥反應(yīng),多種炎性因子大量生成分泌。炎性因子與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。其中IL-8、TNF-α與肝癌的進(jìn)展、血管生成和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。TACE術(shù)后局部為缺氧環(huán)境,可上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α表達(dá),進(jìn)一步可通過誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)升高而促進(jìn)腫瘤血管生長,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,VEGF和HIF-1α是缺氧環(huán)境中調(diào)控血管生成的關(guān)鍵因子,VEGF的高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤生長、增加轉(zhuǎn)移機(jī)率。抑制VEGF表達(dá)水平是降低肝癌TACE術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率的重要手段,進(jìn)而可阻止腫瘤新生血管的形成。在缺氧環(huán)境下,VEGF除受HIF-1α調(diào)控外,炎性因子亦可以促進(jìn)VEGF表達(dá)。眾多研究表明,中藥醫(yī)已經(jīng)成為惡性腫瘤治療策略中的重要組成部分,配合TACE術(shù)具有良性調(diào)節(jié)作用,不僅可減輕栓塞綜合征,而且可以在降低肝癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮作用。清熱解毒法是中醫(yī)治療原發(fā)性肝癌的主要治療方法之一,清熱解毒中藥在肝癌發(fā)展的不同階段均有一定療效。熊膽粉作為清熱解毒類中藥,具有抗炎、抗腫瘤的作用�，F(xiàn)研究發(fā)現(xiàn),熊膽粉在減少炎性因子分泌、調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境、抑制肝星狀細(xì)胞活化、促進(jìn)T細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)肝腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤增殖及血管生成等方面均有作用。熊膽粉是否可能下調(diào)TACE術(shù)后缺氧環(huán)境炎性因子分泌,是否可以下調(diào)VEGF表達(dá),是否可以抑制缺氧條件下的血管生成,目前尚無相關(guān)報道。研究目的探討熊膽粉對原發(fā)性肝癌TACE術(shù)后炎性因子及栓塞綜合征的影響,并進(jìn)一步探討熊膽粉在缺氧條件下對肝癌細(xì)胞炎性因子及血管生成的影響,為熊膽粉配合TACE術(shù)進(jìn)一步提高TACE術(shù)的療效提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法1、熊膽粉對原發(fā)性肝癌患者TACE術(shù)后血清炎性因子及栓塞綜合征的影響將符合納入標(biāo)準(zhǔn)的107例原發(fā)性肝癌患者隨機(jī)分為熊膽粉組(服用熊膽粉膠囊)及對照組(服用安慰劑),均于TACE術(shù)前1天開始用藥,療程6天,分別于術(shù)前、術(shù)后第3天及術(shù)后第5天檢測并記錄患者血清炎性因子、肝功水平及記錄臨床癥狀情況。2、熊膽粉對CoCl_2誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞IL-8、HIF-1α、VEGF表達(dá)的影響體外采用CoCl_2造成人肝癌細(xì)胞SMMC-7721缺氧模型,MTT檢測不同濃度熊膽粉在缺氧條件下對肝癌細(xì)胞增殖的影響,然后用對SMMC-7721肝癌細(xì)胞無明顯毒性的低、中、高濃度的熊膽粉干預(yù),RT-PCR方法檢測缺氧條件下熊膽粉對肝癌細(xì)胞中IL-8、HIF-1α、VEGF表達(dá),同時用ELISA法檢測肝癌細(xì)胞培養(yǎng)基上清中IL-8水平、Western blot法檢測HIF-1α、VEGF的蛋白表達(dá),探討熊膽粉在缺氧條件下對IL-8、HIF-1α、VEGF表達(dá)的影響。3、熊膽粉對IL-8誘導(dǎo)的血管生成的影響在體外實(shí)驗(yàn)中,我們用鋪基質(zhì)膠方法將100 ng/mL IL-8與內(nèi)皮細(xì)胞注入高濃度的基質(zhì)膠內(nèi),并加入不同濃度的熊膽粉培養(yǎng),在熒光顯微鏡下觀察血管結(jié)節(jié)數(shù)量、血管長度及面積并拍照,圖片采用Image J軟件進(jìn)行處理并統(tǒng)計其血管生成情況。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,將裸鼠分3組,分別為空白組(裸鼠皮下接種基質(zhì)膠與內(nèi)皮細(xì)胞)、IL-8組(裸鼠皮下接種基質(zhì)膠、內(nèi)皮細(xì)胞與IL-8混合液)、IL-8+熊膽粉組(裸鼠皮下接種基質(zhì)膠、內(nèi)皮細(xì)胞、IL-8與0.4 mg/mL熊膽粉混合液),將混有IL-8、EA.hy 926細(xì)胞、熊膽粉的基質(zhì)膠按分組設(shè)計方案接種于裸鼠體內(nèi)。10天后,將裸鼠皮下基質(zhì)膠團(tuán)塊剝離,一部分置于EP管中,加入Lysis細(xì)胞裂解液并在組織研磨機(jī)中研磨,通過BCA法檢測蛋白濃度,將所有樣品調(diào)整至相同蛋白濃度后,將所獲得的組織懸液通過貝博血紅蛋白檢測試劑盒進(jìn)行血紅蛋白濃度的檢測;另一部分用于HE染色觀察血管生成情況,免疫組化檢測CD31、VEGF表達(dá)以評估血管生成情況。研究結(jié)果1、臨床研究發(fā)現(xiàn),原發(fā)性肝癌患者TACE術(shù)后炎性因子IL-6、CRP、IL-8表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05),術(shù)后第5天時熊膽粉組IL-8、TNF-α水平明顯低于對照組(P0.01,P0.05),提示熊膽粉可以抑制TACE術(shù)后炎性因子IL-8、TNF-α表達(dá)水平;2、原發(fā)性肝癌患者TACE術(shù)后肝功TBIL、DBIL、ALT、AST水平升高,熊膽粉組AST/ALT比值、AST水平顯著低于對照組(P0.01,P0.05);熊膽粉組患者的發(fā)熱持續(xù)時間明顯短于對照組(P0.05),提示熊膽粉可以改善TACE術(shù)后肝功能損傷,減輕發(fā)熱癥狀,減輕栓塞綜合征。3、RT-PCR方法檢測肝癌細(xì)胞中IL-8、HIF-1α、VEGFmRNA表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn),CoCl_2能顯著誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞中IL-8、HIF-1α、VEGFmRNA表達(dá),與空白對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),而熊膽粉能夠明顯抑制CoCl_2誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞中IL-8、HIF-1α、VEGFmRNA的表達(dá)。進(jìn)一步采用ELISA法檢測肝癌細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中IL-8水平,結(jié)果與mRNA結(jié)果一致。Western blot法檢測肝癌細(xì)胞HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá),結(jié)果也顯示熊膽粉可抑制HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá),以上均提示熊膽粉具有抑制缺氧條件下IL-8、HIF-1α、VEGF表達(dá)的作用。4、熊膽粉體外對IL-8誘導(dǎo)的血管生成的影響,結(jié)果顯示:混有IL-8及內(nèi)皮細(xì)胞的基質(zhì)膠內(nèi)血管結(jié)節(jié)數(shù)量、血管長度及面積方面均明顯高于空白對照組(P0.05),提示IL-8能刺激血管的生成;加入不同濃度的熊膽粉干預(yù)后,血管結(jié)節(jié)數(shù)量、血管長度及面積三個指標(biāo)均較IL-8組下降,其中0.2、0.4mg/mL兩組與IL-8組差異顯著(P0.05),提示熊膽粉能有效抑制IL-8促血管生成的效應(yīng),并且呈一定的劑量依賴性。5、熊膽粉對體內(nèi)血管生成的影響的實(shí)驗(yàn)中,HE染色觀察發(fā)現(xiàn)基質(zhì)膠團(tuán)塊血管生成在IL-8刺激下明顯增加,而熊膽粉能有效抑制該效應(yīng);免疫組化檢測體內(nèi)基質(zhì)膠內(nèi)CD31、VEGF表達(dá)的結(jié)果發(fā)現(xiàn),IL-8組CD31、VEGF表達(dá)明顯高于對照組,而熊膽粉+IL-8組則CD31、VEGF表達(dá)均較IL-8組明顯減少,檢測體內(nèi)基質(zhì)膠內(nèi)血紅蛋白濃度發(fā)現(xiàn),在IL-8誘導(dǎo)下,IL-8組基質(zhì)膠內(nèi)血管較空白對照組豐富,血紅蛋白濃度明顯高于空白對照組,差異顯著(P0.05),而熊膽粉+IL-8組則血管不明顯,血紅蛋白濃度明顯低于IL-8組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),以上均提示熊膽粉可以抑制IL-8誘導(dǎo)的血管生成。結(jié)論1、熊膽粉可以抑制TACE術(shù)后IL-8、TNF-α表達(dá)水平;降低術(shù)后AST水平,減輕TACE術(shù)后栓塞綜合征;2、熊膽粉能夠抑制缺氧誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞VEGF、IL-8水平升高;3、熊膽粉可以抑制IL-8誘導(dǎo)的血管生成;4、熊膽粉可能能夠抑制原發(fā)性肝癌TACE術(shù)后缺氧誘導(dǎo)的血管生成,其機(jī)制可能與抑制HIF-1α/IL-8/VEGF相關(guān)。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7
【部分圖文】：

粉組患者IL-8及TNF-α水平均低于對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。（見圖1-2）圖1-2. 肝癌患者TACE術(shù)前及術(shù)后炎性因子表達(dá)情況A. TACE術(shù)前；B. TACE術(shù)后第3天；C. TACE術(shù)后第5天；BBP，熊膽粉組；Control，對照組；*P<0.05,**P<0.01 vs 術(shù)前；#P<0.05,##P<0.01 vs 同時間點(diǎn)對照組2、肝功能（1）TACE術(shù)前兩組患者TBIL、DBIL、ALT、AST、ALB、AST/ALT水平無明顯差異（P＞0.05）；（2）術(shù)后第3天：兩組患者TBIL、DBIL、ALT、AST水平升高，與術(shù)前比較差異顯著（P＜0.05）；熊膽粉組AST/ALT值明顯低于對照組（P＜0.05）；（3）術(shù)后第5天：兩組患者TBIL、DBIL仍較術(shù)前升高（P＜0.05）；熊膽粉組AST/ALT比值、AST水平顯著低于對照組（P＜0.01，P＜0.05）。（見圖1-3）

海軍軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文- 30 -圖1-3. 肝癌患者TACE術(shù)前及術(shù)后肝功能情況A. TACE術(shù)前；B. TACE術(shù)后第3天；C. TACE術(shù)后第5天；BBP,熊膽粉組；Control，對照組；*P<0.05,**P<0.01，vs 術(shù)前；#P<0.05,##P<0.01 vs 同時間點(diǎn)的對照組3、TACE術(shù)后栓塞綜合征TACE術(shù)后對照組患者出現(xiàn)41例發(fā)熱、8例惡心、28例腹痛，熊膽粉組出現(xiàn)39例發(fā)熱、10例惡心、22例腹痛，兩組患者在常見癥狀強(qiáng)度方面比較無顯著差異（P＞0.05）；熊膽粉組患者的發(fā)熱持續(xù)時間明顯短于對照組（P＜0.01）；而兩組間惡心及腹痛持續(xù)時間則無顯著差異（P＞0.05）。（見表1-11）表1-11 TACE術(shù)后栓塞綜合征組別 癥狀癥狀強(qiáng)度（例/%) 時間Ⅰ Ⅱ Ⅲ 合計（ ±S h)對照組（n=56）發(fā)熱 7（12.5） 34（60.7） 0 41（73

海軍軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文- 30 -圖1-3. 肝癌患者TACE術(shù)前及術(shù)后肝功能情況A. TACE術(shù)前；B. TACE術(shù)后第3天；C. TACE術(shù)后第5天；BBP,熊膽粉組；Control，對照組；*P<0.05,**P<0.01，vs 術(shù)前；#P<0.05,##P<0.01 vs 同時間點(diǎn)的對照組3、TACE術(shù)后栓塞綜合征TACE術(shù)后對照組患者出現(xiàn)41例發(fā)熱、8例惡心、28例腹痛，熊膽粉組出現(xiàn)39例發(fā)熱、10例惡心、22例腹痛，兩組患者在常見癥狀強(qiáng)度方面比較無顯著差異（P＞0.05）；熊膽粉組患者的發(fā)熱持續(xù)時間明顯短于對照組（P＜0.01）；而兩組間惡心及腹痛持續(xù)時間則無顯著差異（P＞0.05）。（見表1-11）表1-11 TACE術(shù)后栓塞綜合征組別 癥狀癥狀強(qiáng)度（例/%) 時間Ⅰ Ⅱ Ⅲ 合計（ ±S h)對照組（n=56）發(fā)熱 7（12.5） 34（60.7） 0 41（73

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周煥城;彭廣福;宋越;張彩云;王捷;;肝細(xì)胞癌患者血清中CD31表達(dá)水平及其對腫瘤細(xì)胞侵襲及增殖的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2015年31期

2 李夢;朱婷婷;寇冠軍;徐強(qiáng);王保和;;熊膽粉制劑臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];天津中醫(yī)藥;2015年10期

3 Alexander Schlachterman;Willie W Craft Jr;Eric Hilgenfeldt;Avir Mitra;Roniel Cabrera;;Current and future treatments for hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2015年28期

4 何宗全;章安慶;葉顯道;胡磊;朱文俊;;�；切苋パ跄懰釋Υ笫蟾闻K缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J];中國普通外科雜志;2015年07期

5 李文仿;歐琴;王耕;趙宗彬;;Luteolin抑制血管生成的機(jī)制研究[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2015年13期

6 趙錦燕;林薇;莊群川;鐘曉勇;彭軍;洪振豐;;Bear Bile Powder Inhibits Angiogenesis In Vivo and In Vitro[J];Chinese Journal of Integrative Medicine;2015年05期

7 Ke-Qi Han;Xue-Qun He;Meng-Yu Ma;Xiao-Dong Guo;Xue-Min Zhang;Jie Chen;Hui Han;Wei-Wei Zhang;Quan-Gang Zhu;Hua Nian;Li-Jun Ma;;Inflammatory microenvironment and expression of chemokines in hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2015年16期

8 唐秋媛;韋艾凌;潘哲;李鵬程;;癌痛消方聯(lián)合肝動脈栓塞化療治療中晚期肝癌患者的臨床療效觀察[J];時珍國醫(yī)國藥;2015年04期

9 胡民主;;熊膽粉的藥理作用及臨床應(yīng)用分析[J];唐山職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報;2015年01期

10 劉文導(dǎo);梅世偉;孟凡U

本文編號：2817558