胃炎是一種十分常見的消化系統(tǒng)疾病,許多研究表明,長期的胃炎也會增加罹患胃癌的風險;因此,研究胃炎的發(fā)生、發(fā)展具有十分積極的意義。NF-κB信號通路與炎癥、癌癥的生理過程關(guān)系非常密切,由該通路轉(zhuǎn)錄的許多基因參與胃炎及胃癌生理過程的調(diào)控。MiRNA(microRNA))作為一類非編碼RNA,雖然自身不能直接編碼蛋白參與調(diào)控;但是它可以通過堿基互補配對靶向目的基因的3'非翻譯區(qū)或者5'非翻譯區(qū),從而調(diào)節(jié)目的目的基因的轉(zhuǎn)錄水平,進而參與體內(nèi)調(diào)控。眾多的研究表明,microRNA在各類炎癥反應以及癌癥發(fā)生、發(fā)展過程中都發(fā)揮著十分重要的作用。我們發(fā)現(xiàn),miRNA-149-3p可以通過拮抗NF-κB通路抑制胃炎。課題主要在體內(nèi)、體外兩個方向上證實了上述實驗結(jié)論。在體內(nèi)實驗中,通過腹腔注射LPS,使得WT小鼠以及149-3pKO小鼠都出現(xiàn)了炎癥反應,小鼠胃組織內(nèi)COX-2、iNOS、MCP-1這些NF-κB通路的靶向基因都有了顯著的表達上調(diào),這種促炎基因表達上調(diào)的趨勢在KO小鼠組織內(nèi)更為明顯;這樣的趨勢在對WT小鼠與KO各自的組織進行病理學分析后也得到了證實。為了進一步探究miRNA-149-3p在胃炎中的作用,我們通過尾靜脈注射miR-149-3p模擬物來提高miR-149-3p在小鼠體內(nèi)的表達水平;隨后使用LPS處理小鼠,發(fā)現(xiàn)miRNA-149-3p可以抑制LPS誘導的炎癥基因的表達。在體內(nèi)實驗中,利用miRNA-149-3p的模擬物使得其在胃癌細胞內(nèi)高表達進而研究其功能。結(jié)果顯示,過量表達miR-149-3p后會抑制MMP1、MCP-1、IFN-γ這些基因的表達;緊接著,利用LPS處理細胞誘導細胞產(chǎn)生炎癥反應,從實驗結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn),miR-149-3p可以明顯抑制由LPS誘導的MCP-1、TNFα、IP-10等基因的表達。隨后,利用細胞因子TNFα來激活細胞內(nèi)的NF-κB信號通路,過量表達的miR-149-3p可以明顯抑制NF-κB通路下游基因的表達。我們利用Western Blot手段來探究miR-149-3p過量表達對NF-κB通路蛋白水平上的作用,結(jié)果顯示miR-149-3p可以抑制TNFα誘導的IκBα蛋白額磷酸化。隨后的熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果也表明,miR-149-3p可以抑制NF-κB通路的轉(zhuǎn)錄活性。通過上述的實驗結(jié)果表明,miRNA-149-3p可以拮抗NF-κB信號通路從而抑制胃炎。這些發(fā)現(xiàn)表明,miR-149-3p是治療胃炎的潛在治療靶點,其模擬物為治療和預防與胃炎相關(guān)的疾病提供了可能的治療方案。
【學位單位】：北京化工大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R735.2;R573.3
【部分圖文】：

圖１－１邋ＮＦ－ｋＢ信號通路活化過程逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｔｈｅ邋ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｆ邋ＮＦ－ｋＢ邋Ｓｉｇｎａｌ邋ｐａｔｈｗａｙ逡逑ｋＢ通路可以調(diào)控細胞增殖、細胞凋亡和血管生成的多個細胞生理，ＮＦ－ｋＢ既可以作為極具潛力的治療靶點，同時也可以成為診標記。逡逑炎逡逑炎的概述逡逑是由許多因素引起的宿主反應，包括但是不局限于促炎介質(zhì)，環(huán)染［６（３，６１］。更為重要的是，在癌癥的背景下，炎癥在某些生理過程鍵的作用，諸如控制感染、傷口愈合等。簡而言之即是響應組織在

３．１．２邋ｍｉＲＮＡ１４９－３ｐ缺失小鼠對ＬＰＳ誘導的炎癥更敏感逡逑取出小鼠的胃組織，提取組織ＲＮＡ，定量逆轉(zhuǎn)錄并使用熒光定量ＰＣＲ檢測逡逑組織內(nèi)促炎癥基因的表達水平，結(jié)果如圖３－１、３－２所示。逡逑ＩＬ－１０邐ＩＬ－１３逡逑８邋８逡逑＊逡逑＊逡逑６邋－邐ｔ邋６邐－逡逑ｉ２邐Ｉ逡逑Ｏ逡逑＾邐ＷＴ邐ＫＯ邐ＷＴ邐ＫＯ逡逑￡逡逑Ｑ）逡逑之邐ＣＯＸ－２逡逑＾邋６逡逑＊５３逡逑Ｑ：邐＊逡逑４邋－逡逑：：＾邐Ｌ逡逑ＷＴ邐ＫＯ逡逑圖３－１邋ＷＴ與ＫＯ小鼠炎癥基因的表達逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ邋ｇｅｎｅｓ邋ｉｎ邋ＷＴ邋ａｎｄ邋ＫＯ邋ｍｉｃｅ逡逑ＣＯＸ－２邋（環(huán)氧化酶－２），環(huán)氧酶是前列腺素（ＰＧＥ）體內(nèi)自行合成生理途徑中逡逑３４逡逑

ａｇｏｍｉｒ；邋ＬＰＳ：注射邋ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ａｇｏｍｉｒ，后腹腔注射邋ＬＰＳ；邋ｍｉＲ－１４９＊＋ＬＰＳ：注射邋ｍｉＲ－１４９－逡逑３ｐ邋ａｇｏｍｉｒ，再腹腔注射ＬＰＳ。）逡逑從圖３－３Ａ中的實驗結(jié)果可以看出，在尾靜脈注射ｍｉＲ－１４９－３ｐ的ａｇｏｍｉｒ之逡逑后，小鼠胃組織內(nèi)ｍｉＲ－１４９－３ｐ的表達水平上升明顯。實驗結(jié)果表明，ｍｉＲ－１４９－逡逑３ｐ已經(jīng)在胃組織內(nèi)穩(wěn)定的高表達。逡逑從圖３－３Ｂ、Ｃ的實驗結(jié)果可以看出，當小鼠注射ＬＰＳ后，體內(nèi)ＮＦ－ｋＢ信號逡逑通路下游促炎癥基因ＣＯＸ－２、ＩＬ－ｉｐ、ＴＮＦａ的表達水平上調(diào)明顯。ＩＬ－ｌｐ邋（白細逡逑胞介素－１）、ＴＮＦａ邋（腫瘤壞死因子）都是ＮＦ－ｋＢ信號通路下游的重要靶向基因。逡逑文獻報道指出，降低ＩＬ－Ｐ表達水平可以減少小鼠體內(nèi)胃癌的體積［７５］。然而，當逡逑小鼠體內(nèi)高表達ｍｉＲ－丨４９－３ｐ后，體內(nèi)促炎癥基因的表達水平得到了明顯的抑制，逡逑這進一步證實了邋ｍｉＲ－４９－３ｐ具有抑制炎癥的功能。逡逑３．邋１．４邋ＤＥＮ誘導小鼠炎癥模型逡逑選取４周大的雌性ＫＯ小鼠以及ＷＴ小鼠，按體重分組后；小鼠腹腔注射逡逑ＤＥＮ邋（１００邋ｍｇ／Ｋｇ），注射后４８小時處死小鼠，收集小鼠胃部組織并制備組織石逡逑蠟切片，隨后對組織石蠟切片進行一系列病理學檢測。逡逑３．１．４．丨ＤＥＮ處理小鼠ＨＥ染色結(jié)果逡逑ＣＯ＞邐ＤＥＮ逡逑ｍＫｅｍ逡逑圖３－４邋ＤＥＮ處理小鼠胃組織ＨＥ染色逡逑Ｆｉｇ．３－４邋ｔｈｅ邋ＨＥ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ邋ｓｔｏｍａｃｈ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｂｙ邋ＤＥＮ逡逑從圖３－４的ＨＥ染色結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)

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本文編號：2817202