目的:研究肝癌細(xì)胞株中HtrA1絲氨酸蛋白酶(HtrA1 serine protease)表達(dá)下調(diào)對(duì)增殖、遷移、侵襲及凋亡等細(xì)胞生物學(xué)特性的影響,并探討其對(duì)肝癌化療敏感性的變化。方法:檢測(cè)HtrA1在不同肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況,選擇較高表達(dá)的肝癌細(xì)胞系構(gòu)建HtrA1穩(wěn)定下調(diào)的HCC細(xì)胞系及空載病毒轉(zhuǎn)染的對(duì)照細(xì)胞系。劃痕愈合試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力的改變。使用不同濃度阿霉素分別作用于HtrA1干擾的HCC細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞,使用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力,流式細(xì)胞分析技術(shù)、Western blotting檢測(cè)細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白的變化。結(jié)果:成功構(gòu)建HtrA1穩(wěn)定下調(diào)表達(dá)的人肝癌細(xì)胞株HepG2及Huh7,以及相對(duì)應(yīng)的空載病毒轉(zhuǎn)染的對(duì)照細(xì)胞系。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,劃痕后24h,HepG2及Huh7的HtrA1低表達(dá)組相對(duì)遷移距離明顯高于空白轉(zhuǎn)染組。CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明HtrA1低表達(dá)的細(xì)胞株遷移能力明顯增強(qiáng);流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示,HtrA1低表達(dá)組凋亡細(xì)胞少于空白轉(zhuǎn)染組;Western blotting檢測(cè)結(jié)果表明HtrA1低表達(dá)組中凋亡抑制蛋白XIAP表達(dá)明顯高于空白對(duì)照組,而凋亡蛋白Caspase-3在HtrA1低表達(dá)組則明顯低于空白對(duì)照組;CCK-8凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在不同濃度阿霉素作用下,HtrA1低表達(dá)的細(xì)胞株存活率明顯高于空白對(duì)照組;差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:HtrA1下調(diào)表達(dá)可顯著增強(qiáng)HepG2及Huh7細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力,提示HtrA1參與調(diào)控肝癌細(xì)胞的生物學(xué)功能,并與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān);下調(diào)HtrA1表達(dá)后,肝癌細(xì)胞對(duì)阿霉素的殺傷效應(yīng)降低,提示HtrA1有望成為肝癌化學(xué)治療的新靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7
【部分圖文】：

測(cè)顯示在 HtrA1 在 MHCC-97L,MHCC-97L, HepHCCLM3 等細(xì)胞系中表達(dá)情況。下調(diào)表達(dá)的肝癌細(xì)胞株 Huh7 和 HepG2技術(shù)構(gòu)建 HtrA1 穩(wěn)定下調(diào)表達(dá)的人肝癌細(xì)胞 Huh7A 及 LV-NC 分別轉(zhuǎn)染 Huh7 和 HepG2 細(xì)胞株，通 2）。

圖 2：RT-PCR 檢測(cè)兩株細(xì)胞 HtrA1 mRNA 表達(dá)水平證明實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株 HtrA1 mRNA 表達(dá)明顯下調(diào)。 HtrA1 下調(diào)表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞增殖能力的影響

CCK-8試驗(yàn)比較各組穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖能力0244872Time(h)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李冉;張旗;;絲氨酸蛋白酶HtrA1在人牙周膜組織中的表達(dá)及對(duì)人牙周膜細(xì)胞增殖的影響[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2016年02期

2 ;Serine protease HtrA1 expression in human hepatocellular carcinoma[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年05期

本文編號(hào)：2817891