背景皮膚鱗狀細(xì)胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma, cSCC)是人類頭面部和生殖器最常見、危害最大的皮膚惡性腫瘤之一,約占非黑素性皮膚腫瘤的20%。常規(guī)手術(shù)、激光、放療等可直接去除或破壞腫瘤組織,但這些方法存在組織結(jié)構(gòu)破壞性大、易復(fù)發(fā)、復(fù)發(fā)后再次治療困難等問題。由于SCC免疫原性弱,宿主免疫功能缺陷或低下無法誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答,是SCC復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的主要原因。因此,增強(qiáng)腫瘤的免疫原性恢復(fù)腫瘤抗原激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)的能力成為治療腫瘤的有效免疫療法之一。光動力治療(Photodynamic Therapy, PDT)是光敏劑聚集于增生旺盛的組織(如腫瘤組織等),用相應(yīng)波長的光源局部照射,激發(fā)光化學(xué)反應(yīng)導(dǎo)致病變組織破壞的治療方法。PDT不僅能直接殺傷腫瘤細(xì)胞、損傷腫瘤脈管系統(tǒng),而且能產(chǎn)生較多的腫瘤抗原性物質(zhì)(如HSP70、高遷移率蛋白等)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗腫瘤免疫應(yīng)答。課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ALA-PDT后的腫瘤組織局部DC、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞明顯增多,且有較多的炎癥細(xì)胞浸潤和TNF-α, IL-1β, IL-6等炎癥介質(zhì)表達(dá)上調(diào)。樹突狀細(xì)胞(dendritic cell, DC)是目前已知的功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞,是連接適應(yīng)性免疫應(yīng)答和固有免疫應(yīng)答的橋梁,在免疫系統(tǒng)中有著不容忽視的作用。正常情況下,DC表現(xiàn)為未成熟狀態(tài),攝取抗原及遷移能力較強(qiáng),當(dāng)受到腫瘤抗原等刺激以后,DC被誘導(dǎo)成熟,遞呈抗原的能力顯著增強(qiáng),將加工處理過的腫瘤抗原肽-復(fù)合物遞呈給T細(xì)胞,從而啟動宿主的抗腫瘤免疫應(yīng)答。研究表明,腫瘤抗原肽等體外沖擊DC,形成DC疫苗后可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗腫瘤免疫。有報(bào)道稱腫瘤細(xì)胞裂解物與DC共培養(yǎng)制成的DC疫苗能特異性誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞毒性T細(xì)胞反應(yīng),從而對腫瘤產(chǎn)生治療作用并有效預(yù)防腫瘤的發(fā)生。目的研究ALA-PDT處理的PECA細(xì)胞裂解物誘導(dǎo)原代培養(yǎng)的小鼠骨髓來源的DC成熟情況,并進(jìn)一步探討體外ALA-PDT處理的PECA細(xì)胞裂解物沖擊DC所制備的PDT-DC疫苗預(yù)防皮膚鱗癌的療效及作用機(jī)制。方法(1)皮膚鱗癌ALA光動力DC疫苗制備：原代培養(yǎng)SKH-1無毛小鼠骨髓來源DC,以0.5J/cm2的ALA-PDT處理PECA,將得到的細(xì)胞裂解物與DC共培養(yǎng),倒置顯微鏡及透射電鏡觀察DC形態(tài),流式細(xì)胞術(shù)檢測DC表面分子CD80、 CD86及MHC-Ⅱ;(2)皮膚鱗癌ALA光動力DC疫苗預(yù)防皮膚鱗癌的療效觀察：取50只小鼠,分為5組,將PDT-DC疫苗、PDT-PECA瘤苗、F/T-DC疫苗及培養(yǎng)基分別免疫小鼠三次后7天,在小鼠對側(cè)背部皮下注射活PECA細(xì)胞,觀察小鼠腫瘤生長情況,計(jì)算各組小鼠成瘤率,每天測量小鼠體積及體重,觀察皮膚鱗癌ALA光動力DC疫苗預(yù)防皮膚鱗癌的作用；(3)皮膚鱗癌ALA光動力DC疫苗預(yù)防皮膚鱗癌的機(jī)制研究：注射活PECA細(xì)胞7天后,HE及免疫組化檢測局部CD4+T、CD8+T及Treg細(xì)胞浸潤情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測脾細(xì)胞中CD4+T、CD8+T及Treg細(xì)胞的比例,ELISA檢測小鼠外周血IFN-γ, IL-12及IL-10的表達(dá)情況。結(jié)果(1)0.5J/cm2的ALA-PDT處理PECA所得的細(xì)胞裂解物能夠誘導(dǎo)原代培養(yǎng)的DC形態(tài)成熟,同時使得DC表面的CD80、CD86及MHC-Ⅱ類分子表達(dá)上調(diào)；(2)免疫小鼠三次,并在小鼠對側(cè)背部注射PECA細(xì)胞后,PDT-DC疫苗組小鼠未形成腫瘤,PDT-PECA瘤苗、F/T-DC疫苗及腫瘤對照組小鼠的成瘤率分別為50%、90%及100%,所形成的腫瘤體積及老鼠的質(zhì)量隨時間的延長而增加；(3)免疫組化結(jié)果示：PDT-DC疫苗局部的CD4+T及CD8+T細(xì)胞均為陽性,而其余對照組為陰性,所有實(shí)驗(yàn)組的局部Treg細(xì)胞均未見明顯陽性；PDT-DC疫苗組脾細(xì)胞中CD4+T及CD8+T細(xì)胞比例高于其他對照組,Treg細(xì)胞比例低于其他對照組；外周血中IFN-γ及IL-12高于其他對照組,而IL-10則低于其他對照組。結(jié)論0.5J/cm2的ALA-PDT處理的PECA細(xì)胞裂解沖擊DC所制備的PDT-DC疫苗能預(yù)防皮膚鱗癌的發(fā)生。
【學(xué)位單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R739.5
【部分圖文】：

張海艷皮膚淲癌光動力ＤＣ疫苗預(yù)防小鼠皮膚淲癌的療效及免疫機(jī)制研究ＤＣ特征，同時將培養(yǎng)至第７天的ＤＣ經(jīng)ＦＣＭ檢測，小鼠骨髓樹Ｄ１邋Ｉｃ的表達(dá)在７０邋％－８０邋％之間，為７９．７邋％邋（圖１．２）。逡逑Ｈ－１小鼠ＢＭＤＣ培養(yǎng)至第７天倒置顯微鏡Ｋ邋（ｘ４００）邋（Ａ保透射屯乾Ｆ邋0７０

幽２倒置顯微鏡Ｋ未處理ＰＥＣＡ細(xì)胞（Ａ）及經(jīng)０．５邋Ｊ／ｃｍ２ＡＬＡ－陽Ｔ處理后化的ＰＥＣＡ細(xì)胞巧）形勤Ｘ２００）逡逑３致敏ＤＣ形態(tài)變化逡逑將０．５邋Ｊ／ｃｍ２邋ＡＬＡ－ＰＤＴ處理后的ＰＥＣＡ細(xì)胞與體外培養(yǎng)第７天的ＤＣ共培養(yǎng)２４邋ｈ，即為逡逑ＡＬＡ－ＰＤＴ后ＰＥＣＡ細(xì)胞裂解物所誘導(dǎo)的成熟的致敏ＤＣ。倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)為細(xì)胞逡逑表面NB量毛刺狀突起，透射電鏡Ｆ致敏ＤＣ近核區(qū)有較豐富的線粒體，溶酶體明顯增多（３）邋0逡逑

未形成腫瘤，故小鼠體重亦基本巧變化；ＰＤＴ－ＰＥＣＡ瘤苗組成瘤的小鼠腫積逐漸縮小，故該組小鼠體重先增加后減少；Ｆ／Ｔ－ＤＣ疫苗組及腫瘤對照姐成瘤的小鼠體積逐漸增大，兩組小鼠的體重都逐漸增大，但腫瘤對照組小鼠體重略大于Ｆ／Ｔ－ＤＣ組（圖７．２）。逡逑

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本文編號：2816900